簡介：遼寧中醫(yī)藥大學碩士學位論文門診婦女對宮頸癌篩查、HPV感染及疫苗認知程度調(diào)查姓名樊寶劍申請學位級別碩士專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床指導教師張新20090401

簡介：點擊查看更多132例家族聚集性的慢性乙型肝炎病毒感染者自然病程進展與相關(guān)因素的分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南方醫(yī)科大學2009級碩士學位論文血型B抗原模擬多肽／FAS重組腺病毒對小鼠4TI乳腺癌影響的實驗研究THEINFLUENCEOFRECOMBINANTADENOVIRUSEXPRESSINGBLOODGROUPBMIMICPOLYPEPTIDES／FASONMOUSE4T1BREASTCANCER課題來源導師指定專業(yè)名學位申請指導教稱腫瘤學人姜兆靜師張積仁教授答辯委員會主席答辯委員會成員陳尊器教授夏建川教授張為民教授黃宗海教授汪森明教授論文評閱人葛曰萍教授曹漫明副教授答辯秘書丁為民副教授2012年5月25日摘要抑制狀態(tài)是當前腫瘤免疫治療的難題與突破點。研究目的應(yīng)用健康成人B型血全血腹腔注射免疫BALB／C小鼠使其體內(nèi)產(chǎn)生抗血型抗原B抗體；構(gòu)建BALB／C小鼠4T1乳腺痛荷瘤模型；在BALB／C小鼠荷瘤模型中瘤內(nèi)注射血型B抗原模擬多肽／FAS重組腺病毒，測定其在腫瘤組織中的表達情況，觀察其對人紅細胞懸液免疫后的小鼠腫瘤生長的抑制作用及對生存期的影響；測定瘤內(nèi)注射重組病毒后小鼠腫瘤微環(huán)境淋巴細胞、TNFA、IFN吖、IL2、微血管密度等免疫功能指標，判定其對腫瘤微環(huán)境免疫抑制狀態(tài)的逆轉(zhuǎn)作用。實驗方法1將健康成人全血稀釋成不同濃度紅細胞懸液，腹腔注射免疫BALB／C小鼠，每次02ML，2次／周，免疫后3天、7天、14天、21天、28天，分別測定小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗血型抗原B抗體效價，擇優(yōu)選擇最適宜的紅細胞懸液免疫濃度，分析抗體產(chǎn)生的趨勢，為后續(xù)試驗做準備；2無菌環(huán)境下培養(yǎng)4TI孚L腺癌細胞，至對數(shù)生長期，制備細胞懸液濃度為106／M1，小鼠乳腺脂肪墊區(qū)皮下注射上述濃度4T1乳腺癌細胞02ML。7天左右，腫瘤長至LCMT左右大小，選取腫瘤無出血壞死的小鼠進一步實驗；3選取腫瘤大小相近、腫瘤無出血壞死的18只荷瘤小鼠，隨機分3組，分別瘤內(nèi)注射重組腺病毒ADPL／FAS效價為7X1010PFU／ML、空腺病毒效價為221X1011PFU／ML、09％NACL01ML，連續(xù)注射3天。注射后第10天處死三組小鼠，取出腫瘤組織，應(yīng)用WESTERNBLOT方法測定B／FAS在腫瘤組織中的表達情況。流式細胞儀檢查腫瘤內(nèi)淋巴細胞的變化、ELISA法測定TNFA、IFN吖、IL2含量、免疫組織化學法檢測CD34表達，并判定其對腫瘤微環(huán)境免疫抑制狀態(tài)的逆轉(zhuǎn)作用；436只荷瘤小鼠，分三組，每組12只，每組隨機取5只小鼠應(yīng)用游標卡尺測量三組小鼠腫瘤長徑A和垂直寬徑B，比較注射前、注射后3天、7天、14天三組

簡介：山西醫(yī)科大學碩士學位論文不同全麻方式對老年患者消化道腫瘤手術(shù)后早期認知功能的影響摘要目的比較不同全麻方式對老年患者消化道腫瘤手術(shù)后早期認知功能的影響，以便于臨床工作，為老年消化道腫瘤患者選擇更安全麻醉方法。方法選擇90例擇期消化道腫瘤的病人ASA24分患者。病例排除標準術(shù)前有神經(jīng)、精神系統(tǒng)疾病史，服用相應(yīng)藥物者，腎功能損害及活動性肝病者不參加本研究。采用隨機數(shù)字表法，將患者隨機分為3組N30異丙酚全憑靜脈組P組；七氟醚與異丙酚靜吸復合組SP組；七氟醚吸入麻醉組S組；同期住院非手術(shù)患者30例作為對照組C組。所有患者未用術(shù)前藥，三組患者采用相同麻醉誘導方式，芬太尼46UEJKG，異丙酚1～2MG／蠔、羅庫溴銨06MG／KG依次緩慢靜注；不同麻醉維持方式，P組靜脈泵注異丙酚3～6MGKGDH‘1；SP組術(shù)中吸入七氟醚L％異丙酚3～6MGK茸1H。；S組術(shù)中吸入七氟醚1“3％。記錄各組患者的年齡、性別、身高、體重、受教育年限、并發(fā)癥、麻醉時間、手術(shù)類型、液體總?cè)肓康纫话闱闆r，分別于術(shù)前LD、出麻醉恢復室時、術(shù)后1、3和7D時，采用MMSEMINIMENTALSTATEEXAMINATION，MMSE量表進行認知功能評分，總分為30分，下降2分以上為認知功能下降。認知功能障礙POSTOPERATIVECOGNITIVEDYSFUNCTION，POCD判定，采用Z計分法，Z△X一△XC／SD△XC，Z計分≥196，認為患者出現(xiàn)POCD。三組患者分別于術(shù)前1D與術(shù)后LD抽取靜脈血5ML，用酶聯(lián)免疫吸附ELISA法測定IL一1B、IL一6，操作按照ELISA試劑盒說明書進行。結(jié)果與C組比較，P組、SP組、S組于出麻醉恢復室時、術(shù)后LD時MMSE評分降低J|DO05。IL6、IL113術(shù)后1D較術(shù)前1D明顯增高PO05，與C組比較，P組、SP組、S組術(shù)后LD時IL一6、IL113明顯增高P005，各組間差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論老年患者在不同全麻方式下行消化道腫瘤手術(shù)后，出麻醉恢復室時、術(shù)后1天時認知功能均下降，術(shù)后3天到7天基本恢復。