簡介：目的（1）尾靜脈注射腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素ADENOASSOCIATEDVIRUSANGIOSTATINRAAVAS，檢測RAAVAS在糖尿病腎病大鼠腎臟是否能夠穩(wěn)定表達(dá)，探討RAAVAS對糖尿病腎病大鼠腎臟的作用；（2）觀察糖尿病腎病大鼠腎組織中轉(zhuǎn)化生長因子Β1（TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1TGFΒ1）和血管內(nèi)皮生長因子VESSELENDOTHELIUMGROWTHFACTVEGF的表達(dá)，探討腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素對糖尿病大鼠腎組織TGFΒ1和VEGF表達(dá)的影響。方法清潔級SDSPRAGUEDAWLEY雄性大鼠隨機(jī)分為正常組（NC組，N10），其余大鼠使用鏈脲佐菌素（STREPTOZOTOCINSTZ）60MGKG腹腔注射誘導(dǎo)糖尿病模型，分為糖尿病腎病組（DN組N10），腺相關(guān)病毒空載體組（RAAV0N10）腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素組（RAAVAS，N30），包括腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素低劑量治療組（AS1N1011012VGKGBW），腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素中劑量治療組（AS2N1021012VGKGBW），腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素高劑量治療組（AS3N1041012VGKGBW）；尾靜脈注射給藥8周末免疫印跡法檢測腎組織中血管抑素的表達(dá)，檢測各組大鼠的腎指數(shù)（KIDNEYINDEXKI）及生化指標(biāo)變化，光鏡觀察大鼠腎組織結(jié)構(gòu)，免疫組化法檢測腎組織中轉(zhuǎn)化生長因子（TGFΒ1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)變化。結(jié)果（1）STZ誘導(dǎo)糖尿病造模的成功率為90％；（2）免疫印跡法結(jié)果DN組基本不表達(dá)AS，給予RAAVAS治療后，大鼠腎組織中AS表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)差異P（3）DN組的KI、MAU、BUN、SCR、GLU、HBA1C明顯增高，給予中劑量和高劑量RAAVAS治療后，MAU、BUN、SCR明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P（4）腎組織病理學(xué)變化DN組腎小球細(xì)胞數(shù)顯著增多，毛細(xì)血管袢塌陷管腔閉塞腎小球體積增大淋巴細(xì)胞數(shù)量增多；腎小管尤其是近曲小管腫脹、變性、空泡形成腎間質(zhì)可見大量淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤。給予中劑量和高劑量RAAVAS治療后，病變明顯減輕；（5）免疫組化結(jié)果DN組的TGFΒ1和VEGF表達(dá)明顯增多，給予中劑量和高劑量RAAVAS治療后，TGFΒ1和VEGF表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P結(jié)論（1）腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素可以在腎組織中持續(xù)較高水平的表達(dá)；（2）尾靜脈注射一定劑量（大于21012VGKGBW）的腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素對大鼠糖尿病腎病具有保護(hù)作用，且這種保護(hù)作用不依賴于血糖的降低；（3）腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素可通過降低糖尿病大鼠腎組織中TGFΒ1、VEGF的表達(dá)，而對糖尿病腎病大鼠腎臟起保護(hù)作用。

簡介：第一部分目的本文研究的ΒLD4A是一種新型核苷類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同于3TC，其堿基不是C胞嘧啶，而是A腺嘌呤，戊糖環(huán)呈不飽和雙鍵結(jié)構(gòu)。在研究中，采用乙型肝炎病毒基因轉(zhuǎn)染的人肝癌細(xì)胞系221細(xì)胞作為細(xì)胞模型，研究ΒLD4A對2215細(xì)胞HBV的抑制作用及細(xì)胞毒性研究，初步探討ΒLD4A體外抗HBV作用。方法2215細(xì)胞用胰酶消化液消化以濃度1105WELL接種于24孔培養(yǎng)板每孔110ΜL加DMEM培養(yǎng)液15ML，于5％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)48時后細(xì)胞貼壁生長良好。三組分別換含不同藥物濃度的培養(yǎng)液陽性對照組加含3TC的培養(yǎng)液，空白對照每孔加15ML含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液。本實(shí)驗(yàn)室既往研究顯示2215細(xì)胞接種后第1天在培養(yǎng)液上清中即可檢測到抗原分泌，隨著培養(yǎng)時間延長，病毒抗原分泌量逐漸增加，到接種后第7～8天達(dá)到高峰，此后抗原分泌逐漸穩(wěn)定。結(jié)果（略）結(jié)論2215細(xì)胞是用含有2個頭尾相連HBVDNA全基因的表達(dá)質(zhì)粒和帶有耐新霉素基因的載體共轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株HEPG2而建立的，該細(xì)胞株能長期穩(wěn)定地向培養(yǎng)上清液中分泌病毒蛋白和完整的病毒顆粒，而且還能產(chǎn)生大量的病毒復(fù)制中間體，是體外篩選抗HBV藥物較好的細(xì)胞模型。