簡介：成語屬于非直義語言的一種，以“四字格”為基本形式，是“人們長期以來習(xí)用，形式簡潔而意思精辟的、定型的詞組或短句”，具有結(jié)構(gòu)固定性、語言文言性、意義完整性和語言書面性的特點。影響成語認(rèn)知的因素有詞頻、熟悉度、透明度等岡素，其中表象性作為影響成語認(rèn)知的一個因素，一直以來很少得到研究。表象指的是“人們對感知過的事物形象的反映，是事物不在眼前時關(guān)于事物的心理復(fù)現(xiàn)”，具有直觀形象性和概括性兩個基本特征，包括視覺表象、聽覺表象等。本研究認(rèn)為在對高表象性的成語進(jìn)行加工時，同時激活了言語編碼系統(tǒng)和表象編碼系統(tǒng)，而對低表象性的成語進(jìn)行加工時，只激活了言語編碼系統(tǒng)，因而高表象性成語的加工速度比低表象性成語的加工速度更快，更容易被識別。本研究通過三個實驗來考察影響成語加工的認(rèn)知機(jī)制。實驗一采用內(nèi)隱任務(wù)，即將成語和非成語混合呈現(xiàn)，讓被試對呈現(xiàn)的四字組合進(jìn)行是否是成語的判斷。實驗二采用外顯任務(wù)，讓被試對呈現(xiàn)的成語進(jìn)行表象性判斷。實驗三結(jié)合ERP技術(shù)，探究成語認(rèn)知加工的神經(jīng)機(jī)制。在三種實驗條件下，高表象性成語的反應(yīng)時均比低表象性成語的反應(yīng)時短。同時，實驗三還發(fā)現(xiàn)，成語和非成語均引發(fā)了N200（170230MS），且兩者的波幅沒有顯著差異。與成語相比，非成語引發(fā)了更負(fù)的N400350450MS和更正的LPC（（晚正復(fù)合體）420600MS），兩者差異顯著。與高表象性的成語相比，低表象性的成語引發(fā)了增強(qiáng)的N400350450MS和LPC420600MS，這些結(jié)果可以用雙重編碼理論來解釋，在進(jìn)行詞匯判斷任務(wù)時，高表象性的成語存在表象編碼和言語編碼兩種編碼方式，使得被試能夠很快地從低表象性的成語和非成語中區(qū)分出來高表象性的成語，而低表象性的成語只有言語編碼一種編碼方式，使得其比高表象性的成語加工需要更多地認(rèn)知資源，需要被試投入更多努力，因此導(dǎo)致其識別時間加長，引發(fā)增強(qiáng)的N400和LPC。通過實驗發(fā)現(xiàn)，表象性也是影響成語加工的重要因素。

簡介：四川大學(xué)博士學(xué)位論文CD40配體重組腺病毒聯(lián)合5FU抗腫瘤效應(yīng)的實驗研究姓名吳紅兵申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師魏于全20060501●●●朋川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士專業(yè)學(xué)位論文CD40配體重組腺病毒聯(lián)合5一FU抗腫瘤效應(yīng)的實驗研究研究生吳紅兵導(dǎo)師魏于全教授中文摘要目的惡性腫瘤的治療目前仍以手術(shù)治療、化療和放療為主，而生物治療與化療相結(jié)合韻生物一化療模式是目前綜合治療的發(fā)展方向之一。以免疫細(xì)胞靶向的基因治療策略是當(dāng)前臨床研究的熱點。CD40配體CD40L是腫瘤壞死因子N盯超家族中較重要的成員之一，與其受體CD40特異性結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。CD40LCD40是一對重要的共刺激分子，參與機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫，在腫瘤免疫、直接殺傷腫瘤細(xì)胞、炎癥等病理反應(yīng)中起重要作用。5一氟尿嘧啶5FU是干擾腫瘤細(xì)胞RNA功能，阻止腫瘤細(xì)胞DNA合成的抗代謝類藥物。本研究通過構(gòu)建重組CD40L腺病毒聯(lián)合化療藥物5FU，觀察在小鼠腹腔腫瘤模型中能否產(chǎn)生更強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng)并對其作用機(jī)制進(jìn)行了初步分析。方法1將小鼠MCD40L或人HCD40L基因克隆到穿梭載體PSHUTTLE質(zhì)粒中，得到PSHUTTLEMCD40L和PSHUTTLEHCD40L，并分別將其線性化后與腺病毒骨架質(zhì)粒PADEASY1在大腸桿菌BJ5183中共轉(zhuǎn)化。2將腺病毒質(zhì)粒PACI酶切后，經(jīng)LIPOFEETAMINE脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，2周后得到包裝重組腺病毒ADMCD40L和ADHCD40L，經(jīng)PCR、WESTENBLOT鑒定后大量擴(kuò)增、純化病毒并測定其感染滴度。3流式細(xì)胞術(shù)檢測重組腺病毒ADMCD40L聯(lián)合化療藥5FU，誘導(dǎo)體

簡介：目的觀察雙黃連抗柯薩奇B病毒感染新生大鼠原代心肌細(xì)胞的效應(yīng)并初步探討其機(jī)制結(jié)果高濃度的雙黃連05MGML對新生大鼠原代心肌細(xì)胞有毒性作用050MGML025MGML0125MGML雙黃連能夠顯著抑制柯薩奇B病毒對新生大鼠原代心肌細(xì)胞的CPE降低細(xì)胞上清液的病毒滴度減少感染心肌細(xì)胞肌酸磷酸激酶的釋放分別和病毒對照組相比P病毒感染的新生大鼠原代心肌細(xì)胞的CPE其主要作用環(huán)節(jié)在細(xì)胞外機(jī)制可能與阻止病毒吸附有關(guān)

