簡介：研究目的了解大學(xué)生應(yīng)對心理困擾的特點和一般求助傾向，分析影響大學(xué)生心理求助的因素，為加強和改進高校心理咨詢工作提供對策措施。研究方法一、問卷調(diào)查從代表不同專業(yè)的三所廣州地區(qū)高校抽取在校大學(xué)生為研究對象。共抽取1093名大學(xué)生作為調(diào)查對象，共收回有效問卷1057份，有效率為967％。同時，從各高校的心理咨詢中心共調(diào)查了73名心理咨詢來訪者，其中南方醫(yī)科大學(xué)36名，石油大學(xué)17名，仲凱農(nóng)學(xué)院20名。采用一般求助傾向問卷、實際求助行為問卷、癥狀自評量表、青少年心理求助障礙量表等進行調(diào)查。調(diào)查實施由心理學(xué)專業(yè)人員擔(dān)任，以年級為單位，采用團體指導(dǎo)方式，統(tǒng)一不記名填表方式進行，當(dāng)場收回問卷。心理咨詢來訪者在接受咨詢前填寫調(diào)查問卷。所得資料采用FOXPRO60建立數(shù)據(jù)庫，用SPSS115軟件進行數(shù)據(jù)處理。統(tǒng)計方法為描述性分析、T檢驗、相關(guān)分析、信度分析、因子分析、多元逐步回歸分析等。二、訪談法依據(jù)事先設(shè)計好的訪談主題和范圍，對大學(xué)生進行了個人訪談。訪談的對象分為兩類一是隨機選取的南方醫(yī)科大學(xué)不同專業(yè)不同年級的大學(xué)生21名，其中男生12名，女生9名；二是在接受完心理咨詢之后，對15名心理咨詢來訪者進行了訪談，其中女生9名，男生6名。訪談內(nèi)容包括個人應(yīng)對心理困擾的方式、對專業(yè)心理幫助的看法、妨礙大學(xué)生求助心理咨詢和治療的因素以及對高校心理咨詢工作的建議等。研究結(jié)果一、大學(xué)生心理求助的現(xiàn)狀大學(xué)生在遇到心理困擾時，向不同對象求助可能性較高的人數(shù)比例排列順序為第一位是朋友，達到751％，然后是父母親481％、戀人402％、其它親屬244％，而對心理健康專業(yè)人員的選擇比例僅有156％。此外，“不向他人求助、自己解決”的選擇比例也較高，達到335％。大學(xué)生被調(diào)查前兩周的實際求助情況顯示，大學(xué)生在應(yīng)對心理困擾時，選擇向朋友求助的大學(xué)生最多，而后是向父母親和其他親屬，而選擇向心理健康專業(yè)人員求助的僅僅只有13人，排在倒數(shù)第二位。二、心理求助障礙量表得分在人口統(tǒng)計學(xué)變量上的差異1性別差異不同性別大學(xué)生的障礙總分有顯著差異，男性得分大于女性。2家庭居住地差異來自農(nóng)村與來自城市的學(xué)生在總的障礙得分上并無顯著差異。3生源差異大專生的障礙總分顯著低于本科生的障礙總分。4年級差異不同年級的學(xué)生在障礙總分上有顯著差異，高年級學(xué)生的得分要高于低年級學(xué)生。5家庭經(jīng)濟狀況差異家庭經(jīng)濟狀況差的大學(xué)生的障礙總分要顯著高于其他學(xué)生。三、心理健康狀況對心理求助的影響1出現(xiàn)心理癥狀時，大學(xué)生感覺是否需要心理咨詢的情況是不同的。在SCL均分上，需要程度高的大學(xué)生的得分要顯著高于自感無需要的大學(xué)生。自感需要程度不同的大學(xué)生在人際敏感、抑郁、精神病性三個因子的得分差異有統(tǒng)計學(xué)意義，隨著需要程度的增加，這三個因子得分也增加。2將SCL90量表各因子對自感需要進行多元線性逐步回歸分析，進入回歸方程式的顯著變量共有抑郁、精神病性、軀體化、焦慮、恐怖五個。三、認知因素對心理求助的影響分析1計算無心理求助傾向大學(xué)生的心理求助障礙量表各項目的得分情況，得分超過4的條目依次是第35、2、4、3條。2比較出現(xiàn)心理癥狀但未心理求助的被試與來訪者，在癥狀自評量表各因子得分及均分、心理求助障礙量表各因子得分上，前者都要顯著高于后者。結(jié)論一、大學(xué)生心理求助的一般傾向遇到心理困擾時，大學(xué)生一般會先自我調(diào)節(jié)，自我調(diào)節(jié)無效后，會向外界求助。在對象上，大學(xué)生傾向于向朋友求助，而后是父母親人和戀人，而大學(xué)生求助專業(yè)機構(gòu)的意愿較低。二、影響大學(xué)心理求助行為的因素1在心理求助的傾向性上，女性大于男性、大專生大于本科生、低年級學(xué)生大于高年級學(xué)生，經(jīng)濟條件差的學(xué)生小于經(jīng)濟條件好的學(xué)生。但農(nóng)村學(xué)生與城市學(xué)生并無明顯差異2心理困擾的嚴(yán)重程度以及所遇到的心理問題的類型影響大學(xué)生的求助需要；3認知因素，包括對心理求助行為的負性認知、低開放性、對心理咨詢和治療的認知偏差、對治療效用的認知偏差等都會阻礙大學(xué)生心理求助。

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文攜帶超抗原SEA基因的選擇性增殖腺病毒治療膀胱腫瘤的體外實驗研究姓名胡建鵬申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)；外科學(xué)指導(dǎo)教師韓從輝20110531英文摘要OBJECTIVEABSTRACTCONSTRUCTIONOFTHEHTERTANDREGULATIONOFHIFBIDIRECTIONALPROMOTERGENECARRYINGTHESEASELECTIVEADENOVIRUS，INVITROOBSERVATIONOFSEAGENEEXPRESSIONINBLADDERCANCERCELLSANDSTIMULATELYMPHOCYTEFUNCTIONASSOCIATEDCYTOKINESANDTHEIRCOMBINATIONOFANTITUMORCELLSMETHODSTHETELOMERASEPROMOTERHTERTANDHYPOXIAINDUCIBLEFACTORPROMOTERFHIFAREDIGESTEDTHECONNECTIONINTHEDEFICIENTADENOVIRUSELAANDE1BSHUTTLEPLASMIDSCQUENCESPRIORTOCONTROLELAANDELBEXPRESSIONCMVPROMOTERANDSEASV40GENEEXPRESSIONANDREGULATIONOFTERMINATION，ANDTHESHUTTLEVECTORBACKBONEPLASMIDLIPOSOMECOTRANSFECTEDHUMANEMBRYONICKIDNEY293CELLSFORHOMOLOGOUSRECOMBINATIONTOOBTAINDUALREGULATIONOFSELECTIVEREPLICATIONADENOVIMSH2SEA一AD，TOGETPOSITIVEPLAQUE，EXTRACTED百ANDVIRALDNA，THEPCRAMPLIFICATIONOFTHEVIRUS，CESIUMCHLORIDEGRADIENTPURIFICATIONOFADENOVIRUS，VIRUSTITCRTHEVIRUSWILLGETBLADDERCANCERCELLSTRANSFECTEDEJ，RTPCRDETECTIONOFSEAMRNAEXPRESSIONINTUMORCELLS，IMMUNOFLUORESCENCELOCALIZATIONSEAEXPRESSEDINTUMORCELLSWESTERNBLOTDETERMINATIONOFPROTEINEXPRESSION，DYNAMICOBSERVATIONUNDERTHEMICROSCOPEWERECULTUREDLYMPHOCYTESANDTUMORCELLS，THEGROWTHOFLIVINGCELLS，M1VRTEST，ELISADETECTIONOFIL2，IL4，TNFSECRETIONRESULTSAPPLICATIONOFPCR，RESTRICTIONCRLZYMCANALYSISANDDNASEQUENCINGSHOWEDMATTHESUCCESSFULCONSTRUCTIONOFSHUTTLEPLASMIDP3L5CSSSEA，BYHOMOLOGOUSRECOMBINATIONSUCCESSFULLYCARRYSUPERANTIGENSEAGENEFRAGMENTSH2SEAADADENOVIRUSSEARTPCRDETECTIONOFMRNAEXPRESSIONINTUMORCELLSAGAROSEGELELECTROPHORESISSHOWSCLEARBANDSAT252BP；SEENBYIMMUNOFLUORESCENCEANDWESTERN。BLOTPROTEINMADECLEAR；LYMPHOCYTESANDTUMORCELLSWERECULTUREDTUMORCELLSL2，24，48HOURSOFTHEEXPERIMENTALGROUPWASSIGNIFICANTLYTHANTHECONTROLGROUP；MTTTEST12，24，48HOURSINTHEEXPERIMENTALGROUPTHANCONTROLGROUPTHENUMBEROFLIVINGCELLS；ELISADETECTIONOFIL2，IL一4，TNFSECRETIONWEREHIGHEL“THANTHEEXPERIMENTALGROUPCONCLUSION1CARRYTHECHOICEOFSEAGENEADCNOVIRUSH2SEAADGENEWASSUCCESSFULLYCONSTRUCTEDANDEXPRESSED2PRELIMINARYVALIDATIONOFTHEROLEOFTUMORCELLKILLING3PRELIMINARYVALIDATIONRELATEDFACTORSTOSTIMULATETHESECRETIONOFLYMPHOCYTEFUNCTIONKEYWORDSADENOVIRUSSEATUMORN

簡介：病毒性心肌炎（VMC）是由病毒侵犯心臟引起的心臟局灶性或彌漫性的急性、亞急性及慢性炎癥，因其急性期后仍可有病毒活動以及猝死或演變?yōu)閿U張型心肌病的可能，對兒童或成人的健康構(gòu)成極大威脅。近年來發(fā)病率在我國呈上升趨勢，已成為危害人類健康的常見病。因此，對本病的防治工作已引起世界醫(yī)學(xué)界的重視。中醫(yī)藥在治療VMC方面審證求因，辨證施治，用藥靈活，思路廣闊，從整體出發(fā)，“治心不止于心，調(diào)節(jié)他臟以治心”，在臨床上取得了較好的療效。導(dǎo)師龐敏教授從事臨床工作二十余年，運用中醫(yī)藥治療病毒性心肌炎具有豐富臨床經(jīng)驗，認為其發(fā)病與體質(zhì)虛弱，飲食勞倦，情志失調(diào)，感受外邪及藥食不當(dāng)?shù)扔嘘P(guān)，臨床結(jié)合四診，采用辨證論治原則，對本病提出相應(yīng)的治療方藥，取得滿意臨床療效。本文匯集了多年治療經(jīng)驗，將散在的經(jīng)驗按一定的內(nèi)在邏輯性和規(guī)律性歸納總結(jié)，較系統(tǒng)地整理了各專家經(jīng)驗和導(dǎo)師龐敏教授在治療病毒性心肌炎的經(jīng)驗方法，以期為中醫(yī)規(guī)范治療本病提供依據(jù)。

簡介：背景和目的新發(fā)病毒感染疾病是本世紀(jì)對人類公共衛(wèi)生的新挑戰(zhàn)，面對突如其來的大規(guī)模爆發(fā)性新發(fā)病毒感染，我們經(jīng)常束手無策。如果能夠在已知的有可能爆發(fā)感染的病毒中預(yù)先了解病毒的感染機制、預(yù)測其爆發(fā)的可能性、構(gòu)建可靠而有效的病毒檢測體系以及治療措施，這些疾病是可以被預(yù)防和控制的。博爾納病病毒（BNADISEASEVIRUS，BDV）屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的新發(fā)病毒。一百多年前首次在德國發(fā)現(xiàn)時，BDV曾經(jīng)導(dǎo)致大量馬匹發(fā)生爆發(fā)性腦炎而死亡，因而被認為是烈性病毒。人類中發(fā)現(xiàn)的BDV感染病例，引起的是慢性的潛伏感染和精神行為異常。由于BDV有在動物中爆發(fā)的先例，不能排除其通過自然變異引起人群爆發(fā)感染的可能。更值得關(guān)注的是，今年初NATURE報道，BDV的核蛋白基因已經(jīng)部分整合到人類和部分動物的基因組內(nèi)，該病毒與人類多種疾病的發(fā)病有關(guān)。建立完善的檢測體系是研究BDV關(guān)鍵的第一步，所以在驗證和比較BDV的各種檢測方法的基礎(chǔ)上，構(gòu)建不同需要下BDV檢測方法的組合預(yù)案以及運用這些檢測方法研究BDV的感染機制意義重大。方法1將課題組新建立的BDVP40（NEUCLEOPROTEIN）實時熒光PCR檢測方法與早期建立的BDVP24（PHOSPHOPROTEIN）實時熒光PCR檢測方法用持續(xù)感染的BDV細胞株進行敏感性、特異性、重復(fù)性、穩(wěn)定性的評估和實際應(yīng)用。2構(gòu)建BDV磷蛋白轉(zhuǎn)染的細胞模型，建立BDV的原位PCR檢測方法，與抗體檢測方法比較，并在實時熒光PCR檢測呈陽性的樣本上進行實際應(yīng)用。3應(yīng)用ELISA法檢測樣本的循環(huán)免疫復(fù)合物（CIRCULATINGIMMUNECOMPLEXES，CIC），并與實時熒光PCR、抗體檢測結(jié)果進行對比。4比較以上各種方法的特點，建立適合于不同需要的BDV檢測組合預(yù)案。5使用原位PCR、ELISA和熒光顯微鏡在構(gòu)建的BDV磷蛋白轉(zhuǎn)染的細胞模型上觀察BDVP24轉(zhuǎn)染的細胞在轉(zhuǎn)染后各個時期核酸和蛋白的亞細胞定位和表達量。使用MTT檢測磷蛋白轉(zhuǎn)染對少突膠質(zhì)細胞株（OLIGODENDROCYTE，OL）的影響。結(jié)果1兩種檢測方法敏感性、特異性均好，不同批次試劑的檢測結(jié)果差異較小，加速破壞實驗顯示試劑對溫度的耐受性好。在兩種檢測方法的實際應(yīng)用中對臨床病人檢測陽性率為36％（7198，P24和P40檢測方法），對動物檢測陽性率為豬44％（16360，P24檢測方法）和42％（15360，P40檢測方法），馬17％（9527，P24檢測方法）和15％（8527，P40檢測方法）。