正如已有研究所證實(shí)的，2215細(xì)胞穩(wěn)定分泌HBSAG、HBEAG并具備一定的規(guī)律性，本實(shí)驗(yàn)中也觀察到的，2215細(xì)胞在接種24孔板次日即可檢測到HBSAG、HBEAG的分泌，隨著接種時間延長，抗原分泌逐漸增加，到接種后78天抗原分泌達(dá)高峰，以后呈現(xiàn)平臺現(xiàn)象。正是這種穩(wěn)定性是短暫表達(dá)細(xì)胞系和共轉(zhuǎn)染體系所無法比擬的，而且2215細(xì)胞內(nèi)存在整合型HBVDNA，可長期產(chǎn)生HBV及其抗原，排泌功能可保持12月之久，因而可以完整再現(xiàn)HBV的復(fù)制和表達(dá)，在進(jìn)行抗HBV治療研究中，可以進(jìn)一步探討治療機(jī)理，通過SOUTHERNBLOT斑點(diǎn)雜交，NTHERNBLOT，ELISA，WESTERNBLOT等方法可以判斷藥物是在復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或表達(dá)的哪一個環(huán)節(jié)上產(chǎn)生抗病毒活性的，從而為進(jìn)一步研究HBV生物學(xué)特性、致病機(jī)制以及乙型肝炎的預(yù)防、診斷及治療等奠定基礎(chǔ)。本課題采用實(shí)時熒光定量PCR法檢測細(xì)胞內(nèi)HBVDNA含量的變化，說明ΒLD4A的抗HBV活性。在本研究中發(fā)現(xiàn)，ΒLD4A以濃度依賴性的方法抑制HBVDNA復(fù)制，與3TC作用類似。根據(jù)檢測結(jié)果依REEDMUENCH方法計算IC50，ΒLD4A和3TC的IC50值分別是061UM、030UM。ΒLD4A對HBSAG表達(dá)的抑制效應(yīng)不如對HBVDNA復(fù)制的抑制效應(yīng)明顯。當(dāng)ΒLD4A在最高濃度100UMOLL時對HBSAG表達(dá)抑制效率略高于50％。當(dāng)藥物濃度低于125UM，ΒLD4A和3TC的細(xì)胞毒性都不明顯。當(dāng)藥物濃度在1000UM時，細(xì)胞存活率低于50％。根據(jù)REEDMUENCH方法計算兩種藥物的TD50值，ΒLD4A和3TC分別為417UM和243UM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其為高效低毒的抗HBV藥物。ΒLD4A是一中新型的L構(gòu)型的核苷類似物，為DATP的結(jié)構(gòu)類似物。ΒL23－雙脫氧－3－硫胞嘧啶核苷即拉米夫定，是具有代表性的一類L構(gòu)型的核苷類化合物，研究發(fā)現(xiàn)抗病毒的效應(yīng)是其D構(gòu)型的對映異構(gòu)體的50倍。推測ΒLD4A象其他的核苷類抗病毒藥物一樣，通過抑制HBV聚合酶功能來抑制HBV基因組的復(fù)制。為了證實(shí)這個推測需要進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。也需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究來確定ΒLD4A是否對有拉米夫定抗性的病毒株有抑制效應(yīng)，及這個化合物本身能否誘導(dǎo)HBV耐藥株或突變株的出現(xiàn)。除此之外，還需要進(jìn)行這個化合物的代謝、毒性和藥代動力學(xué)方面的研究。本實(shí)驗(yàn)對ΒLD4A進(jìn)行了初步的研究，證實(shí)ΒLD4A在體外具有抗HBV的效應(yīng)，為將來的臨床應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。第二部分目的一些抗HBV的藥物已經(jīng)應(yīng)用于臨床，包括干擾素和核苷類藥物如拉米夫定。當(dāng)前抗HBV藥物開發(fā)的熱點(diǎn)集中于核苷類HBV聚合酶抑制劑的研究。HBV聚合酶有RNA依賴的逆轉(zhuǎn)錄、DNA依賴的DNA聚合和RNASEH的功能，這種多功能的酶是核苷類抗病毒藥物的作用靶點(diǎn)。BETAL23雙脫氫23雙脫氧呋喃腺嘌呤核苷（ΒLD4A）是天然的脫氧腺嘌呤核苷的結(jié)構(gòu)類似物，不同之處有兩點(diǎn)，其一他們構(gòu)型不同，天然的脫氧腺嘌呤核苷為D構(gòu)型，第二個不同之處在于在ΒLD4A的戊糖環(huán)中，2和3碳原子間為雙鍵，且3碳原子上沒有羥基。之前的研究表明在2215細(xì)胞中，ΒLD4A能抑制HBV基因組的復(fù)制，降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBSAG的含量。在轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)中，ΒLD4A能快速降低血清中HBVDNA和HBSAG含量，且沒有明顯的藥物誘導(dǎo)的肝臟和腎臟毒性。推測象其他的核苷類抗病毒藥物那樣，ΒLD4A以其三磷酸化的形式（ΒLD4ATP）通過抑制HBV聚合酶逆轉(zhuǎn)錄的活性來抑制HBV基因組的復(fù)制。在這項(xiàng)研究中，我們利用BACTOBAC桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組HBV核心顆粒，體外進(jìn)行聚合酶反應(yīng)來研究ΒLD4A抑制HBV的的機(jī)制。方法構(gòu)建重組質(zhì)粒所需的外源片斷是HBV聚合酶基因（POL基因）及HBV核心蛋白基因（CE基因）片斷。以含HBV全長基因組的質(zhì)粒P36LL為模板PCR擴(kuò)增目的基因片斷。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行15％的瓊脂糖凝膠電泳分析，用凝膠回收試劑盒從瓊脂糖凝膠中回收純化擴(kuò)增片斷。將POL基因及CE基因片斷插入PFASTBACDUAL的兩個多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建PFASTBACDUALPOLCE重組質(zhì)粒。結(jié)果（略）結(jié)論本文利用重組HBV核心顆粒進(jìn)行體外聚合酶反應(yīng)來研究ΒLD4ATP抗病毒作用的機(jī)理。本研究表明ΒLD4ATP以濃度依賴性的方式通過抑制HBV聚合酶逆轉(zhuǎn)錄活性來抑制HBVDNA的復(fù)制，但不能排除通過其他的抑制作用途徑。推測類似于其他作用機(jī)理已闡明的核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，因缺乏合成DNA鏈中磷酸二酯鍵所必需的核苷戊糖環(huán)上3′OH，ΒLD4ATP以鏈終止子的形式摻入到新合成的DNA鏈中從而導(dǎo)致鏈合成的終止。ΒLD4ATP是DATP的結(jié)構(gòu)類似物，動力學(xué)研究表明ΒLD4ATP能與DATP競爭HBV聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)。在此實(shí)驗(yàn)中ΒLD4ATP和3TCTP的EC50值分別為3530UMOLL和4457UMOLL，ΒLD4ATP有著更強(qiáng)的抑制HBVDNA復(fù)制的效應(yīng)。