簡介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文5歲以下兒童輪狀病毒腹瀉流行特征和G、P血清型分型研究姓名宋曉波申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒少衛(wèi)生與婦幼保健學(xué)指導(dǎo)教師陶芳標(biāo)吳金貴20030401圭竺墾壁壟蘭塑主堂壘笙查一結(jié)論輪狀病毒感染是蘇州和馬鞍山5歲以下兒童急性腹瀉的主要致病原因之一，男女兒童感染率無明顯性別差異，血清型G型是優(yōu)勢株，不常見的G3型為蘇州輪狀病毒優(yōu)勢株，G9型出現(xiàn)認(rèn)為可能與動物密切接觸有關(guān)，健康教育是預(yù)防嬰幼兒輪狀病毒持續(xù)性腹瀉的有效措施之一，在3～5個月齡進(jìn)行輪狀病毒疫苗免疫預(yù)防，可能減少輪狀病毒持續(xù)性腹瀉的發(fā)病。關(guān)鍵詞輪狀病毒血清型持續(xù)性腹瀉危險因素流行病學(xué)

簡介：點擊查看更多E型沙眼衣原體MOMP基因重組腺病毒及其轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞的免疫效果研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的了解廣州地區(qū)不同流行年代登革病毒1型的分子流行病學(xué)特征、追蹤傳播來源；探討我國廣州地區(qū)登革病毒流行是否本地化，同時為登革疫苗研究篩選候選疫苗毒株提供一個重要依據(jù)。方法依據(jù)廣州地區(qū)登革病毒1型的流行規(guī)模，選取流行規(guī)模最大的GZ0195、其次GZ0102，流行規(guī)模最小的GZ0104及2006年新出現(xiàn)的毒株GZ1706進(jìn)行研究，利用PRIMER50軟件參考登革病毒L型的標(biāo)準(zhǔn)株SIN27590設(shè)計引物，應(yīng)用RTPCR技術(shù)分別擴(kuò)增GZ0102、GZ0104、GZ1706流行株的E和NS1全基因，利用RTPCR和RACERAPIDAMPLIFICATIONOFCDNAENDS技術(shù)對GZ0195株全基因組序列進(jìn)行擴(kuò)增，獲得的目的基因分別克隆到PGEMTEASY載體并轉(zhuǎn)化DH5Α宿主菌，經(jīng)藍(lán)白斑篩選、PER和酶切鑒定陽性后進(jìn)行序列測定。對測序結(jié)果應(yīng)用DNASTAR軟件進(jìn)行拼接，利用DNASTAR軟件包中的PROTEAN程序分別進(jìn)行氨基酸序列預(yù)測。BLAST比對選取同源性較高的毒株及基因型的代表株，用C1USTALX183軟件進(jìn)行多重比對，應(yīng)用MEGA30軟件中的NJ、ME、MP和UPGMA四種方法進(jìn)行構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。重組分析、計算遺傳距離、同意義性突變率和非同意義性突變率，并以6﹪的核苷酸差異DIVERGENCE作為基因分型的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果1四株登革病毒1型DEN1GZ0195、GZ0102、GZ0104和GZ1706株E基因序列全長均為1485BP，編碼495個氨基酸；核苷酸序列同源性在91﹪984﹪之間，推導(dǎo)的氨基酸序列同源性在96﹪992﹪之間。進(jìn)化分析顯示GZ0195、GZ0102、GZ0104株屬于基因Ⅳ型或南太平洋型，而GZ1706株屬于基因Ⅰ型或亞洲型。E蛋白毒力位點分析發(fā)現(xiàn)四株DEN1的E蛋白的兩個糖基化位點均沒有缺失，在E44E和E156T毒力位點四株病毒均沒有改變，在E366N→S和E蛋白Ⅲ區(qū)毒力位點分析僅GZ0195株的氨基酸發(fā)生了改變。2四株DEN1的NS1基因全長均為1056BP、編碼352個氨基酸，核苷酸序列同源性在91﹪972﹪之間，推導(dǎo)的氨基酸序列同源性在97﹪99﹪之間。進(jìn)化分析顯示GZ0195和IGZ0102株仍屬于基因Ⅳ型即南太平洋型，GZ1706株也和E基因的分析一樣屬于基因Ⅰ型即亞洲型，而GZ0104株卻和E基因的分析不同而屬于基因Ⅰ型。NS1蛋白毒力位點分析顯示四株DEN1在NS1130和NS1207兩個糖基化位點都沒有缺失，僅GZ0195株在B細(xì)胞表位NS1111116區(qū)NS1103發(fā)生了改變T→M。3利用ENS1連接區(qū)240BP序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹顯示GZ0195、GZ0102和GZ1706株基因分型結(jié)果同E和NS1基因的進(jìn)化分析，GZ0195株屬于基因Ⅳ型或南太平洋型SP1和1995年以前印度尼西亞INDO88株同源性最高，推斷1995年廣州地區(qū)登革病毒1型的流行可能是印度尼西亞毒株的輸入；GZ0102株和澳大利亞1983、2000年流行的毒株遺傳距離最近，并且也屬于基因Ⅳ型或南太平洋型SP2，所以2002年廣州地區(qū)登革病毒1型的流行很可能和澳大利亞流行株有關(guān)；GZ1706株都屬于基因Ⅰ型或亞洲型，和ZJ04、泰國2001、泰國2002年流行的毒株都在同一個分枝上且和泰國流行的THAI01、THAI02株同源性均最高，提示廣州地區(qū)2006年流行的登革病毒1型可能來自泰國毒株的輸入。