三種全麻方式之間認知功能障礙發(fā)生率無明顯差異，為臨床老年麻醉提供多種選擇。消化道腫瘤手術(shù)刺激強，IL6、IL1B升高可能與老年患者全麻下行消化道腫瘤手術(shù)后發(fā)生早期認知功能障礙有關(guān)。關(guān)鍵詞全身麻醉；認知功能障礙；老年；七氟醚；異丙酚1疵RENCE鋤。NGTHET11REEGROUPS；ALTLLOU曲T1ERE嘲SLIGHTLYDECREASEDIN3A11D7DAYS硪EF篡鰳ONJ哪D謝MTHEPREOPERATIVE，THEDIFFERENCEWASNOTSTATISTICALLYSI緲I(yè)FIC觚TPN05IL61L。1BLD砬ER、懈SIGNIFICANTLYHIGHERPO05廿LAILBEFORESURG≥二，I基WASNOS銣STJCALLYS19NIFICANTDIFFERENCESBETWEENGROUPS一UONCIIISIONS2‰妣SIAINELDERLYPATIENTSAFTERGASTROINTESTINALC齟CERSWGEUWHENLEAVINGR，EC，OVERYMOM，COGNITIVEFUNCTI。NATP。ST。PERATIVEDAY1DECLINED，A11I意砌LY剛弩DAYS觚E啪DAY跚ER№懈NODI‰CEINTHEANESTHESIA鋤ONG孟斫。衄KNDSOFC0嘶TIVEDYS觚CTION，WHICHPROVIDEDA唰ETY。FOPTI。NSFORC1孟SE蘭ANES齜警EXCESSIVEGAS拍INTESTINALNLIILORSS哪ICALSTILLLULATI。NA11DINN鋤MAT0珂。Y‘Ⅲ1圯SMAYNAVEANIMPACTONPOSTOPERATIVECOGNITIVEFUNCTIONW?！縔ORDSGENEMLA11ES也ESIA；POSTOPERA【TIVECOGNITIVEDYS脅CTI。N；ELDERLY；SEVONURANER1NDNTNI’一’

簡介：急性呼吸道感染是導致人類特別是兒童致病和死亡的重要病因。病毒在呼吸道感染中扮演重要角色近年來隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展不斷有新的病毒發(fā)現(xiàn)尤其是SARS和甲型H1N1流感病毒的出現(xiàn)進一步提示加強新發(fā)病毒性傳染病研究的重要性。人偏肺病毒HMPV是2001年從下呼吸道感染兒童的呼吸道樣本中分離出來的一種新的病毒。目前將HMPV歸為副粘病毒科肺病毒亞科偏肺病毒屬。HMPV可感染各年齡人群癥狀重者多發(fā)于嬰幼兒老年人免疫抑制人群可導致上呼吸道和下呼吸道疾病。HMPV的感染存在地區(qū)和時間差異。目前HMPV在我國的流行率尚不清楚尤其是基于全基因組測序的分子特征研究尚少。此外缺乏快速有效的診斷HMPV感染的技術(shù)。為此本研究對北京地區(qū)HMPV毒株的基因特征和及近年全人群中的血清流行率進行了研究并首次對HMPVF蛋白的線性表位進行了篩選為闡明我國HMPV的流行特征和開發(fā)特異性免疫診斷技術(shù)提供基礎(chǔ)。一、北京地區(qū)HMPV全基因組序列測定與分析利用RTPCR方法對2007年3月2009年4月期間收集的1542份兒童咽拭子標本進行了檢測HMPV檢出率為28％。隨機選取4份HMPV陽性樣本采用隨機PCR方法擴增后對其進行了鳥槍法測序獲得了全基因組序列。序列分析和進化樹分析結(jié)果顯示四株均屬于A2基因型與國外代表株屬于不同進化分支。4株HMPVF序列與A型A1A2亞型HMPVF序列同源性較高核苷酸序列同源性分別為973998和92193％而氨基酸序列同源性分別為952100％和944985％；與B型B1B2HMPVF蛋白序列同源性較低；4株HMPV實驗株G蛋白高變區(qū)編碼核苷酸序列與DQ843659的相應(yīng)區(qū)域有相對較高保守性而與其他3株亞型代表株相比序列保守性較差。二、北京地區(qū)正常人群HMPV感染血清流行率研究利用大腸桿菌系統(tǒng)對HMPVN蛋白進行了表達經(jīng)過金屬螯合層析純化其純度達到90％以上。利用該抗原建立了ELISA方法對不同年齡組人群血清中的抗HMPVIGG抗體流行率進行了研究。對1157份正常人群血清的篩查表明HMPV在人群中感染普遍≤6個月人群中抗體陽性率為6667％以上6月1歲年齡組略有降低586％12歲為7347％隨著年齡的增長抗體陽性率逐漸升高至20歲之后抗體陽性率達到了100％。相比而言人呼吸道合胞病毒RSV血清抗體IGG抗體水平在≤6月時抗體陽性率為7140％6個月1歲抗體陽性率為8448％12歲為858％抗體水平隨著年齡增高。到20歲以后抗體水平達到100％。這些數(shù)據(jù)提示HMPV在新生兒和嬰兒期的感染率可能低于RSV。三、HMPVF蛋白B細胞表位分析將HMPV和RSV的F、N蛋白基因分別插入重組腺病毒載體獲得了表達兩種蛋白的4種重組腺病毒。分別將4種腺病毒以滴鼻形式免疫小鼠制備抗HMPV和RSV的人偏肺病毒和人呼吸道合胞病毒的N蛋白以及F蛋白的抗血清。利用獲得的小鼠血清分別與HMPV和RSV的F和N蛋白反應(yīng)可見HMPV和RSV之間存在交叉免疫反應(yīng)。利用獲得的小鼠血清和HMPVIGG陽性人血清利用55條合成肽通過PEPSCAN分析技術(shù)對HMPVF蛋白的B細胞表位進行了初步篩選。結(jié)果顯示33條多肽可與人血清反應(yīng)其中12條多肽可與小鼠抗RSVF蛋白血清反應(yīng)其中10條與人血清篩選結(jié)果重疊。說明二者存在交叉性表位。綜上所述本研究通過了解人偏肺病毒北京株的基因組特征和北京地區(qū)正常人群中感染情況以及B細胞表位的初步篩選為評估HMPV疾病負擔和其變異趨勢提出防控策略以及建立特異性免疫診斷技術(shù)和血清流行病學研究方法提供了必要的理論依據(jù)。