簡介：目前以C組5型腺病毒AD5載體為基礎(chǔ)構(gòu)建的腺病毒載體在基因治療和疫苗研究中得到廣泛應(yīng)用但是由于其轉(zhuǎn)導(dǎo)作用依賴于細(xì)胞表面的柯薩奇腺病毒受體CAR許多重要的細(xì)胞如造血干細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面AD5吸附受體CAR表達(dá)很少一些惡性腫瘤細(xì)胞CAR的表達(dá)比相應(yīng)的正常組織細(xì)胞要少AD5載體難以轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因；同時正常人群AD35的感染率在90％左右體內(nèi)預(yù)存的中和抗體可迅速清除腺病毒載體導(dǎo)致治療基因消失。這些問題限制了5型腺病毒AD5載體的廣泛應(yīng)用。為此人們在試圖利用其他型別的腺病毒開發(fā)新型載體以克服這些不足。35型腺病毒AD35以幾乎在所有的人類體細(xì)胞表面都有表達(dá)的CD46作為吸附受體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)不易被AD5感染造血細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和惡性腫瘤細(xì)胞等靶細(xì)胞。而且世界范圍內(nèi)正常人群中AD35感染率不到5％病毒載體被抗體清除的概率小所以AD35腺病毒作為頗具吸引力的基因治療載體近年來受到人們的青睞。但目前AD35載體尚未商品化且迄今為止僅有的幾例有關(guān)成功構(gòu)建AD35載體一般采用體外連接法載體構(gòu)建過程繁瑣病毒包裝成功率低。有鑒于此本文擬利用體外同源重組方法來構(gòu)建AD35載體包裝系統(tǒng)以期建立一種操作簡便的AD35載體系統(tǒng)。為了評價AD35載體在實(shí)際應(yīng)用中的可行性為構(gòu)建AD35載體提供可靠的理論依據(jù)本文首先對人6個組10種不同型腺病毒基因組序列同源性進(jìn)行了比較發(fā)現(xiàn)人群普遍感染的C組AD5腺病毒與人群感染率很低的B組AD35腺病毒在進(jìn)化上親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)六鄰體蛋白氨基酸同源性比較顯示AD5和AD35六鄰體的同源性只有753％這提示AD5和AD35六鄰體之間存在交叉反應(yīng)的可能性比較??；之后對中國1157份080歲健康人群進(jìn)行了AD4、AD5和AD35抗體水平的本底篩查結(jié)果顯示在中國正常人群感染AD4和AD5的比例分別為70％和90％左右而AD35的感染要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于AD4和AD5只有不到5％。根據(jù)細(xì)菌內(nèi)同源重組的原理克隆了AD35的全基因組DNA構(gòu)建了病毒包裝所需的穿梭質(zhì)粒、骨架質(zhì)粒和表達(dá)AD35腺病毒E1B的細(xì)胞系293E1B并通過同源重組的方法成功在293E1B細(xì)胞系中包裝出復(fù)制缺陷型的AD35腺病毒病毒的包裝滴度達(dá)到106TCID50ML接近于野生型腺病毒。同時還對影響病毒包裝效率的PXI蛋白進(jìn)行了初步研究發(fā)現(xiàn)PXI蛋白是影響重組病毒包裝效率的主要因素。目前對AD35的基因組編碼產(chǎn)物研究的還很少為了闡明AD35基因組編碼產(chǎn)物中與誘導(dǎo)體液免疫有關(guān)的蛋白為今后改進(jìn)AD35載體系統(tǒng)打下基礎(chǔ)利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對AD35腺病不同毒蛋白免疫原性進(jìn)行了初步鑒別首次發(fā)現(xiàn)AD35腺病毒非結(jié)構(gòu)蛋白E2ADNABINDINGPROTEIN能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體。綜上所述本文首次調(diào)查了我國人群中AD35的感染情況、利用細(xì)菌內(nèi)同源重組機(jī)制構(gòu)建了AD35載體系統(tǒng)并鑒別出一個以前未報道的體液免疫原這些結(jié)果的取得為AD35載體的開發(fā)、應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。

簡介：網(wǎng)絡(luò)時代，計算機(jī)病毒對信息安全造成的危害越來越大。為了應(yīng)對計算機(jī)病毒的威脅，人們設(shè)計了防病毒軟件和硬件防病毒網(wǎng)關(guān)。對于防病毒軟件和硬件防病毒網(wǎng)關(guān)而言，提高防病毒引擎的病毒碼檢測效率是提高它們性能的關(guān)鍵所在。病毒碼檢測的核心算法是模式匹配。模式匹配算法是計算密集型的算法。研究比較各模式匹配算法對提高防病毒軟件和硬件的性能有重要意義。本文的研究基于廣泛使用的開源防病毒軟件CLAMAV?，F(xiàn)有的模式匹配電路研究大多基于網(wǎng)絡(luò)入侵檢測和SNT規(guī)則庫。本文將這部分研究移植到病毒檢測領(lǐng)域中來。針對CLAMAV病毒庫的種種特點(diǎn)，本文對現(xiàn)有的模式匹配電路做了相應(yīng)的改進(jìn)。在電路優(yōu)化過程中，廣泛使用流水線和并行處理來優(yōu)化電路的面積和速度指標(biāo)。對于各種結(jié)構(gòu)的模式匹配電路，本文使用CLAMAV病毒庫測試它們的電路性能指標(biāo)。為了測試各種電路結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，本文設(shè)計了可以將病毒規(guī)則自動轉(zhuǎn)化為電路HDL描述的電路自動生成工具。這種電路自動生成工具使用自行設(shè)計的單元電路，進(jìn)行簡單的單元電路互連，就可以完成電路構(gòu)造過程。測試結(jié)果表明，本文所改進(jìn)的電路結(jié)構(gòu)，對于CLAMAV日常更新的病毒庫處理帶寬達(dá)到了535GBPS。該指標(biāo)處于同類研究的中上水平。

