簡(jiǎn)介：目的探討纖維環(huán)刺傷法誘導(dǎo)兔腰椎間盤退變建立動(dòng)物模型后，應(yīng)用腺相關(guān)病毒ADEOASSOCIATEDVIRUS，AAV介導(dǎo)人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2HBMP2基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔的退變椎間盤，觀察AAVHBMP2轉(zhuǎn)染對(duì)退變椎間盤FAS與CASPASE3凋亡基因的影響。方法36只普通級(jí)雄性新西蘭大白兔重量約30KG，1歲齡，手術(shù)取右側(cè)腹膜后入路，用16號(hào)皮膚穿刺針于L23、L34、L45椎間盤纖維環(huán)右前外側(cè)刺入，深度為5MM，造模4周后注入AAVHBMP2，分別于注射后2、4、8周對(duì)造模的椎間盤L23、L34、L45及正常椎間盤L56進(jìn)行磁共振MRI檢查，動(dòng)物處死取材后采用原位DNA片斷末端標(biāo)記TUNEL和免疫組織化學(xué)方法觀察。結(jié)果①免疫組化觀察到FAS與CASPASE3蛋白各周注射AAVHBMP2組與注射AAV組、注射生理鹽水組兩兩比較均有顯著差異P＜001，而注射AAV組與注射生理鹽水組組間比較無(wú)明顯差別P＞005；②TUNEL法測(cè)凋亡細(xì)胞觀察到各周注射AAVHBMP2組與注射AAV組、注射生理鹽水組兩兩比較均有顯著差異P＜001，而注射AAV組與注射生理鹽水組組間比較無(wú)明顯差別P＞005；③注射AAVHBMP2組在注射術(shù)后2，4及8周改良THOMPSON分級(jí)比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005，注射AAV組與注射生理鹽水組改良THOMPSON分級(jí)比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P均＜005。注射AAVHBMP2組髓核信號(hào)與注射AAV組、注射生理鹽水組的椎間盤改良THOMPSON分級(jí)比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P均＜005，而注射AAV組與注射生理鹽水組比較無(wú)明顯差別P＞005。結(jié)論體內(nèi)轉(zhuǎn)染AAVHBMP2能抑制椎間盤FAS、CASPASE3蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，延緩椎間盤的退變。

簡(jiǎn)介：Y1218665分類號(hào)UDC密級(jí)學(xué)校代碼Q5鯉諏{||童工繁火罄’碩士學(xué)位論文題目盤筮酸絲廑芏煎苴低顯蕉縫塑鱉延巫垃瘟垂適睦班冠英文題目§±女盤QB±￡±業(yè)§L￡B叢塹±芏I§I§鯉研究生姓名簽名趣L建指導(dǎo)教師姓名簽申請(qǐng)學(xué)位學(xué)科名稱論文答辯日期2QQZ§煦學(xué)位授予日期一學(xué)院負(fù)責(zé)人簽名盆選．評(píng)閱人姓名貔蛔盤評(píng)閱人姓名壟叢量明年G月_7H湖北工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文半數(shù)有效濃度1C。為0．2675MG／ML，抑制指數(shù)TI達(dá)5．52，表明HOGS具有一定的體外抗HBY作用。4在抗柯薩奇病毒CVB。中采用二次磺化HOGS樣品，利用町T法研究了HOGS抗CVB。作用，結(jié)果顯示HOGS在濃度為0．5MG／ML以下時(shí)均無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用，細(xì)胞的半數(shù)中毒濃度T％為0．6677MG／ML。將HOGS與病毒的不同作用方式進(jìn)行分組進(jìn)行了HOGS抗CVB，作用的研究。結(jié)果顯示對(duì)CVB。侵入細(xì)胞的阻斷作用組效果較好，其半數(shù)有效濃度IC。為0．1483MG／M1，TI值為4．50同時(shí)將一次磺化HOGS樣品抗病毒藥效進(jìn)行對(duì)比，對(duì)CVB，侵入細(xì)胞的阻斷作用組IC。為0．3767MG／ML，TI值為4．09。由此可表明一次及二次磺化HOGS能有效地抗CVB3的作用，且二次磺化HOGS效果更明顯。在抗流感病毒中采用二次磺化HOGS樣品，采用MTT法測(cè)細(xì)胞毒性，結(jié)果表明H06S在濃度為0．5IILG／ML以下時(shí)均無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用，通過(guò)測(cè)定紅細(xì)胞血凝效價(jià)，得知HOGS可在一定程度上降低病毒感染細(xì)胞的血凝效價(jià)，其最小有效濃度為0．03125MG／IILL。與一次磺化HOGS的血凝效價(jià)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，得知二次磺化HOGS抑制病毒效果明顯優(yōu)于一次磺化HOGS。說(shuō)明抗病毒活性與硫酸根的含量正相關(guān)。關(guān)鍵詞魔芋葡甘聚糖，硫酸酯化，結(jié)構(gòu)分析，抗病毒活性兒