4GZ0104株的ENS1連接區(qū)240BP和NS1基因的分析一致屬于基因I型，重組分析發(fā)現(xiàn)GZ0104株是進(jìn)化過程中來自兩個不同世系的重組株，一個世系來自廣州地區(qū)分離株GZ0102株屬于基因Ⅳ型，另一個世系是我國福建2004年分離株FJ23404屬于基因Ⅰ型。5GZ0195株全基因組序列全長10735BP，9510271為F區(qū)編碼3392個氨基酸。編碼區(qū)CDS的進(jìn)化分析顯示1995年廣州地區(qū)流行的毒株仍屬于基因Ⅳ型和1995年以前印度尼西亞INDO88株同源性最高975﹪，和E、NS1、ENS1基因分析的結(jié)果一致；和GZ0195株同在一個進(jìn)化分支上的還有印度洋國家塞舌爾2003年和2004年、大洋洲國家密克羅尼西亞2004年及南非地區(qū)留尼旺島2004年流行的登革病毒1型毒株，并且同源性在96﹪978﹪之間，提示廣州地區(qū)1995年流行的毒株一直在東南亞、大洋洲、印度洋和南非地區(qū)流行。5UTRDODCODINGREGIONS區(qū)有94個核苷酸，GZ0195株和同源性最高的IND088株比較僅有一個核苷酸的差異，在26位上GZ0195株A一G，導(dǎo)致GZ0195株二級結(jié)構(gòu)在第2030位這段堿基序列形成了2個小環(huán)。3UTR區(qū)有462個核苷酸，GZ0195株和IADO88株有13個核苷酸的差異，突變多發(fā)生在NS5終止密碼子之后的高變區(qū)HBV，均有保守的RCS2、CS2結(jié)構(gòu)，3末端形成長發(fā)夾結(jié)構(gòu)3LSH，但GZ0195株在3LSH的莖上凸出一個環(huán)。毒力位點分析顯示GZ0195株在E、NS1、NS5、3UTR的毒力位點都發(fā)生了變異。結(jié)論本論文對登革病毒1型的進(jìn)化分析表明廣州地區(qū)不同年份流行的登革病毒1型的基因分型不同，廣州地區(qū)登革病毒的流行沒有地域性的限制，并且不同年代流行的毒株核酸有較大的差異，與各毒株同源性最高的毒株均為國外不同的流行株，因此推斷廣州地區(qū)1995、2002、2004和2006年流行的登革病毒1型可能來自境外不同的疫源地。近十多年來廣州地區(qū)幾乎每年都有登革病毒的流行且大部分是DEN1，本論文的進(jìn)化分析仍沒有發(fā)現(xiàn)廣州地區(qū)成為登革病毒疫源地的可靠證據(jù)。GZ0195株的CDS區(qū)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)該世系的毒株一直在東南亞、大洋洲、印度洋和南非地區(qū)流行，毒力位點分析顯示1995年流行株在E、NS1、NS5、3UTR的位點都可能發(fā)生了毒力變異，因此GZ0195株在登革病毒1型中有著重要的代表意義。

簡介：目的通過測定病毒性腦炎患兒治療前血清、腦脊液和治療后血清白細(xì)胞介素6IL6、腫瘤壞死因子ΑTNFΑ、胰島素樣生長因子1IGF1的濃度觀察IL6、TNFΑ和IGF1在病毒性腦炎患兒中的變化探討其在病毒性腦炎患兒發(fā)病中的作用為尋找有效的臨床治療方案提供理論依據(jù)方法對25例病毒性腦炎患兒分為重癥組15例和輕癥組10例采用ELISA法測定兩組患兒治療前血清、腦脊液及治療后血清中的IL6、TNFΑ和IGF1的水平并與正常對照組10例比較應(yīng)用SPSS100軟件統(tǒng)計分析采用中位數(shù)MANNWHINEY檢驗SPEARMAN作相關(guān)分析P005無統(tǒng)計學(xué)意義結(jié)論病毒性腦炎患兒治療前血清和腦脊液IL6和TNFΑ水平顯著升高病情越重升高越明顯免疫因素參與了病毒性腦炎的發(fā)病過程IGF1在病毒性腦炎患兒腦脊液中升高血清中降低病情越重變化越明顯IGF1對病毒性腦炎患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能具有保護(hù)作用

簡介：點擊查看更多血清淀粉樣蛋白A在慢性丙型肝炎病毒感染者中的表達(dá)及其臨床意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多攜帶CARex和PTDtat的重組5型腺病毒的獲得及其對日本血吸蟲童蟲感染效率的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：持久性有毒物質(zhì)PERSISTENTTOXICSUBSTANCES，PTSS能夠抵抗光分解、化學(xué)分解和生物降解作用，通過大氣、淡水和海洋的流動發(fā)生遠(yuǎn)距離乃至全球范圍的擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，表現(xiàn)為持久而廣泛地分布于自然界中，同時具有高疏水性特征，并且能夠在生物體內(nèi)形成富集，干擾機(jī)體內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，影響體內(nèi)激素的合成、釋放、轉(zhuǎn)運、代謝及結(jié)合等過程，干擾血漿中正常激素水平的維持，對機(jī)體的生殖發(fā)育障礙、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多方面產(chǎn)生影響；而且此類物質(zhì)可以通過食物鏈產(chǎn)生生物放大效應(yīng)。