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簡介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文利用生物信息學(xué)研究細(xì)菌水平基因轉(zhuǎn)移及桿狀病毒載體的改進(jìn)姓名單梁申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師任雙喜趙國屏20070527復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章利用生物信息學(xué)研究細(xì)菌水平基因轉(zhuǎn)移摘要水平基因轉(zhuǎn)移，即不同物種問遺傳物質(zhì)的交換，是微生物進(jìn)化和微生物多樣性的一個重要因素。細(xì)菌水平基因轉(zhuǎn)移的主要途徑包括轉(zhuǎn)化、接合和轉(zhuǎn)導(dǎo)。水平基因轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象普遍存在于微生物界，但依靠常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法并不容易找到它們在基因組上的位置和長度。在近十年中，大量微生物基因組測序工作的完成為水平基因轉(zhuǎn)移的研究提供了很好的生物信息學(xué)平臺，利用微生物基因組的序列分析研究水平基因轉(zhuǎn)移成為一個有力的手段。常見的研究方法將堿基組成和密碼子偏好性定義為細(xì)菌的基因組標(biāo)簽。微生物基因組中堿基組成和密碼子偏好性，即基因組標(biāo)簽因物種而異，因此，供體物種水平轉(zhuǎn)移而來的基因和受體物種的基因組標(biāo)簽差異顯著。本研究基于該原理，采用生物信息學(xué)的手段，運(yùn)用一種新的方法，計算和比較細(xì)菌基因組和基因組上DNA片段之間四堿基的出現(xiàn)頻率，并計算兩者之間距離，分析和確定細(xì)菌水平基因轉(zhuǎn)移區(qū)域。關(guān)鍵詞細(xì)菌基因組水平基因轉(zhuǎn)移寡核苷酸2

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簡介：點(diǎn)擊查看更多新生期接種卡介苗和乙肝疫苗影響小鼠認(rèn)知功能的發(fā)育.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的1以密碼子優(yōu)化的人乳頭瘤病毒HPV6B結(jié)構(gòu)蛋白L1△為載體攜帶沙眼衣原體CT主要外膜蛋白多表位MOMP168，克隆HPV6BL1△CTMOMP168的嵌合基因。并通過PCDNA31真核表達(dá)載體構(gòu)建了重組質(zhì)粒PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168，即人乳頭瘤病毒與沙眼衣原體嵌合DNA疫苗。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞，篩選重組表達(dá)質(zhì)粒，并經(jīng)SDSPAGE電泳和WESTERNBLOT分析證實(shí)目的蛋白。2提取PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168重組質(zhì)粒，溶于PBSBUFFER并免疫BALBC小鼠，同時設(shè)置對照組。研究PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168重組質(zhì)粒的免疫效應(yīng)。3以PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168和PET32ACTMOMP168蛋白聯(lián)合免疫對小鼠的免疫效應(yīng)，探討“PRIMEBOOST”免疫方案的最佳免疫策略。4所有動物0W，2W，4W免疫。途徑DNA采用小鼠股四頭肌注射免疫，蛋白采用背部多點(diǎn)注射。初免后0，1，3，5，7W小鼠尾靜脈取血，檢測其體液免疫效應(yīng)，同時取小鼠陰道分泌物，檢測局部黏膜的SIGA的產(chǎn)生。并于小鼠初兔后第8周，每組處死3只小鼠，取脾淋巴細(xì)胞檢測其CTL細(xì)胞殺傷活性和胞內(nèi)細(xì)胞因子IFNΓ，IL4，IL10的分泌。方法1設(shè)計了擴(kuò)增HPV6BL1△的PCR引物，并在兩端設(shè)計酶切位點(diǎn)。同時將質(zhì)粒PET32AHPV6BL1CTMOMP168用相同的酶進(jìn)行酶切，通過基因克隆方法將HPV6BL1△的PCR片段定向插入到原核表達(dá)載體PET32AHPV6BL1CTMOMP168中，以置換HPV6BL1片段，構(gòu)建成重組表達(dá)質(zhì)粒PET32AHPV6BL1△CTMOMP168；再將前者中的HPV6BL1△CTMOMP168經(jīng)酶切連接到真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA31，最終構(gòu)建了真核表達(dá)重組質(zhì)粒PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168。測序分析進(jìn)行鑒定。用POLYFECT脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒將經(jīng)鑒定的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞，通過SDSPAGE電泳和WESTERNBLOT分析鑒定表達(dá)的重組質(zhì)粒。2大量提取PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168重組質(zhì)粒，溶于PBSBUFFER并免疫BALBC小鼠，150UG100UL只，同時設(shè)置同時設(shè)置①PCDNA30HPV6BL1△，②PCDNA30HPV6BL1③PCDNA31CTMOMP168，④PCDNA30HPV6B1△PCDNA31CTMOMP168⑤PCDNA31和⑥PBSBUFFER等六組作為對照。