簡介：橋本氏甲狀腺炎（HASHIMOTO’STHYROIDITISHT）又稱慢性淋巴細胞性甲狀腺炎，于1912年由日本學者橋本策博士首先報道而得名，是人類最常見的器官特異性自身免疫性疾病。臨床上，HT常見于女性，患者血清常有多種自身抗體。HT的主要病理學表現(xiàn)為甲狀腺內(nèi)大量淋巴細胞浸潤及次級淋巴濾泡形成，甲狀腺濾泡上皮細胞常嗜酸性變（HüRTHLE細胞形成）并進行性破壞。HT不僅會引起甲狀腺功能持續(xù)低下，而且與甲狀腺癌及惡性淋巴瘤的發(fā)生相關(guān)，嚴重影響患者的生活質(zhì)量甚至生命。該病雖經(jīng)百年研究，其病因及發(fā)病機理仍未闡明。大量研究表明，遺傳以及環(huán)境因素與HT的病因密切相關(guān)，其中環(huán)境因素中的病毒感染越來越受到關(guān)注。但其發(fā)病機制目前并不清楚。人細小病毒B19（PARVOVIRUSB19B19）是一種無包膜單鏈DNA病毒，屬于自主性細小病毒，與非自主性細小病毒的區(qū)別即在宿主細胞中的復制并不需要其他病毒的參與。是小病毒屬中唯一對人類致病的病毒。B19感染與多種疾病發(fā)生密切相關(guān)，其中，與HT的關(guān)系是該領(lǐng)域的最新發(fā)現(xiàn)之一。實驗室以及美國、德國、日本多個實驗室的獨立研究表明，B19感染與HT的發(fā)病有關(guān)，但其機制尚需進一步研究。二十世紀末，HOFFMANN和BEUTLER先后在果蠅和小鼠細胞中證實了TOLL樣受體（TOLLLIKERECEPTSTLRS）的存在。作為一大類細胞膜受體分子，TLRS能夠識別病毒等病原微生物，啟動固有免疫反應(yīng)并產(chǎn)生大量的促炎癥因子和共刺激分子，誘導適應(yīng)性免疫的發(fā)生。由于這兩位科學家在先天免疫激活方面的突出貢獻，他們同時獲得了2011年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。TLR3作為TLR家族的重要成員之一，主要表達于樹突狀細胞，通過識別病毒DSRNA，激活NFΚBIRF3以及AP1參與抗病毒反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)，TLR3在HT甲狀腺濾泡上皮細胞中有表達，間接提示HT發(fā)生與某種感染有關(guān)。鑒于以上兩方面的研究，推測B19感染很可能激活了TLR3的表達。在HT報道百年之際，我們使用HT連續(xù)切片用免疫組織化學方法及免疫組織化學雙標記方法，研究了B19和TLR3在HT中的關(guān)系，對揭示B19感染與HT的發(fā)病機制提供了新的實驗依據(jù)。【目的】闡明橋本氏甲狀腺炎病變甲狀腺組織中B19感染與TLR3間的關(guān)系，為HT的病毒病因?qū)W提供新的實驗依據(jù)。【方法】1用免疫組織化學SP法分別在HT標本中檢測B19及TLR3的表達情況，利用IMAGEPROPLUS60軟件得到陽性細胞數(shù)，計算陽性率。2用免疫組織化學雙標法分析B19及TLR3在HT病變甲狀腺組織中的共表達（或共定位）情況。3采用SPEARMAN等級相關(guān)分析B19和TLR3在HT中的相關(guān)性，應(yīng)用FISHER精確概率法分析B19和TLR3在HT和正常甲狀腺組織中表達的差異?！窘Y(jié)果】1B19和TLR3主要表達在HT病變甲狀腺組織中近淋巴濾泡的甲狀腺濾泡上皮細胞內(nèi)。33例HT病例中，29例B19陽性，4例陰性；33例HT病變甲狀腺組織均表達TLR3。而在5例正常甲狀腺組織中兩者均為陰性。統(tǒng)計學分析顯示，TLR3和B19在HT（3333100％2933，88％）和正常甲狀腺組織中的表達具有顯著差異TLR3（P＜0001），B19（P＜0001）。2對33例HT標本TLR3和B19陽性細胞進行計數(shù)，計算陽性率并進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)在HT中B19和TLR3表達呈顯著正相關(guān)（R0565P0001）。3免疫組織化學雙標染色進一步證實，B19與TLR3在HT甲狀腺濾泡上皮細胞中存在共表達?！窘Y(jié)論】發(fā)現(xiàn)橋本氏甲狀腺炎病變甲狀腺組織中TLR3表達與B19感染密切相關(guān)，提示TLR3表達很可能是B19感染誘導所致，表明兩者在HT的病毒病因?qū)W及發(fā)病機理中起重要作用。

簡介：研究背景和目的目前常規(guī)檢測丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV的方法主要包括核心抗原檢測、抗體檢測以及核酸檢測。多年以來，很多研究試圖建立血液中各種HCV抗原抗體以及核酸的檢測方法，但由于人體血液中HCV抗原抗體及核酸含量過低，用這些常規(guī)方法有時會無法檢測出HCV。HCV核心抗原檢測方法主要是用雙抗體夾心法檢測人體血清中的丙型肝炎核心抗原，該方法的基本步驟是用基因工程制備核心抗原進行小鼠免疫后獲得純抗HCV核心抗原的單抗作為固相包被物，配合使用辣根過氧化物酶標記物的2抗，與血清中的HCV核心抗原反應(yīng)，顯色后進行定性或定量測定。該方法檢測具有延后性，而且靈敏度不高。