目前，對PTSS的關(guān)注已經(jīng)由原來的僅僅是自然環(huán)境、野生生物而擴(kuò)大到今天的人類健康。針對三峽水庫蓄水后，重慶地區(qū)水環(huán)境發(fā)生巨大變化，據(jù)前期曹佳、舒為群教授等研究發(fā)現(xiàn)長江、嘉陵江優(yōu)勢污染物鄰苯二甲酸二丁酯DIBUTYLPHTHALATE，DBP最高濃度達(dá)948ΜGL，而從主城區(qū)5個自來水廠出廠水中共檢測出82種有機(jī)污染物，其中以嘉陵江為水源的出廠水檢測出63種，以長江為水源的出廠水檢測出30種，對污染狀況與人群健康的研究刻不容緩。為深入了解現(xiàn)階段PTSS污染的狀況及其對健康的遠(yuǎn)期危害，以及了解人群健康效應(yīng)的變化狀況，故而我們分別從實驗室在細(xì)胞和分子水平觀察三峽庫區(qū)水優(yōu)勢污染物鄰苯二甲酸二丁酯的神經(jīng)細(xì)胞毒性效應(yīng)，并且深入人群研究，觀察環(huán)境因素與兒童行為認(rèn)知發(fā)育異常的相關(guān)關(guān)系，為促進(jìn)人群健康提供科學(xué)依據(jù)。方法1實驗室研究1體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞株P(guān)C12細(xì)胞，培養(yǎng)基分別含有5，125，25，50，100，200MGLDBP，作用24，48，72和96小時后，用細(xì)胞計數(shù)CCK8法檢測細(xì)胞的存活和生長；臺盼藍(lán)拒染法繪制生長曲線；2乳酸脫氫酶LDH，LACTATEDEHYDROGENASE釋放檢測細(xì)胞損傷程度；DNTB法測定谷光苷肽過氧化物酶GSHPX，GLUTATHIONEPEROXIDASE活性，丙二醛比色法測定丙二醛MDA，MALONDIALDEHYDE含量；3DNA凝膠電泳檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡。4RTPCR檢測P53，BCL2，BAX等凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化情況。2流行病學(xué)研究以24例行為認(rèn)知發(fā)育異常兒童為病例、96名行為認(rèn)知發(fā)育正常兒童為對照，進(jìn)行1∶4匹配病例對照研究。病例和對照均來自重慶市婦幼保健院兒童保健科常規(guī)保健兒童。同時，按病例對照分組隨機(jī)抽樣獲取10％兒童，進(jìn)行外環(huán)境暴露因素測量。數(shù)據(jù)處理采用條件LOGISTIC回歸進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果1實驗室研究CCK8檢測結(jié)果顯示濃度在125～200MGL的DBP劑量暴露對PC12細(xì)胞株處理24～96小時，對PC12細(xì)胞生長存在顯著的抑制作用，并呈劑量－效應(yīng)關(guān)系。PC12細(xì)胞暴露于DBP48小時，LDH釋放增多；GSHPX活性降低，MDA含量增高；DNA凝膠電泳結(jié)果顯示處理組出現(xiàn)明顯的“DNALADDER”。DBP在125MGL時凋亡相關(guān)基因均有相關(guān)表達(dá)，其中P53基因表達(dá)增加，BAX基因表達(dá)增高，BCL2基因表達(dá)降低，且與DBP暴露呈劑量相關(guān)關(guān)系。2流行病學(xué)研究重慶市婦幼保健院兒童保健科搜集病例及對照共120例病例24人，對照96人。男童17組，占708％；女童7組，占292％；性別比例為243∶1。病例組和對照組平均年齡分別為275±115和275±113歲。經(jīng)均衡性檢驗，病例組和對照組性別、年齡分布差別均無統(tǒng)計學(xué)意義，均衡性良好。單因素LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示，與行為認(rèn)知發(fā)育相關(guān)的因素有魚類、大蒜、土豆、豆奶、蘋果、梨子、黑木耳、金針菇、銀耳、海帶、紫菜、兒童患哮喘、母親鍛煉習(xí)慣、母親洗澡淋浴時間、母親染料接觸史、父親食欲下降。與兒童行為認(rèn)知發(fā)育無關(guān)的因素有飲水區(qū)域、性別、民族、父母親職業(yè)、父母親文化程度、家庭居住條件，兒童年齡、出生身長、現(xiàn)身長、出生體重、現(xiàn)體重、兒童好動性、易分心、易忘記任務(wù)、易感冒、易患牙齦炎及先天性疾病等因素，其他營養(yǎng)及飲食特征，母親其他生活習(xí)慣及環(huán)境暴露史，母親其他既往史，父親健康相關(guān)狀況，兒童免疫學(xué)相關(guān)指標(biāo)血清IGA，溶菌酶、性激素水平，雌激素之雌二醇，雄激素之睪酮，血鉛水平。