共7組，每組7只小鼠。于0W，2W，4W小鼠股四頭肌免疫。所有小鼠免疫前均采用利多卡因局部注射。以使肌肉松弛，便于質(zhì)粒的吸收。3核酸和蛋白聯(lián)合免疫方案“PRIMEBOOST”。具體分3組①PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168首次0周免疫，PET32ACTMOMP168蛋白2、4周加強(qiáng)免疫兩次；②PET32ACTMOMP168蛋白首次0周免疫，PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP1682、4周加強(qiáng)免疫兩次③PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168和PET32ACTMOMP168蛋白同時0、2、4周免疫3次。4初免后0，1，3，5，7周小鼠尾靜脈取血，分離血清，檢測其特異性抗HPV6BL1，PET32ACTMOMP168和抗CT全菌體的抗體，同時用100ULPBSBUFFER沖洗小鼠陰道，檢測局部黏膜SIGA的產(chǎn)生。并于小鼠初免后第8周，每組處死3只，取脾淋巴細(xì)胞檢測其CTL細(xì)胞的殺傷活性和胞內(nèi)細(xì)胞因子IFNΓ，IL4，IL10的分泌情況。結(jié)果L經(jīng)酶切和測序鑒定，獲得了重組真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168。轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞COS7后，通過SDSPAGE和WESTERNBLOT分析鑒定，在真核細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)了分子量約為60KDA的嵌合蛋白。2動物免疫后檢測各組小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫效應(yīng)，ELISA結(jié)果顯示核酸免疫后PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168組，能產(chǎn)生對PET32ACTMOMP168的特異性IGG和SIGA，也能產(chǎn)生對HPV6BL1和CT全菌體的特異性IGG。CTL細(xì)胞活性檢測結(jié)果顯示小鼠核酸免疫后能產(chǎn)生對靶細(xì)胞的特異性殺傷作用，F(xiàn)CM檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子結(jié)果顯示，免疫后小鼠脾淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生較高的IFNΓ，產(chǎn)生IL4和IL10則相對較低。3核酸和蛋白聯(lián)合免疫方案“PRIMEBOOST”通過檢測以上指標(biāo)并相互比較，顯示①PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168首次0周免疫，PET32ACTMOMP168蛋白2、4周加強(qiáng)免疫兩次和③PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168和PET32ACTMOMP168蛋白同時0、2、4周免疫3次兩種方案相對于②PET32ACTMOMP168首次0周免疫，PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP1682、4周加強(qiáng)免疫兩次更能刺激小鼠產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)。三種免疫方案中，以①③為佳。結(jié)論1成功構(gòu)建了嵌合基因真核表達(dá)質(zhì)粒，并在哺乳細(xì)胞中表達(dá)了嵌合蛋白。為研究HPVCT嵌合疫苗的免疫保護(hù)效應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168免疫小鼠后，能刺激其產(chǎn)生全身的體液免疫和細(xì)胞免疫效應(yīng)，及粘膜局部的體液免疫反應(yīng)。3核酸和蛋白聯(lián)合免疫方案“PRIMEBOOST”中，以①PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168首次0周免疫，PET32ACTMOMP168蛋白2、4周加強(qiáng)免疫兩次和③PCDNA31HPV6BL1△CTMOMP168和PET32ACTMOMP168蛋白同時0、2、4周免疫3次兩種方案更能有效刺激小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文靶向腫瘤的模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒（MIMORETROVIRUS）介導(dǎo)的針對人POKEMON基因的RNAI策略在宮頸癌基因治療中的作用研究姓名石晶磊申請學(xué)位級別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師倪兵20080501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文過SIRNAS向腫瘤組織特異靶向遞送可以一方面避免這種負(fù)面影響，另一方面也可以有效地利用好有限的SIRNAS資源，從而提高腫瘤基因治療的效率。選擇性地表達(dá)在腫瘤細(xì)胞及腫瘤組織新生血管上的整合素僅。P3的三肽ARG．GLYASPRGD能夠把化學(xué)合成定向帶到腫瘤組織部位，并取得較好的腫瘤治療效果。但是化學(xué)合成SIRNAS費(fèi)用昂貴，并且還有作用時間不會太長因?yàn)镽NA在體內(nèi)很容易被降解和實(shí)際操作困難的問題因?yàn)镽NA水平的操作遠(yuǎn)較DNA水平操作麻煩。并不適用于腫瘤防治這樣一個長期的過程。逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)可以解決這個問題。逆轉(zhuǎn)錄病毒可以將其基因組插入到腫瘤細(xì)胞基因組中，并將從此長期存在，其效應(yīng)也會與其相伴隨。