另外一種檢測HCV的方法是將HCV病毒經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，再通過PCR將CDNA擴增進行檢測。但是由于血液中的RNA濃度低，有時并不能檢測到HCV的RNA，所以傳統(tǒng)的方法不能滿足丙肝病人的血清或者分泌物中極低濃度的RNA檢測。近年來，表面等離子共振SURFACEPLASMONRESONANCE，SPR已逐步成為研究和識別生物活性材料親和力作用的主要方法之一。SPR傳感器已逐步應(yīng)用到分析抗原抗體反應(yīng)、觀察DNA的雜交、診斷細菌和病毒引起的疾病和觀察血液凝固等。SPR傳感器之所以能夠?qū)⒕哂邢嗨苹瘜W結(jié)構(gòu)的混合物區(qū)分開，是因為SPR能夠識別這些分析物，并且這些分析物能夠和固定在SPR傳感器表面上的生物活性物質(zhì)發(fā)生特異性反應(yīng)。SPR傳感器還可以免標記、實時監(jiān)測分析物和活性物質(zhì)之間發(fā)生的反應(yīng)。SPR傳感器不僅可以監(jiān)測固定在材料上的分析物，還可以分析經(jīng)過解離新形成的混合物，在很多情況下，SPR可以用同一個芯片，進行同時測量。因此，目前SPR是觀察配體和受體之間、抗原和抗體之間相互作用最有前景的一個方法，并且逐步應(yīng)用到生物醫(yī)學當中。SPR在不斷擴展其應(yīng)用領(lǐng)域時，其檢測方法的靈敏度也需要不斷得到提高。因為SPR方法對待測物濃度的測定主要與物質(zhì)的分子量有關(guān)，對于分子量大于1000的物質(zhì)，其可測定濃度范圍約為NMPM，而對于分子量小于1000的物質(zhì)，其可測定濃度范圍為ΜMNM。因此不斷探索提高靈敏度的研究方法正成為SPR研究中的一個重要內(nèi)容。DNA芯片被大量用于快速、平行檢測多種DNA或RNA序列。隨著越來越多的斑點技術(shù)的擴展，現(xiàn)在使用噴墨打印或光刻生產(chǎn)的DNA芯片，可以在一個小面積的固體支持物上點上15000種寡核苷酸鏈，因此目前很多研究已將DNA芯片應(yīng)用到MRNA定性定量檢測和單核苷酸多態(tài)性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMPHISMS，SNPS的檢測。隨著DNA芯片技術(shù)的發(fā)展使得單個DNA芯片探測整個基因組成為可能，但對低濃度的DNA靶序列檢測存在靈敏度不高的問題依然是當前芯片的主要缺點。而液相預擴增方法可克服這一缺點，例如聚合酶鏈式反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTION，PCR技術(shù)，可用來擴增芯片分析的目標DNA。PCR技術(shù)由于其高靈敏度而被認為是DNA檢測的金標準。但是，PCR技術(shù)因為需要昂貴的儀器、精確的溫度控制和對其產(chǎn)物進行凝膠電泳分離，況且不能原位擴增，使它在芯片上的運用受到極大地限制。因而迫切需要一種高靈敏度、高通量和高速度非PCR的簡單的檢測分析方法。滾環(huán)擴增ROLLINGCIRCLEAMPLIFICATION，RCA在體外使用DNA聚合酶和環(huán)狀DNA模板進行信號擴增，其基本原理是環(huán)狀模板與靶核酸雜交后在連接酶的作用下成環(huán)成環(huán)后的環(huán)狀模板在引物的作用下擴增沿著環(huán)狀模板擴增一個循環(huán)后，聚合酶合成再次到達了引物聚合酶結(jié)合位點取代新合成的DNA鏈繼續(xù)合成多個環(huán)狀模板長度的擴增鏈，由此形成一條由重復的環(huán)狀模板序列組成的長鏈DNA分子。并且由于環(huán)狀模板的擴增效率比線性模板要高很多，因此單引物RCA已被廣泛用于基因分型和掛鎖探針進行突變分析。RCA是一種對芯片信號放大特別有效的方法，在芯片上就能夠識別、擴增、檢測目標分子。與其它擴增方法相區(qū)別的是，RCA擴增生成的擴增產(chǎn)物仍然和固定在芯片上的DNA引物連接。由于這種獨特的屬性，使RCA能在固相的原位產(chǎn)生微陣列信號，并且與其它反應(yīng)同時進行也沒有任何互相干擾?；诩{米金的光學檢測可以提供一個可視化的可見光范圍。由于這種光學檢測是依靠基礎(chǔ)的光學現(xiàn)象，所以檢測過程比熒光技術(shù)要簡單得多，樣品的穩(wěn)定性也被加強了。相比于熒光染料具有敏感性和漂白問題，納米金技術(shù)即使是在高光強度下也可進行檢測，并且還能降低理化環(huán)境對信號的影響。納米金技術(shù)可以擴增SPR的檢測信號，相比非納米金輔助的雜交反應(yīng)大大提高了靈敏度。表面質(zhì)量高和介電常數(shù)高的納米金粒子和金膜之間的電磁耦合大大提高了反射轉(zhuǎn)變。納米金粒子標簽具有高信號噪聲比使得點大小接近亞微米級，而熒光芯片僅有微米級。納米金法可以利用光學方法讀出結(jié)果而不需要熒光設(shè)備，并且納米金修飾的寡核苷酸探針可以再生方法再利用，以節(jié)約成本。本文將生物傳感技術(shù)、原位擴增技術(shù)以及納米技術(shù)相結(jié)合，運用SPR儀檢測納米金輔助的RCA反應(yīng)，實現(xiàn)快速、非標記、靈敏、實時檢測丙型肝炎病毒。研究方法1丙型肝炎病毒RCA檢測方法的建立11RCA引物設(shè)計從GENEBANK中獲得丙型肝炎病毒XTAIL基因序列，根據(jù)RCA引物設(shè)計的原則，設(shè)計RCA檢測HCV所需要的環(huán)狀模板、延伸引物以及擴增引物。12丙型肝炎病毒核酸RCA檢測方法反應(yīng)條件摸索以及反應(yīng)體系的建立根據(jù)反應(yīng)體系進行優(yōu)化，將連接酶分為T4DNA連接酶、PFUDNA連接酶和BSTDNA連接酶三組。