多因素條件LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示，按照值大小排列如下，母乳喂養(yǎng)時間0385，95％CI0167～0890，母親鍛煉習(xí)慣0293，95％CI0133～0648，母親洗澡淋浴時間85769，95％CI4161～1767867，大蒜0138，95％CI0021～0893，黑木耳0009，95％CI0000～0324，梨子0007，95％CI0000～0212，兒童患哮喘865931，95％CI10363～72356316，紫菜293732，95％CI7177～12020984，金針菇17612，95％CI1839～168679。其中以兒童患哮喘與兒童行為認(rèn)知發(fā)育異常的關(guān)聯(lián)最大；母乳喂養(yǎng)期越長，兒童行為認(rèn)知發(fā)育異常的危險性越低；母親良好的鍛煉習(xí)慣同樣是保護(hù)性因素；母親更長的洗澡淋浴時間則是兒童行為認(rèn)知發(fā)育的危險性因素；大蒜、梨子、黑木耳的食用是兒童行為認(rèn)知發(fā)育的保護(hù)性因素；而金針菇和紫菜的食用是兒童行為認(rèn)知發(fā)育的危險性因素。通過氣相色譜－質(zhì)譜分析和原子吸收光譜法檢測，病例組和對照組兒童的食物、飲水、空氣中持久性毒物檢測結(jié)果不存在統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論1實驗室研究結(jié)論1采用多劑量鄰苯二甲酸二丁酯對類神經(jīng)細(xì)胞PC12細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性實驗，通過臺盼藍(lán)染色，CCK8細(xì)胞增殖檢測實驗，細(xì)胞生長曲線等方法的檢測，發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二丁酯濃度達(dá)125MGL時即對PC12細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞生長活性明顯下降，并且呈劑量相關(guān)關(guān)系。2通過乳酸脫氫酶釋放實驗，觀察乳酸脫氫酶在細(xì)胞上清液中的釋放濃度，發(fā)現(xiàn)一定劑量鄰苯二甲酸二丁酯暴露導(dǎo)致PC12細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放增多，并且呈對數(shù)相關(guān)關(guān)系，提示細(xì)胞膜損傷作用的存在。3通過谷胱甘肽過氧化物酶活性和丙二醛含量檢測實驗，觀察在細(xì)胞上清液中谷胱甘肽過氧化物酶活性變化以及丙二醛含量的檢測，發(fā)現(xiàn)一定劑量鄰苯二甲酸二丁酯暴露導(dǎo)致PC12細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性降低，并且呈指數(shù)相關(guān)關(guān)系；鄰苯二甲酸二丁酯暴露導(dǎo)致PC12細(xì)胞的丙二醛含量增多，并且呈對數(shù)相關(guān)關(guān)系。提示其誘導(dǎo)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，干擾活性氧的平衡，誘發(fā)氧化應(yīng)激。4通過細(xì)胞DNA電泳實驗，在DNA水平觀察DNALADDER的電泳結(jié)果，發(fā)現(xiàn)對照組及5MGL組鄰苯二甲酸二丁酯暴露未促進(jìn)PC12細(xì)胞凋亡發(fā)生，而125MGL及更高濃度組鄰苯二甲酸二丁酯暴露出現(xiàn)典型DNALADDER出現(xiàn)，即促進(jìn)PC12細(xì)胞凋亡發(fā)生。5通過RTPCR實驗，觀察不同劑量DBP對細(xì)胞的凋亡家族相關(guān)基因表達(dá)水平，對PC12細(xì)胞擴(kuò)增P53，BAX，BCL2基因，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)為上調(diào)P53和BAX，下調(diào)BCL2。說明其凋亡作用的實現(xiàn)與凋亡家族相關(guān)基因P53，BAX，BCL2表達(dá)水平調(diào)節(jié)相關(guān)。2流行病學(xué)研究結(jié)論通過流行病學(xué)病例對照研究，對120名兒童進(jìn)行有關(guān)流行病學(xué)調(diào)查，GESELL量表發(fā)育測試，免疫功能指標(biāo)檢測，性激素水平測定，血鉛濃度測定，以及10％兒童外環(huán)境中采用氣相色譜－質(zhì)譜分析以及原子吸收光譜分析對食物、飲水、空氣的相關(guān)持久性毒物濃度測定，分析結(jié)果如下1發(fā)現(xiàn)兒童行為認(rèn)知發(fā)育與母乳喂養(yǎng)時間，大蒜，梨子，黑木耳，金針菇，紫菜，兒童患哮喘，母親鍛煉習(xí)慣，母親洗澡淋浴時間有關(guān)，與飲水區(qū)域無關(guān)。2兒童外環(huán)境暴露的抽樣觀察中，鄰苯二甲酸二丁酯及重金屬鉛的污染水平較低，其中食物中未檢出鄰苯二甲酸二丁酯，空氣和飲水中均檢出鄰苯二甲酸二丁酯，但水平很低，分別是0005～43ΜGL水和0004～013ΜGL空氣?？諝夂惋嬎畼颖镜臋z出水平在地區(qū)分布上存在一致性的趨勢，通過城區(qū)采樣點模擬地圖觀察分析，交通發(fā)達(dá)地區(qū)檢出水平較高。未觀察到病例組和對照組兒童的食物、飲水、空氣中持久性毒物的濃度存在統(tǒng)計學(xué)差異?？傊?，本文以重慶婦幼保健院2～5歲兒童為研究對象，觀察與兒童行為認(rèn)知發(fā)育損傷的相關(guān)因素，為國內(nèi)后續(xù)相關(guān)研究提供有力的科學(xué)依據(jù)。