該檢測方法可以作為BDV大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查和實驗室研究的可靠工具。2在OL細胞磷蛋白轉(zhuǎn)染的細胞模型上，建立并驗證了原位PCR檢測BDV的方法，并在實時熒光PCR檢出陽性的病例的外周血淋巴細胞上進行了實際應(yīng)用。3使用ELISA（針對CIC）檢測發(fā)現(xiàn)BDV陽性率為36％，高于RNA檢測和抗體檢測的陽性率。提示我國BDV以攜帶形式感染的人群遠遠高出顯性的感染人群。4通過對以上各種方法的綜合比較，建立了針對流行病學(xué)調(diào)查、臨床診斷和感染機制研究的聯(lián)合檢測預(yù)案。5BDV轉(zhuǎn)染的早期磷蛋白主要分布在細胞核，而后期則分布于整個細胞；磷蛋白的核酸始終分布在細胞核內(nèi)；MTT檢測發(fā)現(xiàn)BDV磷蛋白對神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生長具有抑制作用。結(jié)論通過比較BDV的實時熒光PCR、原位PCR、抗體、CIC檢測方法的特點，根據(jù)它們適應(yīng)的檢測范圍，建立了不同要求下的BDV檢測方法的組合預(yù)案。使用相關(guān)的檢測方法研究BDV的感染機制發(fā)現(xiàn)BDV磷蛋白轉(zhuǎn)染后的亞細胞定位與真病毒感染的過程相似，而且這種轉(zhuǎn)染抑制了OL細胞的生長。

簡介：點擊查看更多單純皰疹病毒性腦炎的診治概況（附一例報告）.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：研究背景共價閉合環(huán)狀DNACCCDNA是乙型肝炎病毒HBV在細胞內(nèi)復(fù)制過程的初始模板也是病毒在宿主細胞核內(nèi)形成的第一個復(fù)制中間體它的形成標(biāo)志著病毒在宿主細胞內(nèi)感染狀態(tài)的建立和復(fù)制循環(huán)的開始。HBVCCCDNA在肝細胞核內(nèi)形成含量相對穩(wěn)定的池目前絕大多數(shù)臨床上應(yīng)用的抗HBV藥物均難以清除細胞內(nèi)的CCCDNA被認為是抗病毒治療后乙型肝炎復(fù)發(fā)的重要原因。HBVCCCDNA的檢測對抗HBV藥物的研發(fā)和應(yīng)用評價以及慢性乙型肝炎CHB患者的病情監(jiān)測和抗病毒療效評估等具有十分重要的臨床意義。就現(xiàn)有抗HBV藥物的療效看來尚無能夠迅速抑制或是清除被感染肝細胞內(nèi)HBVCCCDNA的治療藥物或方案針對HBVCCCDNA的藥物研發(fā)和療效監(jiān)測工作尚未取得明顯進展。本研究以我們實驗室前期建立的一套特異、靈敏的HBVCCCDNA檢測技術(shù)為基礎(chǔ)在HEPG2215細胞平臺上對胡黃連苷促進清除HBVCCCDNA的作用效果和特點進行了對比評估并試圖對相關(guān)機制作出初步探討。本研究共分為三個部分一胡黃連苷促進清除HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA的作用效果和特點研究。以阿德福韋酯為對照分別觀察胡黃連苷和阿德福韋酯作用后HEPG2215細胞培養(yǎng)上清中HBVDNA含量變化定量檢測細胞內(nèi)HBVDNA、CCCDNA和PGRNA水平并計算相應(yīng)抑制率比較胡黃連苷與阿德福韋酯作用的不同效果和特點。二胡黃連苷對HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA超螺旋分布的影響。采用專門的二維凝膠電泳方法觀察胡黃連苷作用前后HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA超螺旋數(shù)量分布有無變化并與阿德福韋酯作用結(jié)果相對比利用非參數(shù)秩和檢驗方法進行統(tǒng)計分析探尋胡黃連苷對HBVCCCDNA超螺旋數(shù)量分布的影響。三胡黃連苷對HEPG2215細胞內(nèi)OAS1、STAT2、ISGF3Γ、MYD88、MXA等候選基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。對于胡黃連苷作用后有明顯差異轉(zhuǎn)錄的基因再以SIRNA技術(shù)選擇性沉默阻斷以反向驗證相關(guān)基因參與胡黃連苷抗HBV作用的可能性。第一部分胡黃連苷對HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA含量的影響目的觀察胡黃連苷抑制HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA的作用效果及特點。方法分別用含胡黃連苷50ΜGML、胡黃連苷100ΜGML或阿德福韋酯5ΜGML的細胞培養(yǎng)液作用于HEPG2215細胞加藥后2D、5D收集細胞及培養(yǎng)上清液用實時熒光定量PCR方法檢測上清和細胞內(nèi)HBVDNA、細胞內(nèi)HBVCCCDNA和PGRNA水平分別計算抑制率。結(jié)果①胡黃連苷50ΜGML作用后2D和5D上清HBVDNA抑制率分別為4974％和7948％；細胞內(nèi)HBVCCCDNA抑制率4355％和5643％RCDNA抑制率4339％和6386％PGRNA抑制率5472％和5608％。②胡黃連苷100ΜGML作用后2D和5D上清HBVDNA抑制率分別為5111％和8207％；細胞內(nèi)HBVCCCDNA抑制率4113％和5759％RCDNA抑制率4509％和6731％PGRNA抑制率5268％和5247％。③阿德福韋酯作用后2D和5D上清HBVDNA抑制率分別為2556％和9244％；細胞內(nèi)HBVCCCDNA抑制率1854％和4719％RCDNA抑制率2120％和7147％PGRNA抑制率1114％和3761％。結(jié)論胡黃連苷能夠明顯抑制HEPG2215細胞內(nèi)HBV復(fù)制水平對HBVCCCDNA也具有抑制作用而且在作用時相上早于阿德福韋酯可能存在不同的作用機制。第二部分胡黃連苷對HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA超螺旋分布的影響目的觀察HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA超螺旋數(shù)量分布規(guī)律及胡黃連苷、阿德福韋酯對其影響。方法實驗共分3組分別用含胡黃連苷50ΜGML、阿德福韋酯5ΜGML和空白細胞培養(yǎng)液作用于HEPG2215細胞加藥后2D、5D收集細胞提取細胞內(nèi)HBVCCCDNA經(jīng)二維凝膠電泳分離含有不同超螺旋數(shù)量的CCCDNA轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜與32PDCTP標(biāo)記的HBVDNA探針雜交、放射顯影。