將多聚酶分為BSTDNA多聚酶和PHI29DNA連接酶兩組，共六組進行試驗。依據(jù)TM值，RCA反應(yīng)原理以及酶的活性溫度，來測試反應(yīng)溫度。13丙型肝炎病毒核酸RCA檢測方法特異性測試選取流感病毒核酸作為陰性對照，選取實驗室制備的丙型肝炎病毒核酸純化標準品作為陽性對照，雙蒸水作為空白對照，以RCA方法評價丙型肝炎病毒的特異性。14丙型肝炎病毒RCA檢測方法最低檢測濃度測試將經(jīng)過定量的HCVCDNA陽性標準品，進行10倍梯度稀釋，運用RCA方法確定其檢測限值。2REALTIMERTPCR法檢測丙型肝炎病毒選取HCV最保守區(qū)域XTAIL基因區(qū)域為目的序列，設(shè)計REALTIMEPCR引物。運用REALTIMEPCR法檢測HCV，通過檢測梯度濃度確定其檢測限，與RCA的檢測限進行比較。3滾環(huán)擴增芯片檢測HCVCDNA將RCA的探針進行氨基修飾，與醛基芯片共價結(jié)合后，通入檢測體系進行滾環(huán)擴增反應(yīng)，最后進行顯色反應(yīng)，以檢測HCVDNA。4傳統(tǒng)芯片檢測HCVCDNA將經(jīng)過定量的HCVCDNA陽性標準品，進行10倍梯度稀釋，用傳統(tǒng)芯片檢測，并將其檢測限值與RCA芯片法進行比較。5SPR技術(shù)結(jié)合RCA法檢測HCV根據(jù)丙型肝炎XTAIL區(qū)域的特異序列，設(shè)計并合成RCA法的探針和引物，同時設(shè)立陰性對照。將模板濃度10倍梯度稀釋，評價方法的檢測限。在普通金膜芯片的基礎(chǔ)上，經(jīng)過表面化學處理，形成高特異性核酸芯片，用抗蛋白實驗驗證芯片抗蛋白能力。使用SPR儀對金膜芯片上滾環(huán)擴增的反應(yīng)進行動態(tài)觀測以及信號放大反應(yīng)等。6普通SPR技術(shù)對HCV的檢測1普通SPR金膜芯片制備將裸金膜芯片孵育于12巰基十二烷酸中過夜進行自組裝羧基化，再用EDCNHC1乙基33二甲氨基丙基碳二亞胺EDCN羥基丁二酰亞胺NHYDROXYSUCEINIE，NHS進行活化后點樣探針。2用1％的BSA對未結(jié)合位點進行封閉。3評價SPR檢測HCV的靈敏度、特異性。7運用RCA、，REALTIMEPCR、GENOCHIP、，RCAGENOCHIP、SPR、SPR結(jié)合RCA等技術(shù)對臨床樣品HCV的檢測。采用1～6方法中描述的丙型肝炎病毒RCA、REALTIMERTPCR、滾環(huán)擴增芯片法、傳統(tǒng)芯片方法、SPR技術(shù)結(jié)合RCA法、普通SPR法檢測臨床血清標本中的丙型肝炎病毒。對上述檢測方法的靈敏度，特異性以及一些其它指標進行評價。結(jié)果1丙型肝炎病毒RCA方法的實驗室評價以及評價臨床樣品的檢測RCA方法對HCV的最低檢測濃度為10PM，REALTIMERTPCR檢測的的最低濃度為01NM。對63份標本進行檢測，其中丙型肝炎病人血清標本30份，非丙型肝炎血清標本33份。在雙盲的情況下，RCA法的靈敏度為800％2430，檢測30份丙型肝炎血清標本，實時熒光定量PCR檢出16份。RCA檢測33份HCV陰性血清特異度為879％2933，實時熒光定量PCR為909％3033。2建立滾環(huán)擴增芯片檢測HCV的方法以及對臨床樣品檢測的評價RCA芯片法檢測HCV的最低檢測濃度為01ΜM。而應(yīng)用傳統(tǒng)雜交方法檢測HCVCDNA陽性標準品的最低濃度為10ΜM。說明在實驗室條件下檢測HCVEDNA，RCA比傳統(tǒng)雜交法更敏感。用RCA芯片對一共179份臨床血清進行了檢測，其中包括丙型肝炎病人血清樣品102份，甲肝及乙肝病人的血清樣品77份。在雙盲的情況下，RCA的敏感性為873％89102，特異性為857％6677，一致性為866％155179，結(jié)果顯示RCA芯片法檢測HCV的靈敏度和特異度均較好。陽性預測值為89％89100，陰性預測值為835％6679。檢測102份丙型肝炎血清標本，RCA芯片檢測出89份，普通芯片只檢出27份。檢測77份陰性樣品，RCA檢測為陰性的66份，普通芯片為69份。RCA芯片高靈敏度、快速，因此在丙型肝炎病毒的檢測中比現(xiàn)有的普通芯片有更大的優(yōu)越性和實用性。3SPR技術(shù)結(jié)合滾環(huán)擴增技術(shù)檢測臨床樣品中HCV滾環(huán)擴增法在1H內(nèi)完成HCV標準品的檢測，SPR結(jié)合RCA方法對HCV的陽性標準品的最低檢測濃度為1PMOLL，REALTIMEPCR的最低檢測濃度為100PMOLL。在檢測相同的HCV濃度時，RCA的SPR信號明顯高于傳統(tǒng)的雜交信號，RCA反應(yīng)經(jīng)過納米金信號放大，整個反應(yīng)過程更加清晰，反應(yīng)信號也得到擴大。對于臨床樣品的檢測，RCA結(jié)合SPR技術(shù)的靈敏度為90％2730，特異性為841％2833。結(jié)論1本研究建立的SPR結(jié)合RCA方法，在1H內(nèi)完成HCV的檢測，比熒光定量PCR有更低的檢測限。2運用RCA法檢測同樣濃度的HCV時，RCA的SPR信號明顯高于傳統(tǒng)的雜交的SPR信號RCA，經(jīng)過納米金的信號放大，整個反應(yīng)過程流程更加清晰，反應(yīng)信號得到進一步擴大。3對于臨床血清樣品，研究結(jié)果顯示RCA法的靈敏度比REALTIMEPCR要高，特異度沒有統(tǒng)計學差別。4由于SPR結(jié)合RCA檢測HCV快速、不需要特殊設(shè)備，因此在丙型肝炎病毒的檢測中比現(xiàn)有的REALTIMEPCR方法有更大的優(yōu)越性和實用性。5本文實現(xiàn)了SPR檢測納米金輔助的RCA反應(yīng)，將來可能對超靈敏的核酸進行檢測，這將為一些極低濃度核酸樣品的檢測提供可能。SPR技術(shù)結(jié)合滾環(huán)擴增法將生物傳感技術(shù)及原位擴增技術(shù)相結(jié)合，實現(xiàn)了快速、非標記、實時檢測丙型肝炎病毒，可作為丙型肝炎病毒篩查方法。