簡介：目的通過腺病毒介導(dǎo)TGFΒ1基因轉(zhuǎn)染兔骺板軟骨細(xì)胞EPIPHYSEALCHONDROCYTES，ECS，觀察TGFΒ1的表達(dá)及ECS合成和分泌軟骨基質(zhì)的情況，為構(gòu)建新型的組織工程骺板軟骨提供實驗依據(jù)。方法⑴利用3周齡新西蘭大白兔股骨遠(yuǎn)端骺板軟骨，分離出ECS并傳代培養(yǎng)，觀察ECS生長情況并鑒定。選用第3代ECS進(jìn)入下一步基因轉(zhuǎn)染。⑵構(gòu)建攜帶TGFΒ1基因的腺病毒載體。⑶分3組進(jìn)行轉(zhuǎn)染分別為TGFΒ1載體組、空載體組和空白組。轉(zhuǎn)染后在倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)以及增殖情況；并在熒光顯微鏡下觀察各組病毒轉(zhuǎn)染情況，同時計算轉(zhuǎn)染效率。利用MTT法檢測重組腺病毒轉(zhuǎn)染后的ECS增殖能力是否有明顯變化。應(yīng)用ELISA法檢測轉(zhuǎn)染后收集到的各組培養(yǎng)液中的TGFΒ1濃度。應(yīng)用Ⅱ型膠原免疫熒光評價轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的成軟骨能力。采用RTPCR檢測各組細(xì)胞TGFΒ1MRNA的表達(dá)情況，并用WESTERNBLOT檢測各組細(xì)胞Ⅱ型膠原和TGFΒ1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果①成功的從兔骺板軟骨中分離出ECS，并進(jìn)行了傳代培養(yǎng)及鑒定。②在熒光顯微鏡下觀察各組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)TGFΒ1載體組和空載體組有較多熒光細(xì)胞出現(xiàn)，而空白組始終沒有出現(xiàn)熒光細(xì)胞，細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功。通過MTT法檢測證明，腺病毒介導(dǎo)TGFΒ1基因轉(zhuǎn)染后的ECS的增殖能力短期內(nèi)沒有影響。③轉(zhuǎn)染14D后，TGFΒ1載體組免疫熒光觀察到Ⅱ型膠原較對照組明顯增強(qiáng)。④RTPCR檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組標(biāo)本中TGFΒ1MRNA的表達(dá)較對照組明顯增強(qiáng)。4、WESTERNBLOT結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組中COLLAGENⅡ和TGFΒ1表達(dá)也明顯增強(qiáng)。結(jié)論⑴成功的從兔骺板軟骨中分離出ECS，并進(jìn)行了傳代培養(yǎng)及鑒定，證實了第3代ECS表型穩(wěn)定，骺板軟骨細(xì)胞的生物學(xué)及功能學(xué)特性表達(dá)良好。⑵成功的構(gòu)建了攜帶TGFΒ1基因的重組腺病毒載體，并運用重組腺病毒載體成功轉(zhuǎn)染ECS，且轉(zhuǎn)染率高，對細(xì)胞毒性小。⑶利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將TGFΒ1基因轉(zhuǎn)染至ECS，可增強(qiáng)ECS合成和分泌軟骨基質(zhì)。

簡介：乙型肝炎病毒HBV的宮內(nèi)感染是中國HBV攜帶者和慢性乙型肝炎發(fā)生的重要原因胎兒期的HBV感染不僅易形成以后的慢性攜帶狀態(tài)而且是肝硬化和肝癌HCC的高危因素迄今為止有關(guān)HBV宮內(nèi)感染的確切定義尚不十分一致新生兒出生時外周血查出HBV血清標(biāo)志物和HBVDNA可為宮內(nèi)感染亦可為宮內(nèi)傳播以往對HBV宮內(nèi)感染的研究包括感染源、感染途徑和機(jī)制、高危因素、感染時間、發(fā)生率、以及預(yù)防、診斷、治療、預(yù)后等多個方面普遍認(rèn)為宮內(nèi)傳播是病毒透過胎盤屏障而發(fā)生有人提出了血液途徑、細(xì)胞途徑及外周血單個核細(xì)胞PBMC途徑等可能的機(jī)制該研究通過定量檢測不同孕齡孕婦及胎兒血液、細(xì)胞、組織的HBV標(biāo)志物探討HBV宮內(nèi)傳播與感染的關(guān)系、臍血檢測診斷宮內(nèi)感染的可靠性、孕婦外周血病毒載量與宮內(nèi)感染量化關(guān)系及PBMC在宮內(nèi)感染的可能作用