凝膠成像系統(tǒng)掃描A0～5個超螺旋、B6～10個超螺旋、C11～15個超螺旋、D16～20個超螺旋區(qū)域條帶灰度值計算各區(qū)域灰度積分值所占構(gòu)成比用非參數(shù)秩和檢驗方法分析組間差異。結(jié)果①用藥2D時胡黃連苷組各區(qū)構(gòu)成比中位值為A1494％、B3332％、C3596％、D1405％阿德福韋酯組各區(qū)構(gòu)成比中位值為A1300％、B2004％、C2555％、D3904％空白對照組各區(qū)構(gòu)成比中位值為A1236％、B2104％、C2322％、D4077％。其中胡黃連苷組分別與空白對照組和阿德福韋酯組CCCDNA超螺旋分布有統(tǒng)計學(xué)差異NEMENYI檢驗Χ2131286X212828P025。②用藥5D時胡黃連苷組各區(qū)構(gòu)成比中位值為A1540％、B3348％、C3447％、D1507％阿德福韋酯組各區(qū)構(gòu)成比中位值為A1330％、B2052％、C2322％、D4212％空白對照組各區(qū)構(gòu)成比中位值為A1302％、B2124％、C2291％、D4061％。其中胡黃連苷組分別空白對照組和阿德福韋酯組CCCDNA超螺旋分布有統(tǒng)計學(xué)差異NEMENYI檢驗Χ2131161Χ212958P075。③空白對照組HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA分子所含超螺旋數(shù)量分布并不均勻以D區(qū)所占比例最多約40％B區(qū)和C區(qū)次之各約20％A區(qū)最少2D和5D間數(shù)據(jù)分布差異沒有顯著性MANNWHITNEYU檢驗U0321P0748。結(jié)論HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA超螺旋數(shù)量呈現(xiàn)相對固定的異質(zhì)性分布狀態(tài)阿德福韋酯處理2D和5D均未改變分布規(guī)律；胡黃連苷能夠減少HEPG2215細胞內(nèi)HBVCCCDNA內(nèi)部超螺旋數(shù)量可能導(dǎo)致CCCDNA結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的減低促進HBVCCCDNA的清除。第三部分胡黃連苷對HEPG2215細胞內(nèi)部分基因轉(zhuǎn)錄水平的影響目的觀察胡黃連苷能否影響HEPG2215細胞內(nèi)部分候選基因的轉(zhuǎn)錄探討其與抗HBV效應(yīng)的關(guān)系。方法①選取既往報道的能夠促進感染細胞內(nèi)HBVPGRNA降解的部分基因如25寡腺苷酸合成酶1OAS1、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子2STAT2、干擾素刺激基因因子3ΓISGF3Γ、髓樣細胞分化蛋白MYD88和MXA蛋白作為候選基因?qū)崟r熒光定量RTPCR方法檢測胡黃連苷作用后48HHEPG2215細胞內(nèi)OAS1、STAT2、ISGF3Γ、MYD88和MXA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物MRNA水平變化以ΒACTIN基因MRNA作為檢測內(nèi)參照。②用MYD88SIRNA誘導(dǎo)沉默HEPG2215細胞內(nèi)MYD88基因轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR方法檢測胡黃連苷作用下HEPG2215細胞內(nèi)MYD88MRNA、HBVPGRNA及培養(yǎng)上清中HBVDNA水平變化。③用MYD88SIRNA誘導(dǎo)沉默HEPG2215細胞內(nèi)MYD88基因轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR方法檢測胡黃連苷作用下HEPG2215細胞內(nèi)MYD88MRNA、HBVCCCDNA水平變化二維電泳方法觀察CCCDNA超螺旋分布情況并作組間比較。結(jié)論胡黃連苷作用可以誘導(dǎo)HEPG2215細胞內(nèi)MYD88基因活躍轉(zhuǎn)錄并通過MYD88途徑促進HBVPGRNA的降解。但是MYD88并未參與胡黃連苷早期抑制HBVCCCDNA的過程胡黃連苷體外抑制HBVCCCDNA、減少HEPG2215細胞內(nèi)CCCDNA超螺旋數(shù)量的作用可能依賴其它宿主基因的參與。

簡介：第一部分常見呼吸道病毒快速細胞培養(yǎng)與鑒定體系的建立背景病毒的實驗室檢測方法有病毒分離培養(yǎng)、病毒核酸分子生物學(xué)檢測、病毒直接檢查、血清學(xué)試驗檢測病毒特異性抗體等。在國外發(fā)達國家的臨床實驗室，病毒檢測技術(shù)均比較成熟，但國內(nèi)病毒檢測技術(shù)普及程度低，全國的大型綜合醫(yī)院大多沒有常規(guī)進行臨床呼吸道病毒檢測。少數(shù)開展病毒檢測的醫(yī)院，病毒檢測手段相對單一，較少應(yīng)用病毒診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”病毒分離，多數(shù)僅應(yīng)用一至兩種病毒學(xué)檢測方法，如免疫熒光（IF）檢測呼吸道分泌物中的病毒抗原、分子生物學(xué)技術(shù)檢測病毒核酸或血清學(xué)試驗檢測病毒特異性IGM抗體等。建立多種病毒診斷方法，包括病毒分離，對呼吸道病毒感染的監(jiān)測和診斷具有重要的臨床意義。目的改進細胞分離培養(yǎng)技術(shù)，聯(lián)合直接IF檢測，建立常見呼吸道病毒快速細胞培養(yǎng)與鑒定體系，并驗證該體系的檢測敏感性、檢測時間和檢測通量。方法采集廣東省中醫(yī)院急診科成人急性呼吸道感染（ARI）患者和深圳市兒童醫(yī)院兒童ARI患者的鼻咽拭子標(biāo)本，接種到狗腎細胞（MDCK）、恒河猴腎細胞（LLCMK2）、人鼻咽癌細胞（HEP2）三種細胞上，同時設(shè)置陰性對照。室溫3000RPM，離心60MIN后補加等體積的細胞維持培養(yǎng)液，置34℃、含5％CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每周觀察細胞病變（CPE）3～4次，于標(biāo)本接種后36～48H及第5～7天，各吸取50ΜLMDCK及LLCMK2培養(yǎng)上清做血凝試驗（HAT）。CPE和或HAT陽性者，以病毒特異性單克隆熒光抗體甲型流感病毒FLUA、乙型流感病毒FLUB、呼吸道合胞病毒RSV、腺病毒ADV、副流感病毒1、2、3型PIV1、2、3做IF鑒定。所有標(biāo)本接種后7天，對陰性細胞再做IF篩查，陰性者判為陰性，陽性者根據(jù)陽性細胞類型選擇對應(yīng)的病毒特異性抗體做IF鑒定。將ATCC標(biāo)準(zhǔn)病毒株，分別接種到對應(yīng)宿主細胞上，3～7天后刮取細胞作涂片固定后低溫保存，在IF時作為陽性對照。結(jié)果①2009年1月至4月期間，共檢測拭子標(biāo)本641份，病毒陽性87份，陽性率136％。