簡介：點擊查看更多住院病人和護士對服務(wù)需求的認知比較研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV感染嚴重影響人類的健康和生命安全目前對慢性HBV感染者和攜帶者無特效治療方法。HBV基因組較小易發(fā)生突變限制了靶向病毒的抗病毒藥物研究。為了研究和開發(fā)新型抗HBV藥物我們設(shè)計了一種新型雙功能SIRNA5PPPSIRNA3PSIRNA核酸藥物一方面通過刺激宿主細胞模式識別受體誘導宿主抗病毒Ⅰ型干擾素的表達同時通過RNAI作用特異性沉默HBV基因表達從而抑制病毒復制。3PSIRNA結(jié)合一個核酶復合物從而形成RNA誘導沉默復合物RNAINDUCEDSILENCINGCOMPLEXRISC由RISC介導切割靶MRNA分子中與3PSIRNA反義鏈互補的區(qū)域從而達到沉默特異性基因表達作用同時3PSIRNA可以活化維甲酸誘導基因ⅠRETIONICACIDINDUCIBLEGENELRIGI使RIGI與位于線粒體外膜的銜接蛋白干擾素啟動子刺激因子1IFNΒPROMOTERSTIMULAT1IPS1CARDIFCARDADAPTINDUCINGIFNΒMAVSMITOCHONDRIALANTIVIRALSIGNALINGVISAVIRUSINDUCEDSIGNALINGADAPTER相互作用下傳信號激活核轉(zhuǎn)錄因子ΚBNUCLEARFACTΚBNFΚB或干擾素調(diào)節(jié)因子INTERFERONREGULATYFACT3IRF3等誘導Ⅰ型IFN和促炎因子的表達和分泌從而實現(xiàn)抑制HBV的目的。本研究首先通過體外轉(zhuǎn)錄生成3PSIRNA。通過細胞毒性檢測發(fā)現(xiàn)在100NM200NM時3PSIRNA對HEPG2215細胞無顯著毒性但是在500NM時3PSIRNA對HEPG2215細胞具有一定毒性。研究發(fā)現(xiàn)將IFNΒ熒光素酶報告基因與RIGI共同轉(zhuǎn)染HEPG2215細胞同時轉(zhuǎn)入海腎蟲熒光素酶報告基因作為內(nèi)參轉(zhuǎn)染24小時后將3PSIRNA轉(zhuǎn)染細胞16小時后檢測IFNΒ熒光素酶活性發(fā)現(xiàn)未轉(zhuǎn)染RIGI時3PSIRNA只能微弱地誘導IFN表達但是共轉(zhuǎn)RIGI后3PSIRNA顯著地誘導IFN表達說明在HEPG2215細胞中3PSIRNA具有RIGI依賴的激活宿主抗病毒天然免疫反應(yīng)。然而我們用CIAP去除3PSIRNA5末端的5PPP基團后將其與IFNΒ熒光素酶報告基因和RIGI共同轉(zhuǎn)染HEPG2215細胞后檢測IFNΒ熒光素酶活性發(fā)現(xiàn)經(jīng)CIAP處理的3PSIRNA并未激活RIGI介導的IFN通路說明3PSIRNA誘導IFN表達主要是依賴于其5末端的5PPP基團。此外3PSIRNA對干擾素刺激調(diào)控元件ISRE也具有RIGI依賴的激活效應(yīng)在未共轉(zhuǎn)RIGI時3PSIRNA微弱地誘導ISRE表達然而共轉(zhuǎn)RIGI后3PSIRNA明顯地誘導ISRE表達?？共《净钚詼y定發(fā)現(xiàn)在HEPG2215細胞中與SIRNA抗HBV活性相比3PSIRNA表現(xiàn)出更明顯的抗病毒活性。3PSIRNA轉(zhuǎn)染48小時后對HBSAG、HBEAG以及HBVDNA和HBVMRNA都有明顯的抑制效果。3PSIRNA對HBV具有持續(xù)的抑制效應(yīng)當轉(zhuǎn)染3PSIRNA后48小時、96小時、144小時3PSIRNA對HBSAG和HBEAG的抑制率分別是55％和418％、37％和243％、333％和148％當共轉(zhuǎn)染RIGI和3PSIRNA時3PSIRNA對HBAG和HBEAG的抑制率分別是663％和53％、555％和497％、456％和265％。與只轉(zhuǎn)染3PSIRNA相比共轉(zhuǎn)染RIGI時3PSIRNA對HBV表現(xiàn)出更明顯的抑制活性。以不同劑量50NM、100NM、200NM3PSIRNA轉(zhuǎn)染HEPG2215細胞發(fā)現(xiàn)3PSIRNA對HBV的抑制作用呈明顯劑量依賴性。綜上所述本研究成功設(shè)計了一種新型雙功能抗HBV核酸藥物3PSIRNA一方面具有能通過RNAI特異識別并切割HBVMRNA靶分子從而抑制HBV特性同時可以激活宿主細胞RIGI依賴的抗病毒天然免疫反應(yīng)從而高效阻止HBV復制。抗HBV雙功能3PSIRNA核酸藥物的發(fā)現(xiàn)為研究開發(fā)新型抗HBV藥物研究具有重要應(yīng)用價值。