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所星交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的真實(shí)成果。除文中已注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作晶成果。對(duì)本論文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名手寫導(dǎo)師簽名手寫學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)福建醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書作者簽名手寫導(dǎo)師簽名手寫目錄中文摘要?????????????????????????????3英文摘要?????????????????????????????4前言??????G000000??????????????????????6刖吾????????????????????????????6對(duì)象和方法????????????????????????????9結(jié)果???????????????????????????????12討論???????????????????????????????17結(jié)論???????????????????????????????22參考文獻(xiàn)?????????????????????????????23致謝???????????????????????????????25綜J簽?????????????000000?????????????。?262

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建乙型肝炎病毒HBV核心啟動(dòng)子區(qū)BCP1762／1764雙突變株的復(fù)制質(zhì)粒。定量檢測(cè)未發(fā)生肝癌的慢性乙型肝炎病人和己發(fā)生肝癌的慢性乙肝病人血清和肝組織中乙型肝炎病毒BCP區(qū)A1762T／G1764A雙突變探討此雙突變和肝癌的關(guān)系及意義。方法1利用已有15拷貝HBV野生型全基因組序列質(zhì)粒PHBV15C型為模板采用分子克隆、大引物定點(diǎn)突變方法構(gòu)建BCP區(qū)A1762T／G1764A雙突變重組質(zhì)粒。2將野生株重組質(zhì)粒和雙突變重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到HEPG20細(xì)胞測(cè)定其細(xì)胞培養(yǎng)液HBVDNA和HBSAG水平來(lái)測(cè)定雙突變質(zhì)粒的復(fù)制能力和蛋白表達(dá)能力。3以野生株重組質(zhì)粒和雙突變重組質(zhì)粒基因序列設(shè)計(jì)特異性TAQMANMGB探針。4采用特異性探針實(shí)時(shí)熒光定量PCRPSRTPCR方法準(zhǔn)確檢測(cè)樣本雙突變。5對(duì)比野生株重組質(zhì)粒和雙突變重組質(zhì)粒在體外轉(zhuǎn)染培養(yǎng)后的復(fù)制能力；比較雙突變?cè)谖窗l(fā)生肝癌的慢性乙型肝炎病人和已發(fā)生肝癌的慢性乙肝病人血清和肝組織中的發(fā)生情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS160統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理計(jì)量資料采用T檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)和COCHRACOX近似T檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料采用FISHER確切概率法、X2檢驗(yàn)。結(jié)果1成功構(gòu)建BCP區(qū)A1762T／G1764A雙突變復(fù)制質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)后測(cè)定HBVDNA水平雙突變株復(fù)制能力高于野生株329±127105COPIES／MLVS124±024105COPIES／ML。2成功制作用于同時(shí)檢測(cè)HBVDNA和雙突變拷貝量的。TAQMANMGB探針。3成功使用PSRTPCR方法快速、特異、準(zhǔn)確檢測(cè)乙肝病毒HBVBCP區(qū)A1762T／G1764A雙突變。4對(duì)從未進(jìn)行抗病毒治療的80例慢性乙肝病人和50例肝癌病人分別予血清和肝組織雙突變定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)無(wú)肝癌慢性乙肝病人組血清突變率為4125％33／80肝組織突變率為4500％36／80；肝癌組血清突變率為6800％34／50肝組織突變率為7800％39／50兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異每組各自血清和肝組織突變率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5將無(wú)肝癌慢性肝病組分為高病毒載量組HBVDNA≥106COPIES／ML43例和低病毒載量組HBVDNA結(jié)論1體外轉(zhuǎn)染培養(yǎng)結(jié)果表明存在BCP區(qū)A1762T／G1764A雙突變的乙肝病毒其復(fù)制能力高于無(wú)此突變的野生型病毒。2使用特異性TAQMANMGB探針的PSRTPCR檢測(cè)方法檢測(cè)雙突變具有良好的靈敏度、特異性和重復(fù)性達(dá)到臨床檢測(cè)要求。3已發(fā)生肝癌的慢性乙肝病人BCP區(qū)雙突變發(fā)生明顯高于未發(fā)生肝癌者提示此雙突變和肝癌的發(fā)生密切相關(guān)檢測(cè)此雙突變有助于預(yù)測(cè)肝癌的發(fā)生。4血清檢測(cè)和肝組織檢測(cè)具有良好一致性對(duì)于無(wú)法進(jìn)行肝組織取材的病人檢測(cè)血清可以準(zhǔn)確反映其突變情況適合臨床推廣應(yīng)用。5未發(fā)生肝癌的慢性乙肝病人病毒載量高提示雙突變發(fā)生率高及早進(jìn)行抗病毒等治療有助于降低雙突變發(fā)生率。