這也是逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)在RNAI領(lǐng)域和腫瘤治療研究領(lǐng)域倍受關(guān)注的原因。但是，同其它病毒一樣，逆轉(zhuǎn)錄病毒的制備過程仍很復(fù)雜，并且制備的逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度仍是困擾實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的關(guān)鍵因素，并且它也沒有組織靶向性。另外，由于病毒的成分復(fù)雜，其實(shí)際臨床應(yīng)用時將面臨諸多疑問。基于此，我們將上述幾種設(shè)想進(jìn)行了整合，進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)一針對POKEMON基因的SIRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定首先從GENEBANK中獲取POKEMON原癌基因MRNA序列全長，通過AINBION公司在線設(shè)計工具，設(shè)計了4對針對POKEMON的SIRNA序列，并將其分別定向克隆入PSILENCER5．1．H1RETRO逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，并且將表達(dá)載體的線性載體的粘性末端用ⅪENOW酶補(bǔ)平后，再連接起來構(gòu)建了空載體對照質(zhì)粒，經(jīng)過雙酶切、及測序鑒定，確定了所構(gòu)建的重組POKEMONSIRNAS表達(dá)質(zhì)粒及空載體對照質(zhì)粒是完全成功的。二各重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒對POKEMON基因沉默效應(yīng)的檢測及其對HELA細(xì)胞生物學(xué)性狀的改變?nèi)缓?，將所?gòu)建的重組質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞，經(jīng)過嘌呤霉素篩選，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染4個編碼不同SIRNA序列重組質(zhì)粒及空載體對照質(zhì)粒的HELA細(xì)胞。經(jīng)過Q．PCR以及WB檢測，觀察了轉(zhuǎn)染不同SIRNA表達(dá)質(zhì)粒后，HELA細(xì)胞中POKEMON基因的表達(dá)情況。并且應(yīng)用MTT、凋亡關(guān)鍵酶CAPASE3／7活性檢測、以及TRANSWEU侵襲性檢測等方法，檢測了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后，HELA細(xì)胞生物學(xué)性狀的改變，進(jìn)一步驗(yàn)證了QPCR及WB的結(jié)果，篩選出沉默效應(yīng)最好的SIRNA序列。QPCR及WB結(jié)果顯示與未轉(zhuǎn)染組HELA細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染編碼GTCCTCGTCCTTAAAGTGC的HPSIRNA一4的HELA細(xì)胞中，POKEMON基因表達(dá)下降了83％，同時對其增殖速率、以及侵襲性等生物學(xué)性狀的觀察也發(fā)現(xiàn)，其增殖速度為未轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞的65％，侵襲性減弱為30％，其凋亡關(guān)鍵酶活性則上升為未轉(zhuǎn)染組的2．2倍。從上述結(jié)論看來，通過對HELA細(xì)胞中POKEMON基因

簡介：研究目的1研究江門兒童、成人病毒性腹瀉患者中星狀病毒HASTV的感染狀況及流行病學(xué)特征。2研究江門兒童、成人病毒性腹瀉中HASTV的基因型別，探討流行優(yōu)勢病毒株。3探討江門兒童和成人HASTV感染腹瀉的臨床特征及主要危險因素。方法1兒童腹瀉患者選擇江門市婦幼保健醫(yī)院兒科門診部，全年收集5歲以下腹瀉患兒發(fā)病三日內(nèi)經(jīng)臨床診斷為病毒性腹瀉的糞便標(biāo)本，每個月的前15天為標(biāo)本收集日，收集時間為2005年9月～2006年8月。標(biāo)本采集當(dāng)日檢測輪狀病毒RV后電話通知檢測結(jié)果，并調(diào)查有關(guān)問題。成人腹瀉患者選擇江門市人民醫(yī)院急診科和腹瀉門診部，于病毒性腹瀉流行期2006年9月～2007年1月連續(xù)收集成人急性散發(fā)腹瀉糞便標(biāo)本。2經(jīng)膠體金法、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR法分別檢測RV和諾如病毒NV后，運(yùn)用實(shí)時熒光PCRREALTIMEPCR進(jìn)行HASTV檢測，并對陽性標(biāo)本進(jìn)行RTNESTEDPCR測序證實(shí)，同時結(jié)合GENEBANK中相應(yīng)的參考株核苷酸序列進(jìn)行進(jìn)化比對工作，鑒定型別，判斷HASTV的流行優(yōu)勢株。3HASTV感染腹瀉臨床特征的探討采用與RV感染腹瀉進(jìn)行頻數(shù)匹配的兩樣本比較研究；HASTV危險因素的研究采用11配對的病例對照研究。數(shù)據(jù)管理采用EPIDATA21A進(jìn)行雙份錄入，SPSS130進(jìn)行統(tǒng)計分析，定性資料采用X2檢驗(yàn)，定量資料采用T檢驗(yàn)，偏態(tài)資料采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，HASTV感染腹瀉發(fā)病的危險因素采用進(jìn)行因素二分類LOGISTIC回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α取005。結(jié)果1江門腹瀉患兒中2005年9月～2006年8月HASTY全年總檢出率為85％40／470，檢出高峰期為9、11、12月，單獨(dú)感染率為275％11／40，混合感染率為725％29／40，其中675％并RV，5％并NV。5歲以下的嬰幼兒病毒性腹瀉患者中，HASTV感染無年齡、性別上的統(tǒng)計學(xué)差異；按系統(tǒng)間隔1份法抽樣選取其中的18份HASTV毒株進(jìn)行了測序分析，顯示18株全部屬于HASTV1型；核苷酸序列同源性比對顯示與選取的參比毒株的同源性為92～98％，內(nèi)部同源性為92～100％。