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文腺病毒介導的RNAI對缺血再灌注大鼠腦內(nèi)NGR表達、軸突再生和神經(jīng)行為的影響姓名王敬申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師秦新月20090501重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文毒純化試劑盒純化病毒，TCID50測定病毒滴度；2．應(yīng)用高、中、低三種滴度劑量的重組腺病毒和腺病毒保存液陰性對照轉(zhuǎn)染大鼠缺血腦組織，采用組織病理學觀察局部炎癥反應(yīng)，熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白GFP的表達，篩選出最佳的轉(zhuǎn)染滴度；3．采用線栓法制作大鼠大腦中動脈缺血MIDDLECEREBRALARTERYOCCLUSION，MCAO／再灌注模型，42只大鼠隨機分為7組假手術(shù)組，腦缺血2H再灌注24H、2W組缺血再灌注組和重組腺病毒載體ADSHRNANGR干預24H、2W組腺病毒干預組，重組腺病毒載體AD．SHRNA．HK干預24H、2W組陰性對照組。采用RTPCR檢測缺血側(cè)皮質(zhì)和海馬NGRMRNA水平，WESTERNBLOTTING檢測NGR蛋白表達；4．20只大鼠隨機分為假手術(shù)組，缺血再灌注組和腺病毒干預組，陰性對照組。腦缺血2H再灌注24H、9W后行增強CT測量腦梗死體積，術(shù)后每隔一周進行神經(jīng)行為學評分，生物素葡聚糖胺BDA神經(jīng)示蹤技術(shù)觀察皮質(zhì)脊髓束和皮質(zhì)紅核束。結(jié)果1．重組腺病毒轉(zhuǎn)染293細胞后，熒光顯微鏡下可觀察到明確的綠色熒光，擴增并純化后AD．SHRNA．NGR的滴度為3．16X1010PFU／ML；AD．SHRNA．HK的滴度為2．84X1010PFU／ML。2．高、中、低劑量組大鼠腦組織均出現(xiàn)GFP陽性表達，且高、中劑量組轉(zhuǎn)染效率明顯高于低劑量組，但高劑量組與中劑量組無明顯差異。HE染色顯示，僅高劑量組中大鼠腦組織有炎性浸潤，余均未發(fā)現(xiàn)炎性反應(yīng)。3．與假手術(shù)組相比，腦缺血2H再灌注24H、2W后，NGE．RNRNA和蛋白水平均明顯增高PO．01，腺病毒干預后NGRMRNA和蛋白表達氣

簡介：同等學力申請博士學位博士學位論文學校代碼10023學號ZB2007021宮頸病變中P16INK4A蛋白與耶V病毒的關(guān)系及其與L1殼蛋白的聯(lián)合表達意義THERELATIONSHIPOFPL6INK4AWITHHPVANDTHEVALUEOFP16INK4AANDL1EXPRESSIONINCERVICALLESIONS所院姓名指導教師導師小組學科專業(yè)研究方向完成日期腫瘤醫(yī)院宋艷蘇勤張詢蘇勤張詢楊紅鷹病理學婦科腫瘤病理2011年5月目錄目錄英文縮略語與中文解釋L中文摘要2ABSTM4前言6第一部分探討宮頸病變中P16INK4A蛋白的表達及其與HRFIPV的關(guān)系8材料與方法8研究對象8實驗器材與方法81主要儀器與試劑811主要儀器812主要試N92方法1021組織染色1022病理診斷1123HC2一HPVDNA檢測1224統(tǒng)計學處理13結(jié)果131P16INK4A蛋白在子宮頸病變的表達132HRHPV在子宮頒病變的分布133P16INK4A蛋白表達與HRHPV的關(guān)系15討論16第二部分探討宮頸病變中P16INK4A蛋白與HPV亞型的關(guān)系及其與LL殼蛋白的聯(lián)合表達方式2L材料與方法21研究對象21實驗器材與方法211主要儀器與試劑2111主要儀器2112主要試劑222方法2221石蠟切片2222組織染色及免疫組織化學染色2323HPV檢測DEIA法及分型實驗LIPA法2524統(tǒng)計學處理3L結(jié)果311P16INK4A蛋白在宮頸病變中的表達312L1殼蛋白在宮頸病變中的表達313P16INK4A蛋白與L1殼蛋白的不同聯(lián)合表達方式334HPV亞型分析及其與P16INK4A蛋白、LL殼蛋白的關(guān)系3441HPV弧型在宮頸上皮內(nèi)病變的分布3442CIN2、CIN3和ICC患者多重感染的HPV型別3543P16INK4A蛋O／L1殼蛋白與HPV各亞型的關(guān)系35討論36舢3洲7刪6舢5Ⅲ8洲9川1刪Y

簡介：軍醫(yī)進修學院解放軍總醫(yī)院碩士學位論文老年男性腦白質(zhì)病變患者認知功能特點及危險因素的研究姓名朱文佳申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師賈建軍20120517軍醫(yī)進修學院碩_L學位論文重降低趨勢，其中①PVL中重度組MOCA總分與對照組、輕度組相比；輕、中重度組定向力得分與對照組相比；中重度組延遲回憶得分與對照組相比輕度組注意力得分與中重度組相比差別具有統(tǒng)計學意義P0．05。2DWML中重度組MOCA總分與命名得分與對照組相比差別具有統(tǒng)計學意義P0．05。結(jié)論老年男性患者腦白質(zhì)病變與認知功能減退有關(guān)，腦室旁腦白質(zhì)病變對認知功能的影響較深部腦白質(zhì)病變明顯。第三部分老年男性腦白質(zhì)病變患者認知功能障礙危險因素的分析目的探討老年男性WML患者認知功能障礙的危險因素。方法1．選取住院期間的WML患者64例，引入MOCA量表進行認知心理學評估，收集臨床資料，完善實驗室及顱腦MRI等檢查。2．將患者分成輕度認知功能障礙組MCI組，31例和認知功能正常組NC組，33例，行單因素分析和多因素LOGISTIC回歸分析。結(jié)果1．單因素分析兩組在年齡、教育年限、吸煙等3方面差別具有統(tǒng)計學意義P0．05；2．以有無認知功能障礙為因變量行逐步LOGISTIC回歸分析，得到教育年限P值0．003，OR值0．867、吸煙P值0．005，OR值5．151、腔隙性腦梗死P值O．037，OR值3．766與腦白質(zhì)認知功能障礙的發(fā)生有關(guān)。結(jié)論部隊老年男性高干腦白質(zhì)病變患者認知功能障礙主要與教育年限、腔隙性腦梗死和吸煙有關(guān)。關(guān)鍵詞老年、腦白質(zhì)病變、認知功能、危險因素4