檢出病毒88株（1份標(biāo)本為FLUAB雙重感染），其中FLUA20株，F(xiàn)LUB39株，PIV12株，PIV21株，PIV315株，ADV8株，RSV2株。②每塊96孔板可接種11份標(biāo)本，每批接種4塊96孔板較為合適，即接種44份標(biāo)本。③標(biāo)本接種后，出現(xiàn)陽性結(jié)果的平均時間分別為FLU2D、ADV3D、PIV34D，RSV5D。結(jié)論本次實驗建立了一個穩(wěn)定的呼吸道病毒快速細胞培養(yǎng)與鑒定體系，敏感性好，特異性佳，每批可檢測44份標(biāo)本，得到陽性結(jié)果的平均時間約為2～5天，可應(yīng)用于常見呼吸道病毒分離檢測。第二部分成人社區(qū)獲得性肺炎的病毒病原學(xué)及臨床特征分析背景社區(qū)獲得性肺炎CAP是威脅人類健康的最常見感染性疾病之一。在我國，肺炎在所有死因中排第五位。然而，目前對CAP的病原學(xué)仍知之不足，大約有17％48％的CAP患者病原學(xué)不明。20世紀(jì)以來的幾次全球流行性急性呼吸道病毒感染性疾病，如20世紀(jì)的4次流感大流行、1997年最先報道于香港的人感染高致病性禽流感、2003年的嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）等均嚴(yán)重威脅著人類的健康。2009年爆發(fā)的全球甲型H1N1流感大流行，截止至2010年3月7日，已導(dǎo)致全球死亡16713例，其中中國有796例，而未來的流行趨勢尚不明朗。我國華南地區(qū)因特殊的地理位置、海洋季風(fēng)氣候和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方式，被國際學(xué)術(shù)界普遍認為是“世界流感中心”。2003年的SARS亦被認為起源于廣東。而廣州市是我國華南地區(qū)的中心大城市，與國際及內(nèi)地其他城市接觸交流頻繁。近年來流行病學(xué)調(diào)查顯示病毒性肺炎的發(fā)病率高達56％，病毒已被公認為是CAP的重要病原學(xué)之一，但是CAP診治指南并沒有提供詳細的有關(guān)病毒性肺炎的評估和治療建議。國內(nèi)目前尚缺乏成人病毒性CAP病原及臨床特征的詳細資料。目的檢測成人CAP的病毒病原學(xué)，分析臨床特征。方法收集2009年4月至2009年12月期間，就診于廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院的CAP患者的鼻咽拭子、急性期與恢復(fù)期（24周后）血清，記錄病史資料。應(yīng)用常見呼吸道病毒快速細胞培養(yǎng)與鑒定體系、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）法檢測鼻咽拭子標(biāo)本，應(yīng)用血凝抑制試驗（HI）、間接IF試驗檢測急性期與恢復(fù)期血清中呼吸道病毒特異性IGG抗體滴度（4倍或以上升高為陽性）。呼吸道病毒快速細胞培養(yǎng)與鑒定、RTPCR或血清學(xué)試驗任一項陽性則判斷為病毒感染。結(jié)果①最終入選CAP病例149例，男性84例，女性65例，年齡中位數(shù)M（四分衛(wèi)間距IQR）為6035～77歲，鼻咽拭子149份，70例有雙份血清。89例患者伴有慢性阻塞性肺疾病等慢性基礎(chǔ)疾病。②病毒檢測陽性48例，陽性率322％。不同年齡段人群，陽性率不同，以16～19歲的青少年（545％）及79歲以上的老年人（573％）最高，各年齡組的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0023）。單一病毒感染44例（FLUA24例，F(xiàn)LUB5例，ADV及PIV1各2例，PIV311例），雙重病毒感染4例。其中有1例FLUA和1例FLUAADV感染患者痰培養(yǎng)檢出大腸埃希菌，1例PIV3感染患者痰培養(yǎng)檢出副流感嗜血桿菌。52株病毒中，快速細胞培養(yǎng)與鑒定體系檢出18株病毒，RTPCR檢出41株病毒，血清學(xué)試驗檢出21株病毒。有雙份血清的70例患者中，與“金標(biāo)準(zhǔn)”病毒培養(yǎng)比較，RTPCR法的檢測敏感性較高（P0003），特異性為807％，血清學(xué)試驗的檢測敏感性類似（P0118），特異性為754％，③48例病毒性肺炎患者，年齡M（IQR）為58（30～79）歲，男性27例，26例伴有基礎(chǔ)疾病。188％的病毒性肺炎患者發(fā)病前有發(fā)熱患者接觸史，與病毒檢測陰性的肺炎患者（99％）相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P013）。④病毒性肺炎病例中，高熱≥39℃（667％）、乏力（646％）、咳膿痰（521％）、咽痛（458％）、呼吸困難（417％）、鼻部癥狀（417％）為最常見的癥狀。FLUA及PIV3感染患者可伴有咯血、胸悶胸痛。FLU及PIV3感染患者呼吸困難及消化道癥狀亦多見。⑤48例病毒性肺炎患者，兩個或以上肺葉病變的比例達563％，有6例（125％）出現(xiàn)胸腔積液，與病毒檢測陰性肺炎患者相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P0384和0371）。⑥病毒性肺炎患者中，CURB65評分為中高危及有并發(fā)癥的比例（208％、667％），均有高于病毒檢測陰性患者的趨勢（139％、495％），但無統(tǒng)計學(xué)差異（P0177和0063）。542％的病毒性肺炎患者需要吸氧，375％出現(xiàn)電解質(zhì)紊亂，明顯高于病毒檢測陰性組（P0008和0002）。病毒性肺炎患者中，有基礎(chǔ)疾病者的呼吸衰竭及腎功能損害等的發(fā)生率高于無基礎(chǔ)疾病者。結(jié)論1病毒是CAP的常見病原體之一，在本檢測范圍內(nèi)，最常見的病毒病原體是FLUA和PIV3。2不同病毒診斷方法的敏感性及適用范圍不同。3根據(jù)臨床特征不能區(qū)分病毒性肺炎和非病毒性肺炎，不能鑒別各種病毒性肺炎。4病毒性肺炎患者有細菌合并感染的可能。5有必要對需要住院的社區(qū)獲得性肺炎病例進行病毒檢測，尤其重癥患者。

簡介：獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名水蓑簽字日期知IF年口6月L’日L㈣必學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本論文編入中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會提供查詢，授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本論文編入中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會提供查詢。論文的公布包括刊登授權(quán)江蘇大學(xué)研究生處辦理。本學(xué)位論文屬于不保密團。學(xué)位論文作者簽名I水茲掃年礦占月?？谌?