簡介：乙型肝炎病毒HBV感染是世界范圍的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題之一，但是目前沒有特效防治方法，存在的關(guān)鍵問題在于HBV基因組較小，易發(fā)生突變，限制了靶向病毒的抗病毒藥物的發(fā)展。最近的研究表明，抑制宿主細(xì)胞中某些蛋白的功能可以阻斷病毒感染。與病毒基因組相比，人類基因組序列中可能包括更多與病毒復(fù)制有關(guān)的基因。應(yīng)用DNA微陣列芯片技術(shù)系統(tǒng)分析宿主基因表達(dá)，是一種從宿主細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)潛在抗病毒靶標(biāo)的有效方法。因此，本課題旨在應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選和驗證宿主細(xì)胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標(biāo)，為新型抗病毒藥物的篩選奠定基礎(chǔ)。本研究利用人類全基因組芯片比較了HEPG2215細(xì)胞與HEPG2細(xì)胞表達(dá)譜差異，并研究了HEPG2215細(xì)胞經(jīng)抗HBV藥物干預(yù)前后細(xì)胞基因表達(dá)譜變化情況，篩選出在HBV感染后差異表達(dá)、而藥物干預(yù)后表達(dá)逆轉(zhuǎn)的基因，獲得了可能的HBV感染關(guān)鍵分子。通過RTPCR、WESTERN印跡技術(shù)驗證以及生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)ABHD2、EREG、ACVR2B、CDC34、KHDRBS3、RA可能成為肝細(xì)胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標(biāo)。在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用反義技術(shù)等途徑抑制肝細(xì)胞中上述基因的表達(dá)或功能，發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)ABHD2、EREG的表達(dá)受到抑制時，HEPG2215細(xì)胞內(nèi)HBV的復(fù)制才受到明顯抑制，為證明ABHD2和EREG成為抗HBV藥物作用靶點的可能性提供了有力證據(jù)。由于多靶點聯(lián)合治療已逐漸成為抗乙型肝炎病毒治療中的熱點，在前期工作的基礎(chǔ)上將以前篩選出的抗HBV感染的作用靶標(biāo)ASGPR、FIBRONECTIN、ABHD2、EREG分別與臨床常用的抗HBV藥物拉米夫定聯(lián)合用藥，從而篩選出組合作用較好的聯(lián)合用藥組，為臨床聯(lián)合抗病毒治療提供了新的思路和依據(jù)。綜上所述，本研究通過篩選和初步驗證確定ABHD2、EREG可能成為抗HBV藥物的新型作用靶點，且已篩選出的靶點中，ASGPR、FIBRONECTIN、EREG與拉米夫定聯(lián)合用藥后對IIBV的抑制呈現(xiàn)很好的協(xié)同作用。

簡介：本文對我國保存的H3N2亞型流感毒株進(jìn)行系統(tǒng)的序列測定和分析。以闡明我國H3N2亞型流感HA1基因變異特征，比較中國流行毒株與WHO每年推薦疫苗株的相關(guān)性。首先，整理國家流感中心歷年來保留的毒種和相應(yīng)的毒株背景信息記錄，建立毒株數(shù)據(jù)庫。為了全面代表中國流行毒株特征，按以下原則選取毒株，每年按照毒株分離的省區(qū)不同，選取不同分離月份的毒株進(jìn)行測序。有些年代毒株數(shù)量少于10個，全部測序。毒株依據(jù)原傳代史用雞胚或細(xì)胞復(fù)蘇。提取核酸后用RTPCR方法擴(kuò)增HA1基因片段。對PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列測定。采用CLASTALX進(jìn)行序列的多重比對，使用BIOEDIT進(jìn)行序列的差異分析，使用MEGAVERSION31軟件繪制基因種系發(fā)生樹，并進(jìn)行核苷酸和氨基酸的變異速率和距離分析。將我國每年的H3N2序列代表株與WHO推薦的疫苗株進(jìn)行序列比較分析。共整理1956～2005年的國家流感中心保存的流感病毒11232株，其中H3N2亞型病毒5537株，按選取原則，選取H3N2病毒進(jìn)行HA1基因擴(kuò)增，成功測序732株。分析結(jié)果如下1從中國歷年病毒與1968年病毒的距離可以看出，H3N2亞型流感病毒在中國各地區(qū)的進(jìn)化是按時間先后進(jìn)行的。H3N2流行的高峰期全國各地區(qū)的序列一致性較強(qiáng)。在H3N2流行的間期病毒序列間差異較大。2H3N2亞型流感病毒HAL區(qū)核苷酸和氨基酸的進(jìn)化樹均呈典型的階梯形，以單一主干向上發(fā)展，樹的側(cè)枝很短，主干很長，顯示出新舊毒株的更替很快。HA1的核苷酸進(jìn)化樹與氨基酸進(jìn)化樹相比有更多的分支，氨基酸樹比核苷酸樹分支分組更為明顯。3中國1989～1990年、1992～1993年和1998～1999年的流行期北方分離的病毒比南方分離病毒更遠(yuǎn)，推測這三次H3N2流行是從中國南方傳到北方。而1995～1996年和2000～2004年沒有明顯的南北方距離差異。4中國1968～1990年間測序毒株HA1序列結(jié)合NCBI下載的HA1序列，通過與1968年病毒距離得出變異速率，結(jié)果表明1968～1978年病毒HA的變異速率高于1979～1990年。