簡(jiǎn)介：目的觀察GHRELIN及其受體GHSRLA在糖尿病大鼠下丘腦、大腦皮質(zhì)及海馬中的表達(dá)，初步探討GHRELIN與糖尿病大鼠認(rèn)知障礙的關(guān)系以及替米沙坦改善糖尿病大鼠認(rèn)知功能的機(jī)制。方法雄性SDSPRAGUEDAWLEY大鼠，體重200±20G，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、糖尿病組、替米沙坦治療組。腹腔一次性注射鏈脲菌素60MGKG1，建立糖尿病大鼠模型。替米沙坦治療組成模同時(shí)給予替米沙坦灌胃133MGKG1DAY1，干預(yù)12周。成模12周后，MRIS水迷宮測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；開(kāi)野實(shí)驗(yàn)排除抑郁癥的干擾；免疫組化法檢測(cè)GHRELIN及GHSR1A蛋白水平；RTPCR檢測(cè)GHRELIN及GHSR。1AMRNA水平。結(jié)果開(kāi)野實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005；MRIS水迷宮測(cè)試中，與正常對(duì)照組比較，糖尿病組潛伏期增加P＜005；與糖尿病組比較，替米沙坦治療組潛伏期明顯縮短P＜005。免疫組化結(jié)果顯示與正常對(duì)照組比較，下丘腦、大腦皮質(zhì)GHRELIN及GHSRLA的蛋白含量降低，海馬GHSRLA的蛋白含量也降低。RTPCR結(jié)果顯示與正常對(duì)照組比較，下丘腦、大腦皮質(zhì)GHRELIN及GHSRLA的MRNA表達(dá)降低，海馬GHSRLA的MRNA表達(dá)也明顯下降。與糖尿病組比較，替米沙坦治療組海馬GHSRLA的蛋白含量和MRNA水平表達(dá)均增加P＜005。結(jié)論1糖尿病大鼠出現(xiàn)了下丘腦和大腦皮質(zhì)GHRELIN及其受體的表達(dá)下調(diào)。2糖尿病大鼠學(xué)習(xí)記憶的認(rèn)知功能較正常對(duì)照組明顯下降；海馬GHSRLA蛋白和MRNA表達(dá)水平下降，糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙可能與海馬GHSRLA表達(dá)下降有關(guān)。3替米沙坦早期干預(yù)改善了糖尿病大鼠的認(rèn)知功能且上調(diào)了海馬GHSRLA的表達(dá)，海馬GHSRLA表達(dá)上調(diào)可能參與了替米沙坦的認(rèn)知保護(hù)作用機(jī)制。

簡(jiǎn)介：目的了解甘肅省蘭州市HBV感染者的基因型與臨床和病理分級(jí)分期的關(guān)系。方法隨機(jī)選擇HBVDNA陽(yáng)性88例各類慢性肝病患者，男68例，女20例，平均年齡385±114歲其中HBV攜帶者15例，慢性乙型肝炎39例，肝硬化失代償20例，原發(fā)性肝癌14例。對(duì)以上患者進(jìn)行基因分型，同時(shí)檢測(cè)肝功、HBV血清標(biāo)志物、HBVDNA載量，對(duì)其中39例患者進(jìn)行肝活組織檢查并分級(jí)分期。結(jié)果88例血清標(biāo)本中，C基因型60例6818％，B基因型17例1932％，BC混合型8例909％，非BC型3例341％。C與B基因型在HBEAG陽(yáng)性組或陰性組的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005，但C基因型患者的HBVDNA載量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、總膽紅素TBIL均高于B基因型，P＜005。肝組織病理檢查，26例C基因型，中、重度炎癥G3～G420例7692％，11例B基因型，中、重度炎癥G3～G43例2727％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，C基因型在中、重度纖維化S3～S4與B基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001。結(jié)論甘肅省蘭州市基因型以C、B型為主，以C基因型為優(yōu)勢(shì)。C基因型患者的肝臟病理?yè)p害較B基因型嚴(yán)重。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文條件復(fù)制型溶瘤腺病毒靶向肝癌基因治療姓名葉迅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)藥理學(xué)指導(dǎo)教師陳紅專20060508上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士研究生畢業(yè)論文2006E3區(qū)基因的重組腺病毒ADAEIB和ADAELBAE3。