簡介：目的通過對AECOPD流感病毒甲型感染的辨證分型，快速檢測流感病毒甲型，觀察病炎清Ⅵ號對慢性阻塞性肺疾病急性加重流感病毒甲型感染的臨床療效。方法在深圳市中醫(yī)院ICU和呼吸內(nèi)科病房及部分門診收集具有AECOPD感染疑似病例；并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA和血清學(xué)對這些疑似病例進行病原學(xué)檢測，咽喉含漱液流感病毒甲型抗原IGA陽性和血清抗體IGM酣滴度4倍或4倍以上升高者進入研究范圍，篩選出60例病人，隨機分為治療組和對照組，每組各30例，在AECOPD常規(guī)治療的基礎(chǔ)上，治療組予口服中藥免煎劑病炎清Ⅵ號，觀察組予靜滴病毒唑注射液進行療程為2周的臨床觀察。結(jié)果兩組在性別、年齡、病程、病情輕重程度方面差異性不明顯，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理具有可比性。病炎清Ⅵ號組的總有效率為8333％，優(yōu)于病毒唑?qū)φ战M60％。在改善相關(guān)癥狀體征的時間包括發(fā)熱、咳嗽、咳痰、氣喘及肺部噦音等、血氣分析和肺功能等均優(yōu)于西藥病毒唑?qū)φ战M。結(jié)論根據(jù)上述臨床觀察結(jié)果，以及對AECOPD流感病毒甲型感染病因病機的認識，經(jīng)分析得出如下結(jié)論一、AECOPD流感病毒甲型感染的病因為外感風(fēng)溫疫毒，病機為疫毒郁熱，痰瘀阻肺；二、采用酶聯(lián)免疫試驗檢測流感病毒抗原，方法簡便，易于開展，34H出結(jié)果，為臨床醫(yī)生快速診斷流感病毒感染提供客觀依據(jù)。三、中醫(yī)藥在治療AECOPD流感病毒甲型感染具有西藥無可比擬的優(yōu)勢。中醫(yī)藥的這方面優(yōu)勢亟待臨床工作者進一步開發(fā)、研究。

簡介：第一部分老年大鼠空間記憶后海馬NMDA受體2B亞基MRNA表達的變化目的觀察老年大鼠在Y迷宮訓(xùn)練建立空間記憶后NMDA受體2B亞基MRNA在海馬區(qū)的表達變化。方法用Y迷宮對老年（18月齡）大鼠進行短期強化訓(xùn)練，建立學(xué)習(xí)記憶后，于即刻，3H，6H，12H，24H，3D每組處死8只老年大鼠，取雙側(cè)海馬，應(yīng)用RTPCR方法檢測大鼠海馬NMDA受體2B亞基（NR2B）MRNA的表達變化。結(jié)果訓(xùn)練組動物（包括即刻，3H，6H，12H，24H組）海馬NR2BMRNA的表達量（分別為68383±7813，80600±8143，84883±8084，91517±8425，56853±7714）明顯高于對照組和假訓(xùn)練組（39817±7476，41833±7017）（P結(jié)論NR2B可能參與了學(xué)習(xí)記憶信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，且在記憶訓(xùn)練后12H時表達最多，3D時恢復(fù)到基礎(chǔ)水平。第二部分不同濃度七氟烷對老年大鼠認知功能的影響目的探討不同濃度七氟烷對老年大鼠認知功能的影響。方法18月齡雄性SD大鼠40只，體重500～650G，隨機分為3組，對照組（C組，N8）吸入空氣，15％七氟烷組S1組，N16吸入15％七氟烷2H，3％七氟烷組S2組，N16吸入3％七氟烷2H。于吸入七氟烷后1、7D（T1，2）S1組和S2組隨機取8只大鼠，采用Y型迷宮實驗行認知功能測試，認知功能測試后12H時處死大鼠，斷頭取腦，采用RTPCR方法測定海馬N甲基D天冬氨酸受體2B亞單位（NMDAR2B）MRNA表達。結(jié)果與C組比較，S2組吸入七氟烷后1D大鼠認知功能減退，海馬NMDAR2BMRNA表達上調(diào)。結(jié)論吸入15％七氟烷后老年大鼠認知功能無明顯變化；吸入3％七氟烷后1D老年大鼠認知功能減退，可能與其上調(diào)海馬NMDAR2BMRNA表達有關(guān)。

簡介：F害傷裝案大獸碩士學(xué)位論文抗人輪狀病毒卵黃免疫球蛋白的制備及性質(zhì)研究研究生指導(dǎo)教師專業(yè)名稱研究方向所在學(xué)院查星縫型蓬塹塑攫一盒品型堂建旦生塑煎苤貪雖堂隆一沈陽農(nóng)業(yè)人學(xué)2006年06月沈刖農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文摘要卵黃免疫球蛋白I咖UNOGLOBUIINY01K，IGY，又稱雞卵黃免疫球蛋白，是產(chǎn)蛋雞經(jīng)免疫刺激后，機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，在卵黃成熟期由血液中IGG被選擇性地轉(zhuǎn)移到卵黃中形成的LOEKENMRCTAL，1983，它與抗體具有相似的結(jié)構(gòu)及相應(yīng)的活性。IGY與哺乳類動物血清抗體相比具有許多優(yōu)點如不激活哺乳動物的補體系統(tǒng)，不與細菌或哺乳動物細胞的受體結(jié)合，不活化樣品中內(nèi)源性的補體系統(tǒng)，不與類風(fēng)濕性因子RF結(jié)合從而避免假陽性結(jié)果ALARSSONETAL，1991等等，在免疫診斷學(xué)領(lǐng)域有著重要的作用。此外，特異性IGY還具有抗菌、抗病毒和抗外毒素等多種活性，因此口服特異性IGY，可有效地作用于病原體，以達到消化道感染性疾病的防治的目的，尤其對不能產(chǎn)生主動免疫應(yīng)答的個體如新生兒或有獲得性免疫缺乏癥的兒童以及由于化學(xué)治療、營養(yǎng)失調(diào)、老年化引起免疫功能下降的老年人等具有一定的保護作用JFICH協(xié)LIETA1，1993，因此，IGY作為一種食品中的功能因子具有廣闊的應(yīng)用前景。為推動我國功能性食品的發(fā)展，本論文以自制的人輪狀病毒油乳滅活疫苗為抗原對產(chǎn)蛋雞進行人工免疫，對特異性IGY的產(chǎn)生規(guī)律及性質(zhì)進行了系統(tǒng)的研究，得出結(jié)論如下1以人一WA株輪狀病毒作為抗原，制作油乳滅活疫苗。將所研制的疫苗按油乳疫苗的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行物理穩(wěn)定性及安全性檢驗，結(jié)果表明該疫苗具有良好的穩(wěn)定性及安全性。2用該疫苗對產(chǎn)蛋雞以不同劑量08104TCID、16104TCID、24L04TCID分別進行翅下皮下、胸部肌肉免疫。免疫程序為初免一次，加強免疫兩次，每次免疫時間間隔均為7天。從初免第二天開始收集雞蛋，用水稀釋與硫酸銨兩步沉淀相結(jié)合的方法提取IGY，并用間接ELISA跟蹤檢測雞卵黃免疫球蛋白IGY活性，結(jié)果顯示翅下皮下免疫組在初免后的第LL天OD4500286開始出現(xiàn)特異性IGY，胸部肌肉免疫組在