22006年病毒性腹瀉流行期9H～次年1月采集的散發(fā)成人腹瀉標(biāo)本中檢出3株HASTV，檢出率為54％3／56，經(jīng)RTNESTEDPCR檢測和序列分析鑒定為HATSV4型。3本組兒童HASTV感染腹瀉患者中主要臨床癥狀為腹瀉850％，發(fā)熱550％，嘔吐375％，HASTY主要臨床癥狀與RV感染腹瀉比較均無統(tǒng)計學(xué)差別。結(jié)論1HASTY是江門地區(qū)5歲以下嬰幼兒病毒性腹瀉的重要病原體之一，但無年齡、性別上統(tǒng)計學(xué)差異；流行季節(jié)與RV相似從9月到次年1月，尤以9、11、12月為流行季節(jié)的高峰期，與國內(nèi)外其他地區(qū)已有研究資料報道基本一致合并其他致腹瀉病毒感染的比例遠(yuǎn)高于單獨(dú)感染比例，主要是合并RV感染HASTV1型為江門地區(qū)嬰幼兒病毒性HASTV感染的流行優(yōu)勢毒株，內(nèi)部核苷酸變異不大。2本組兒童HASTV感染腹瀉患者中主要臨床癥狀為腹瀉、發(fā)熱、嘔吐，與RV感染腹瀉相似。3現(xiàn)有資料表明江門成人散發(fā)病毒性腹瀉者中存在HASTV感染，病毒型別為HASTV4，未發(fā)現(xiàn)多致瀉病毒混合感染；臨床癥狀輕于兒童。4HASTV感染腹瀉的危險因素是吃生冷食品，而嬰幼兒用母乳輔食或其他進(jìn)食方式則可能是保護(hù)因素。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文頸動脈支架植入術(shù)對認(rèn)知功能影響的臨床研究姓名楊婷申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師陳康寧20080501第三軍醫(yī)人學(xué)碩十學(xué)位論文P005；MMSE與MOCA呈正相關(guān)。結(jié)論本研究表明，頸動脈支架植入術(shù)能改善頸動脈狹窄程度，有效的防止腦梗塞的復(fù)發(fā)，同時可以改善患者的認(rèn)知功能。其中以延遲回憶改善最為明顯。關(guān)鍵詞頸動脈狹窄；頸動脈支架植入術(shù)；認(rèn)知功能5

簡介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文肝炎病毒感染與非霍奇金淋巴瘤及乙肝病毒再激活姓名蘭曉曦申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）指導(dǎo)教師陳鈺20081014上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文4第二部分非霍奇金淋巴瘤治療相關(guān)性乙肝病毒再激活的研究第二部分非霍奇金淋巴瘤治療相關(guān)性乙肝病毒再激活的研究背景與目的在非霍奇金淋巴瘤化療中，與化療藥物直接相關(guān)的肝臟毒性作用通常不影響治療的完成，但合并肝炎病毒感染的腫瘤患者在接受化療期間，發(fā)生肝炎病毒再激活事件報道增多，受到愈來愈重視?？笴D20單克隆抗體利妥昔單抗（RITUXIMAB）用于治療B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤，RCHOP方案已成為治療彌漫大B細(xì)胞性淋巴瘤金標(biāo)準(zhǔn)，已有多家報道應(yīng)用利妥昔單抗后發(fā)生HBV再激活所致暴發(fā)性肝炎；預(yù)防性應(yīng)用核苷類抗乙肝病毒藥物，在防止和治療乙肝病毒再激活方面，發(fā)揮了一定的作用。方法我們研究了75例B細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者化療期間的肝功能變化及乙肝病毒檢測，患者在化療開始前及隨訪時行肝功能和乙肝病毒拷貝數(shù)監(jiān)測。同時對其中部分患者進(jìn)行治療前后外周血CD20陽性淋巴細(xì)胞數(shù)檢測。結(jié)果隨訪的75例B細(xì)胞性NHL患者經(jīng)化療后，共有6例患者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）升高，共有2例患者化療后出現(xiàn)乙肝病毒（HBV）表面抗原血清轉(zhuǎn)陽性。使用不同化療方案的患者，治療后CD20陽性的淋巴細(xì)胞計數(shù)有顯著差異，且與HBV再激活相關(guān)。結(jié)論抗腫瘤的免疫抑制藥物與HBV再激活相關(guān)。尤其是抗CD20單克隆抗體利妥昔單抗的運(yùn)用更加重了HBV再激活的可能性。預(yù)防性應(yīng)用核苷類抗乙肝病毒藥物治療可減少HBV再激活。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞非霍奇金淋巴瘤，乙型肝炎病毒再激活，CD20單克隆抗體、拉米夫定

簡介：云南中醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文加味五苓湯治療小兒輪狀病毒性腸炎的臨床研究姓名閔曉雪申請學(xué)位級別碩士專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師李小珊20090601加昧五苓湯治療小兒輪狀病毒性腸炎的臨床研究THECLINICALOBSERVATIONOFINFANTILEROTAVIMSENTERITISWITH、ⅣULINGMODIFIEDDECOCTIONPOSTGRADUATEMINXIAOXUETRADITIONALCHINESEMEDICINEANDWESTEMMEDICINEPEDIATRICDIRECTEDBYASSOCIATEPROFESSOR“IAOSHANYUNNANCOLLEGEOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE，KUNMING650021ABSTRACTOBJECHVETHEPU印OSEOFTHISSTUDYBYOBSEⅣINGTHEROTAVINISENTERITISCLINICALE笳CIENCYTHROUGLLWULINGMODIFIEDDECOCTION，INORDERTEDUCETHESERENITY，IT’SAIMTOEXPLOREASAFETYTRADITIONALCHINESEMEDICILLEMETHODSDU咖GINJULY2007TOM粼H2009，THERCWERE60PATIENTSATTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPI紐LOFTCMFORTREATMENTOUTPATIENTANDHOSPITALIZATIONBYR鋤DOMLYDIVIDEDINTOTREAT黟OUPWULINGMODIFIEDDECOCTIONANDTHECONTROL孕OUPWBSTEMMEDICIILETREATMENTANERTREATMEMWEREOBSEN，EDTHENUMBEROFSTOOL，STOOLCHARACTEFS，VOMITING，DEHYDRATIONANDOTHERSYMPTOMS0FCLINICALSYMPTOMSANDSIGILSOFCHANGE，THENEVALUATEOFTHEEFFICACYCOMPREHENSIVE0FTWOTREATMENTPROGRAMSIKSUITS1THETOTALE五FECTIVERATEOFTFEATGROUPWAS8333％，THECONTMLGROUPWAS7333％，THE柳。乎OUPSHAVENOSI薩IFJCANTDI疏RENCEP0052ARER72HOURSTREATMENT，THET、L，O鏟OUPSOFTOLALSCORCALLDST00L，STOOLSCOREHADSI印IFICANTLYDIFFBRENTBEFORETREAT，DIFFER朗CEBETWEENTWO目OUPSHAVEN0STATISTICALSI鰣JEICANCEO0053THEAVERAGCDCFERVESCENCETIMEFORTHETREATGROLLPW勰1935H，THECON昀LGROUPW髂23257H，THC鉚OGROUPHADSTATISTICALSI班FICALLCC4THEAVEMGEDAYT0CHECKDI袖EATREAT伊0UPW弱4766715466，THECONTROLGROUPW弱566717486，THE押OGROUPHADSTATISTICALSIGNIFICANCC5COMPAREDTHETWOGROUPSOFMNNYNOSE，LOSEAPPETITEHADSTATISTICALSI印IFIC強(qiáng)CCOO05CONDUSI佃、棚L(fēng)INGMODIFIEDDECOCTIONC觚REDUCETHESEVERITYANDCOURSEOFTHEROTAVINLSENTERITIS，ITISWORTHFUNHERSTUDYINGALLDPROMOTINGTOUSEKEYWORDSROTAVINLSENTERITIS；WLLLINGMODIFIEDDECOCTION；CLINIC0BSEⅣATION2

簡介：目的1、了解非體外循環(huán)冠狀動脈搭橋術(shù)患者出院前1天與術(shù)后3個月的認(rèn)知功能改變情況。2、探討非體外循環(huán)冠狀動脈搭橋術(shù)患者認(rèn)知功能改變的影響因素，為臨床實(shí)踐中早期預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。方法采用便利抽樣的方法，選取2008年1月2008年10月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心臟外科接受非體外循環(huán)冠狀動脈搭橋手術(shù)的冠心病患者59例作為研究對象。采用問卷調(diào)查法進(jìn)行資料收集，于術(shù)前23天收集患者一般資料并評估其認(rèn)知功能、社會支持情況及焦慮抑郁情緒狀態(tài)；出院前1天第二次評估其認(rèn)知功能，并記錄其住院期間的可能影響因素；于術(shù)后3個月患者回醫(yī)院復(fù)診時第三次評估其認(rèn)知功能；以術(shù)前測評結(jié)果作為基線標(biāo)準(zhǔn)，將術(shù)后兩次測評得分與之比較，判斷患者認(rèn)知功能改變情況。應(yīng)用SPSS130版本統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，統(tǒng)計描述采用均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、百分比等，統(tǒng)計推斷采用T檢驗(yàn)、X2檢驗(yàn)和LOGISTIC回歸分析。結(jié)果1、符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)的患者59例，其中2例術(shù)后死亡，1例失訪，共有56例患者完成全部3個時間點(diǎn)的認(rèn)知功能測評。出院前L天有12例患者發(fā)生認(rèn)知功能改變，發(fā)生率為2143％；術(shù)后3個月有6例患者發(fā)生認(rèn)知功能改變，發(fā)生率為1071％。2、認(rèn)知功能改變組與未改變組資料比較出院前1天兩組患者在年齡、教育水平、糖尿病史、心功能、術(shù)后機(jī)械通氣時間、監(jiān)護(hù)室監(jiān)護(hù)時間和并發(fā)癥方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義。性別、吸煙、飲酒、體重指數(shù)在兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后3個月兩組患者在出院前1天認(rèn)知功能、術(shù)后機(jī)械通氣時間和監(jiān)護(hù)室監(jiān)護(hù)時間方面有統(tǒng)計學(xué)差異，其他因素?zé)o統(tǒng)計學(xué)意義。3、非條件LOGISTIC回歸分析結(jié)果出院前1天糖尿病、并發(fā)癥和教育水平3個自變量進(jìn)入方程，P值均＜005，其中糖尿病、并發(fā)癥為認(rèn)知功能改變的危險因素，教育水平為保護(hù)因素。術(shù)后3個月出院前1天認(rèn)知功能和機(jī)械通氣時間2個自變量進(jìn)入方程，只有出院前1天認(rèn)知功能1個自變量的P值＜005，出院前1天認(rèn)知功能為術(shù)后3個月認(rèn)知功能改變的危險因素。結(jié)論非體外循環(huán)冠狀動脈搭橋術(shù)患者認(rèn)知功能的改變受多種因素影響，是年齡、教育水平、心功能、糖尿病、術(shù)后機(jī)械通氣時間、監(jiān)護(hù)室監(jiān)護(hù)時間及并發(fā)癥等因素共同作用的結(jié)果。全面評估患者認(rèn)知功能改變的影響因素、確定高危人群，對預(yù)防認(rèn)知功能改變的發(fā)生具有重要的臨床意義。