通過與1980年病毒的距離，算出中國1980～2005年間H3N2亞型流感病毒的HAL區(qū)的核苷酸變異速率為4710SUBSTITUTIONSYEAR，推導(dǎo)的氨基酸的變異速率為6110REPLACEMENTSYEAR。5高變的位點和穩(wěn)定變化的位點多是已知的抗原位點及其附近的位點。受體結(jié)合位點在1992年后變異的速率比1992年前更快，尤其是220環(huán)區(qū)及附近。HA1區(qū)1968年有6個潛在糖基化位點，其中5個維持不變，到1999年逐漸增加到11個后到2005年沒有改變，其改變與流行相關(guān)。H3N2亞型流感病毒HA1的氨基酸位點每年變異的幅度不同，有的年位點多，有的年少。6通過HA1序列資料分析發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致H3N2流行的三種方式，第一種是同時出現(xiàn)多位點變化，第二種是位點變化逐漸發(fā)生累積到多個位點變化，第三種是單個抗原位點和受體結(jié)合位點同時改變。7從HA1序列上看中國流行H3N2亞型毒株與WHO推薦的多株疫苗不匹配，疫苗株處于滯后狀態(tài)。本研究分析整理并測定了19682005年間H3N2流感病毒732株，通過序列分析發(fā)現(xiàn)HA1序列是按時間進(jìn)化的，H3N2病毒在流行的前10年變異的速度較快。通過對變異位點的分析，發(fā)現(xiàn)抗原位點的不斷變化，受體結(jié)合位點的變異和潛在糖基化位點的改變共同促進(jìn)HA的進(jìn)化，引起H3N2亞型流感的新流行。同時出現(xiàn)多位點變化，逐漸發(fā)生累積到多個位點變化，單個抗原位點和受體結(jié)合位點同時改變?nèi)N變異方式均可引起H3N2新的流行。將WHO推薦的疫苗株與中國每年流行毒株的HA1序列進(jìn)行比較，有多株疫苗株比中國的流行株要滯后。本文首次對我國的H3N2的歷史毒株進(jìn)行系統(tǒng)研究，為H3N2的HA1基因的未來變異研究提供一定的依據(jù)。

簡介：乙型腦炎是由乙型腦炎病毒JEV感染所引起的一種危害嚴(yán)重的蟲媒性人畜共患病。該病毒主要經(jīng)過擴(kuò)增宿主豬和媒介昆蟲蚊子進(jìn)行傳播。豬是其主要的擴(kuò)增宿主和傳染源。感染后可引起母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及公豬發(fā)生睪丸炎，不僅給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，而且還嚴(yán)重威脅著人類健康。臨床準(zhǔn)確診斷是有效防控該病的重要途徑。但由于傳統(tǒng)的病毒分離鑒定方法操作復(fù)雜、難度大、周期長，而RTPCR等分子生物學(xué)方法雖然敏感，但操作技術(shù)要求高、需要特殊儀器設(shè)備、且易出現(xiàn)假陽性，因此，簡便、準(zhǔn)確、快速的抗原檢測方法顯得尤為迫切。本研究利用乙型腦炎病毒單克隆抗體和多克隆抗體，建立了可用于檢測豬、人和蚊子等多種臨床樣品中乙型腦炎抗原的雙抗體夾心ELISA方法，并制備了試劑盒，為乙型腦炎的臨床快速診斷提供了有效工具。具體研究內(nèi)容如下1JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立本研究制備了兔源乙型腦炎病毒多克隆抗體。在此基礎(chǔ)上，以已經(jīng)獲得的JEVE蛋白單克隆抗體作為一抗包被酶標(biāo)板，兔源JEV多克隆抗體作為二抗，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體與二抗反應(yīng)，并通過催化底物顯色以檢測樣品中是否含有JEV抗原。經(jīng)過方陣滴定，確定了一抗的最佳包被濃度為5ΜGML，二抗和辣根標(biāo)記抗體的最佳稀釋度分別為110000和130000。敏感性試驗表明，該方法的敏感性可達(dá)到104PFUML，并且該方法不與其它常見的豬流行病病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，對5份樣品進(jìn)行重復(fù)性檢驗的變異系數(shù)分別為760、670、670、760、440，均小于10，將包被的酶標(biāo)板置于37℃連續(xù)5天，標(biāo)準(zhǔn)陰陽性對照的OD值均沒有發(fā)生明顯變化。以上結(jié)果說明，本研究所建立的JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法具有敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。2JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的臨床初步應(yīng)用分別用RTPCR方法和制備的雙抗體夾心ELISA試劑盒對60份臨床樣品進(jìn)行檢測包括16份人腦脊液樣品、20份蚊子樣品、24份豬腦樣品，并將二者檢測結(jié)果進(jìn)行對比。結(jié)果表明與RTPCR方法相比，JEV雙抗體夾心ELISA檢測方法的陽性符合率為70，陰性符合率為100，總符合率可達(dá)到90。說明本研究建立的JEVELISA抗原檢測方法與RTPCR方法具有較高的符合率，可以作為JEV臨床快速檢測的有效工具。