簡介：目的探討呼吸道合胞病毒（RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV）感染中樞神經(jīng)元細胞（NEURON2AN2A），細胞膜上的TOLL樣受體4（TOLLLIKERECEPT4TLR4）和核仁素受體（NUCLEOLINNCL或C23）的變化情況，研究TLR4和核仁素受體在RSV感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)所致?lián)p傷中的介導(dǎo)作用，為臨床RSV感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)的預(yù)防和治療提供新的思路。方法以RSV感染體外培養(yǎng)的N2A細胞，并通過SIRNA沉默TLR4、核仁素受體表達，分別于感染后1、2、4、12、24和48H不同時間點收集細胞和培養(yǎng)上清液。（1）激光共聚焦顯微鏡檢測TLR4、核仁素受體與RSVF蛋白結(jié)合情況，以及神經(jīng)核蛋白（NEUN）在N2A細胞中陽性細胞數(shù)目的表達變化；（2）用TRIZOL法提取N2A細胞總RNA，通過實時熒光定量PCR法檢測TLR4、C23MRNA轉(zhuǎn)錄水平變化；（3）免疫印跡法（WESTERNBLOT）檢測各組不同時間點TLR3、TLR4、TLR7、C23以及NFΚB蛋白水平的表達變化；4流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡情況；（5）空斑形成實驗（PLAQUEFMINGUNIT，PFU）檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中病毒增殖的滴度；（6）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中IL6、IL8和TNFΑ炎癥因子的表達。結(jié)果（1）激光共聚焦顯微鏡檢測結(jié)果顯示，TLR4和C23受體在N2A細胞膜表面可以結(jié)合RSVF蛋白，在RSV感染1、2和4H的入胞過程中，隨著感染時間點的延長，F(xiàn)蛋白與TLR4和C23的結(jié)合逐漸增加；TLR4被干擾后，RSVF蛋白標(biāo)記的藍色熒光表達強度較RSV感染組和C23SIRNA組降低，表明TLR4與F蛋白結(jié)合減少，RSV在N2A細胞內(nèi)增殖能力減弱；C23受體沉默后，核仁素受體與F蛋白結(jié)合減少，但可見TLR4結(jié)合更多F蛋白，提示TLR4可結(jié)合更多的RSV進入N2A細胞增殖；RSV感染組中N2A細胞中NEUN標(biāo)記的陽性細胞數(shù)目較TLR4SIRNA、C23SIRNA組的陽性細胞數(shù)目明顯降低。（2）在MRNA轉(zhuǎn)錄水平，TLR4和C23在感染14H的入胞過程表達量逐漸增高，4H后表達量降低，說明TLR4和C23在細胞膜上識別RSV入胞過程中具有重要的作用；在瞬時轉(zhuǎn)染TLR4SIRNA后，TLR4和C23蛋白的表達雖有上調(diào)，但表達量都比RSV感染組同時間點明顯下降，且下降有統(tǒng)計學(xué)意義；在加入C23SIRNA后，TLR4和C23MRNA表達比RSV感染組同一時間點的表達量降低。（3）WESTERNBLOT法測定結(jié)果顯示，正常對照組中TLR4和C23蛋白表達量較低，在RSV感染組，TLR4和C23蛋白在感染的1、2和4H表達水平開始增強，4H達到最高表達量，4H后開始下降，至感染的48H時，TLR4和C23蛋白表達水平較正常對照組一直處于增強狀態(tài)；在TLR4或C23SIRNA組，TLR4和C23蛋白表達雖有上調(diào)，但表達量都比RSV感染組同時間點明顯下降，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。RSV感染組中TLR3TLR7NFΚB蛋白表達升高具有時間依賴性；在C23SIRNA組，TLR3TLR7NFΚB蛋白的表達量雖有上調(diào)，仍比RSV感染組同時間點降低；在給予TLR4SIRNA處理后，TLR3TLR7NFΚB與RSV感染組和C23SIRNA組同時間點相比降低的更明顯，具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義；通過阻斷TLR4或C23受體的表達，可以降低TLR3TLR7NFΚB在RSV感染N2A細胞過程中的活化過程。（4）流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，RSV感染N2A細胞48H，可見細胞出現(xiàn)早期凋亡與晚期凋亡，晚期凋亡比例大于早期凋亡；TLR4SIRNA組和C23SIRNA組凋亡比例比RSV感染組凋亡比例下降，可見TLR4或C23阻斷后，可以降低RSV感染N2A細胞的凋亡產(chǎn)生。（5）PFU結(jié)果顯示，RSV感染N2A細胞培養(yǎng)上清中RSV滴度隨感染時間的延長而逐漸增加；分別給予TLR4或C23SIRNA干擾后，RSV復(fù)制滴度水平較RSV感染組明顯減少，TLR4SIRNA組較RSV感染組和C23SIRNA組病毒的滴度下降的更為明顯，TLR4受體在識別RSV過程中可能具有更重要的作用。（6）ELSIA法結(jié)果顯示，RSV感染組IL6、IL8和TNFΑ炎癥因子隨著感染時間的延長逐漸升高；轉(zhuǎn)染TLR4SIRNA后，IL6、IL8和TNFΑ的含量與RSV感染組同時間點相比降低更明顯；在C23SIRNA組，IL6、IL8和TNFΑ的含量與RSV感染組相比下降；沉默TLR4或C23受體表達可以減輕RSV感染過程中所產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。結(jié)論N2A細胞膜表面的TLR4和核仁素受體可以結(jié)合RSVF蛋白，從而識別病毒進入細胞，活化TLR4、C23、TLR3、TLR7、NFΚB的表達，使下游細胞炎性因子IL6、IL8和TNFΑ分泌升高，介導(dǎo)天然免疫反應(yīng)的產(chǎn)生，導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷與凋亡。

簡介：目的在建立病毒性心肌炎（VIRALMYOCARDITIS，VMC）小鼠模型基礎(chǔ)上，檢測VMC小鼠不同病變時期心肌組織中胰島素樣生長因子II受體（INSULINLIKEGROWTHFACTIIRECEPT，IGFIIR）蛋白及MRNA的動態(tài)表達水平，并結(jié)合心肌病理積分，研究IGFIIR與心肌損傷的關(guān)系，進一步探討IGFIIR參與VMC小鼠發(fā)病的可能機制，有可能為進一步防治VMC提供新的治療靶點。方法將120只雄性4周齡BALB／C小鼠隨機分為兩組實驗組（VMC組）80只，對照組40只。VMC組小鼠腹腔接種含柯薩奇B3病毒COXSACKIEVIRUSB3，CVB3的DMEM液建立VMC模型，對照組接種等量不含病毒的DMEM液。于感染后第3、7、14、28天，每組各取10只無菌收集心臟標(biāo)本，沿縱切面剖開，一部分用福爾馬林液固定，逐級脫水，石蠟包埋，制片，蘇木精伊紅染色（HEMATOXYLINEOSINSTAININGHE）染色觀察心肌病理改變并進行病理積分，同時行免疫組織化學(xué)技術(shù)（IMMUNOHISTOCHEMISTRY，IHC）測定心肌IGFIIR蛋白表達水平；另一部分放入無菌無酶凍存管，迅速放入液氮罐，再轉(zhuǎn)移至80℃冰箱凍存，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTION，RTPCR）技術(shù)測定心肌IGFIIRMRNA的相對表達量。分析IGFIIR蛋白和MRNA的動態(tài)表達水平及其與心肌病變程度的相關(guān)性。結(jié)果1、感染CVB3的VMC組小鼠陸續(xù)有精神萎靡、少動、脫毛等異常表現(xiàn)，死亡率達2375％，心臟解剖可見整體水腫，心外膜可見散在點片狀壞死灶，HE染色可見心肌細胞腫脹、變性、壞死、斷裂，核固縮，大量炎癥細胞灶性浸潤；正常對照組小鼠精神飲食正常、活動可，無死亡，心肌組織HE染色心肌纖維排列整齊，未見任何病理改變。VMC組小鼠接種病毒后的第3，7，14，28天的心肌病理積分分別為（110±0568分），（260±0699分），（140±0516分），（060±0516分），與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P2、IGFIIR蛋白免疫組化鏡下觀察，對照組小鼠心肌細胞胞漿和胞膜中可見極少量棕黃色顆粒沉積；VMC組小鼠各時間點心肌細胞中染成棕黃色的陽性顆粒明顯增多，著色更深。