簡介：目的通過觀察AM251干預后2型糖尿病腦病大鼠海馬組織中Γ氨基丁酸GABA、SRC、N乙基順丁烯二酰亞胺敏感性的融合蛋白NSF及谷氨酸受體NR2A亞基酪氨酸磷酸化表達的變化，探討AM251對2型糖尿病腦病大鼠認知功能的影響及其作用機制。方法采用高糖高脂飲食結(jié)合小劑量鏈脲佐菌素STZ腹腔注射的方法，建立2型糖尿病大鼠模型。將成模大鼠隨機分為糖尿病組DM組、AM251干預組AM組、并設(shè)立正常對照組NC組。給藥4周后，檢測空腹血糖FBG、糖化血紅蛋白A1CHBA1C、甘油三酯TG、總膽固醇TC、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL；行Y迷宮測試其學習記憶能力，蘇木素伊紅HE染色觀察海馬神經(jīng)元的存活，免疫組織化學法檢測海馬中GABA、SRC的表達，WESTERNBLOTTIN法檢測NSF蛋白表達的變化，免疫沉淀、免疫印跡法檢測海馬中NR2A亞基酪氨酸磷酸化水平的變化。結(jié)果1與NC組比較，DM組FBG、HBA1C、TG、TC、LDL明顯升高，HDL明顯降低P005。2與NC組比較，DM組和AM組大鼠Y迷宮學習記憶能力明顯降低P結(jié)論1長期高血糖狀態(tài)下，糖尿病大鼠認知能力下降，可能的機制是谷氨酸通過作用于谷氨酸受體的NR2A亞基，通過上調(diào)其磷酸化的表達，產(chǎn)生興奮性毒性作用。2高血糖狀態(tài)下TG、TC、LDL升高，HDL降低；糖尿病腦病還可能通過下調(diào)GABA的表達，降低其突觸前、突觸后的抑制作用，使其對抗谷氨酸受體介導的神經(jīng)元興奮性毒性的作用減弱，加重腦損傷。3AM251能改善2型糖尿病腦病大鼠的學習記憶能力、減輕腦損傷。其機制可能是通過減輕脂毒性、抑制NSF的表達、下調(diào)SRC介導的谷氨酸受體NR2A亞基的磷酸化水平，上調(diào)GABA的水平實現(xiàn)的，且這種作用是獨立于降糖作用之外的。

簡介：目的本研究通過構(gòu)建PEDF基因重組慢病毒載體，將其轉(zhuǎn)染至大鼠心肌以調(diào)節(jié)PEDF表達，探討PEDF對正常大鼠心肌血管生成中的作用。方法構(gòu)建大鼠過表達PEDF和PEDFSIRNA重組慢病毒；實驗動物分為六組正常組A、過表達組B、干擾組C、載體對照組D、假手術(shù)組E、梗死組F；采用分點注射法轉(zhuǎn)染PEDF過表達載體和PEDFSIRNA表達載體至大鼠心臟左室心肌組織，通過調(diào)控干擾或過表達大鼠心肌局部PEDF表達，檢測PEDF轉(zhuǎn)染局部心肌組織血管內(nèi)皮生長因子VULARENDOTHELIALCELLGROWTHFACT，VEGF、腫瘤壞死因子ΑTUMNECROSISFACTΑ，TNFΑ和低氧誘導因子1ΑHYPOXIAINDUCIBLEFACT1Α，HIF1Α蛋白表達的變化。通過檢測血管內(nèi)皮生長因子受體2VULARENDOTHELIALCELLGROWTHFACTRECEPT2，VEGFR2陽性細胞數(shù)量和ΑSMA陽性血管數(shù)量，觀察PEDF對心肌血管生成的影響。結(jié)果1PEDF過表達和PEDFSIRNA質(zhì)粒鑒定PEDF過表達質(zhì)?？捎行н^表達PEDF蛋白；PEDFSIRNA質(zhì)粒可有效干擾PEDF蛋白表達，質(zhì)粒構(gòu)建成功。2病毒滴度檢測重組病毒載體轉(zhuǎn)染293T細胞，REALTIMEPCR測定病毒滴度為200E9TUML。3動物模型的建立和基因轉(zhuǎn)染大鼠心臟左室前壁注射各組試劑后觀察，心電圖示未心肌損傷性改變；梗死組結(jié)扎冠狀動脈左前降支后，肉眼觀察缺血心肌局部顏色變紫，心電圖描記術(shù)后ST段弓背向上抬高。美藍注射實驗證明試劑可浸潤心肌全層，心肌注射方法可用于基因轉(zhuǎn)染。熒光顯微鏡下觀察，過表達組、干擾組及載體對照組可于轉(zhuǎn)染局部觀察到GFP綠色熒光，而其他各組無GFP表達。4VEGF、VEGFR2、TNFΑ和HIF1Α基因表達的檢測RTPCR和WESTERNBLOT結(jié)果顯示，與正常組比較，干擾組PEDF表達明顯下降，而過表達組PEDF上升P5轉(zhuǎn)染心肌局部炎癥細胞的檢測HE染色顯示，與正常組相比，干擾組轉(zhuǎn)染局部中性粒細胞及淋巴細胞等炎癥細胞顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義P6轉(zhuǎn)染心肌局部血管生成的檢測免疫組化結(jié)果顯示，與正常組相比，干擾組VEGFR2新生血管陽性血管顯著增加P005。結(jié)論1PEDFSIRNALENTIVIRUS和PEDFLENTIVIRUS構(gòu)建成功，可有效調(diào)控大鼠心肌PEDF蛋白表達。2在心肌組織中，PEDF通過調(diào)VEGF和VEGFR2表達，影響心肌血管生成，但對已存在血管無調(diào)節(jié)作用。3非缺氧條件下，PEDF對VEGF的調(diào)控并非HIF1Α介導。4抑制PEDF表達可誘發(fā)心肌炎癥反應(yīng)。

簡介：點擊查看更多FOXP3基因過表達腺病毒轉(zhuǎn)染未成熟樹突狀細胞對實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎免疫耐受作用的研究.pdf精彩內(nèi)容。