測平均光密度OPTICALDENSITYOD行半定量分析顯示，VMC組小鼠感染病毒后第3天心肌組織中的IGFIIR蛋白表達開始增多，第7天達到高峰后逐漸下降，直到第28天仍維持在一個較高水平。VMC組小鼠接種病毒后的第3，7，14，28天IGFIIR蛋白表達水平分別為（0257±00191），（0396±00225），（0292±00132），（0288±00136），與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P3、IGFIIRMRNA的RTPCR可見在內(nèi)參和目的基因?qū)?yīng)的泳道上均可見清晰的DNA片段，目的基因片段的灰度值與內(nèi)參灰度值的比值行半定量分析顯示，VMC組小鼠感染病毒后第3天心肌組織中的IGFIIR的基因表達開始增多，第7天達到高峰后逐漸下降，直到第28天仍維持在一個較高水平。VMC組小鼠接種病毒后的第3，7，14，28天IGFIIR的基因表達水平分別為（0584±00738），（0754±01090），（0683±00995），（0636±00925），與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P4、線性相關(guān)分析顯示，VMC組小鼠不同時點免疫組化檢測的IGFIIR的蛋白表達量與病理學(xué)積分呈正相關(guān)（R0628，P0000），VMC組小鼠不同時點RTPCR檢測的IGFIIR的基因表達量與病理學(xué)積分呈正相關(guān)（R0413，P0008），且免疫組化檢測的IGFIIR的蛋白表達量與RTPCR檢測的IGFIIR的基因表達量呈正相關(guān)（R0465，P0003）。結(jié)論IGFIIR的表達上調(diào)可能在VMC小鼠心肌損傷中起一定作用。

簡介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)人核糖核酸酶抑制因子體內(nèi)抑制B16黑色素瘤生長姓名王艇申請學(xué)位級別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師崔秀云20040601霉素篩選標(biāo)記NEO。該載體質(zhì)粒一旦被轉(zhuǎn)染入包裝細胞系PA317IP可被其表達的逆轉(zhuǎn)錄病毒外殼蛋白所包裝，從而形成有感染力，卻復(fù)制缺陷型的逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。目的研究逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLNCX介導(dǎo)人核糖核酸酶抑制因子HRI的基因治療系統(tǒng)經(jīng)靜脈途徑能否實現(xiàn)在腫瘤實驗動物模型小鼠體內(nèi)有效轉(zhuǎn)染、表達，從而通過抗血管生成產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，本實驗還要檢測該系統(tǒng)對小鼠血液和骨髓的安全性。方法經(jīng)包裝細胞系PA317體外包裝，攜帶HRI的CDNA序列的重組轉(zhuǎn)錄病毒載體經(jīng)與NACI和聚乙二醇6000PEGFI000共沉淀并離心濃縮。再經(jīng)SEPHAROSECL一4B凝膠層析純化后，經(jīng)過在NIH／3T3成纖維細胞系上的病毒滴度測定，以空載體及PBS緩沖液等為對照，經(jīng)靜脈注射給皮下接種B16黑色素瘤的C57BL／6J0鼠體內(nèi)，以病理及免疫組織化學(xué)檢測目的基因HRL在小鼠骨髓、肝臟和脾臟等體內(nèi)各臟器的表達水平，腫瘤血管生成，觀察HRI通過抗血管生成對黑色素瘤生長的抑制作用。以外周血細胞記數(shù)血液生化和骨髓染色體檢測評價病毒載體對機體造血系統(tǒng)的影響。結(jié)果轉(zhuǎn)染的HRI基因產(chǎn)物在實驗動物體內(nèi)有效地表達，并對B16黑色素癟表現(xiàn)出了抗血管生成效應(yīng)，能抑制黑色素瘤的生長，同時不伴有明顯的對遣血系統(tǒng)的影響，同時我們發(fā)現(xiàn)HRI在腫瘤纖維包膜中的成纖維細胞有高表達。結(jié)論介導(dǎo)HRL基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以經(jīng)靜脈在小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染通過抗血管生成實現(xiàn)對B16黑色素瘤的抑制。HRI在腫瘤纖維包膜中的成纖維細胞的高表達提示腫瘤發(fā)生時快速生長的成纖維細胞可以成為重要靶點。關(guān)鍵詞核糖核酸酶抑制因子逆轉(zhuǎn)錄病毒載體B16黑色素瘸基因治療

簡介：背景和目的乙型肝炎病毒HBV本身無肝細胞毒性然而在HBV感染過程中能激發(fā)一系列細胞免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)引起肝細胞損害。此過程中自身免疫指標(biāo)可能激活。本研究觀察慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中抗核抗體ANA、白介素17IL17水平與慢性乙型病毒性肝炎病程的變化探討ANA和IL17在慢性乙型病毒性肝炎發(fā)病過程中的作用。為慢性乙型病毒性肝炎的診斷治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。材料和方法1對220例慢性乙型病毒性肝炎患者血清進行ANA、生化學(xué)及病毒定量檢測并比較E抗原陽性、E抗原陰性病人中ANA的變化探討ANA與E抗原轉(zhuǎn)化的關(guān)系。2對乙型肝炎病毒攜帶者、慢性乙肝肝硬化患者各35例及192例慢性乙型病毒性肝炎患者的血清進行ANA、ALT、TB檢測以觀察ANA在不同臨床分型的乙肝病人血清中的變化。3對慢性乙型病毒性肝炎予復(fù)方甘草酸制劑治療20天前后、乙肝肝炎病毒攜帶者各30例患者血清進行ANA、IL17檢測從而分析幾者之間的關(guān)系。結(jié)果1220例慢性乙型病毒性肝炎患者中有54例ANA陽性占2451％ANA陽性慢性乙型病毒性肝炎患者與ANA陰性患者比較ALT、TB、HBVDNA負荷均無差異。E抗原陽性慢性乙型病毒性肝炎與E抗原陰性患者比較兩者間ANA陽性率無差異。2乙型肝炎病毒攜帶者與慢性乙型病毒性肝炎患者之間ANA陽性率無差異。而乙肝肝硬化患者ANA陽性率與ANAA值高于乙型肝炎病毒攜帶者和慢性乙型病毒性肝炎患者。3慢性乙型病毒性肝炎患者經(jīng)復(fù)方甘草酸制劑治療前后ANA無差異。在乙型肝炎病毒攜帶者及慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中檢出同一水平的IL17。慢性乙型病毒性肝炎患者經(jīng)復(fù)方甘草酸制劑治療前后IL17無差異。4ANA陽性慢性乙型病毒性肝炎患者與ANA陰性患者相比較血清IL17檢測結(jié)果統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異。結(jié)論1慢性乙型病毒性肝炎患者患者血清ANA與HBVDNA復(fù)制水平、肝功能異常程度無關(guān)與E抗原轉(zhuǎn)換無直接關(guān)系。復(fù)方甘草酸苷制劑治療不改變ANA水平。2在慢性乙型肝炎病毒感染的患者中僅肝硬化患者顯示出增高的ANA。3外周血IL17的變化不能反映出乙型肝炎病毒攜帶者的免疫耐受狀態(tài)和慢性乙型病毒性肝炎患者的免疫損傷程度。甘草酸苷制劑治療活動性乙型肝炎并不改變IL17水平。4活動性慢性乙型病毒性肝炎患者ANA陽性率與IL17無關(guān)聯(lián)。5外周血中ANA、IL17水平不能反映慢性乙型病毒性肝炎患者的疾病狀態(tài)不能作為判斷甘草酸苷制劑的療效指標(biāo)。