研究結(jié)果表明攜帶E3區(qū)基因的溶瘤腺病毒殺傷肝癌細(xì)胞的能力明顯弱于刪除E3區(qū)基因的溶瘤腺病毒。基因治療的目的是獲得針對(duì)腫瘤細(xì)胞的高效率殺傷，因此應(yīng)用刪除E3區(qū)基因的條件復(fù)制型溶瘤腺病毒為治療肝細(xì)胞肝癌提供了一個(gè)重要途徑。綜合以上研究結(jié)果，我們?cè)O(shè)計(jì)了新型肝癌靶向性溶瘤腺病毒載體。該載體具有如下特點(diǎn)①利用AFP啟動(dòng)子，并添加HS4隔離子序列以獲得肝癌靶向基因表達(dá)。②攜帶的ELA基因以幫助腺病毒在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。③攜帶TRAIL蛋白表達(dá)框以增強(qiáng)細(xì)胞殺傷作用。④刪除E3區(qū)基因以獲得針對(duì)肝癌細(xì)胞的高效殺傷。分別構(gòu)建攜帶和不攜帶TRAIL基因的重組腺病毒ADHS4AFEEIA／TRAIL和ADHS4AFRELA。研究結(jié)果表明攜帶TRAIL基因的重組腺病毒載體感染腫瘤細(xì)胞后，在復(fù)制溶瘤的同時(shí)，增加了肝癌細(xì)胞對(duì)TRAIL蛋白的敏感性，顯著提高內(nèi)源性TRAIL蛋白的表達(dá)，從而獲得了更加強(qiáng)烈的腫瘤殺傷效果，并且在低表達(dá)AFP的肝癌細(xì)胞中也表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性，因此應(yīng)用攜帶TRAIL基因的溶瘤腺病毒治療肝細(xì)胞癌是一項(xiàng)具有重要科學(xué)意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的探索。關(guān)鍵詞條件復(fù)制型腺病毒，腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體，人肝細(xì)胞癌，甲胎蛋白啟動(dòng)子，HS4隔離子，ELA，E3

簡(jiǎn)介：鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文重組MASH1慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)姓名張瑞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師許予明張博愛(ài)200605152．№SHL基因慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建接種PGEMTMASHL重組質(zhì)粒于LBAIⅡP液體培養(yǎng)基，提取此重組質(zhì)粒DNA并用限制性內(nèi)切酶BAIILHI和XHOLI對(duì)其和LENTIVIRUS載體雙酶切，分別回收純化，得到№SHL基因雙粘片段和LENTIVIRUS雙粘線性質(zhì)粒，以T4連接酶將二者連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌JML09。小提重組克隆質(zhì)粒DNA，BAIL【LHI和XHOLI雙酶切篩選鑒定陽(yáng)性重組質(zhì)粒LENTIVIRUS婦SHL。3．慢病毒表達(dá)載體LENTIVIRUSMASHL的轉(zhuǎn)染和表達(dá)將LENTIVIRUS一№SHL和輔助病毒載體共感染293T細(xì)胞，48小時(shí)后收集病毒顆粒；使病毒顆粒感染ECA一9706細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)；收集感染后的ECA_9706細(xì)胞及未感染的的ECA一9706細(xì)胞，分別提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)RTPCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)MASHLⅢRNA水平的表達(dá)。結(jié)果1．MASHL基因克隆RT～PCR擴(kuò)增得到的CDNA片段為719BP，與GENBANK中MASHL基因CDNA長(zhǎng)度一致。MASHL基因CDNA片段與克隆載體PGEMTEASY連接后轉(zhuǎn)化，經(jīng)藍(lán)白篩選得到大量菌落，以T7／SP6為引物PCR擴(kuò)增鑒定及雙酶切鑒定得到陽(yáng)性重組克隆PGEMTMASHL，重組克隆的基因測(cè)序結(jié)果與GENBANK中MASHL基因序列一致，二者堿基同源性達(dá)100％，為相同的氨基酸編碼。2．MASHL基因慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建雙酶切重組質(zhì)粒PGEMTMASHL和質(zhì)粒LENTIVIRUS后得到的MASHL基因雙粘片段及雙粘LENTIVIRUS線性質(zhì)粒連接后經(jīng)轉(zhuǎn)化，得到大量菌落，通過(guò)雙酶切鑒定得到陽(yáng)性重組質(zhì)粒LENTIVIRUSMASHL。3．LENTIVIRUSMASHL的轉(zhuǎn)染和表達(dá)LENTIVIRUSMASHL表達(dá)載體轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞產(chǎn)生病毒顆粒后，感染ECA一9706細(xì)胞，48小時(shí)后觀察到綠色熒光蛋白的廣泛表達(dá)；RTPCR結(jié)果顯示感染此病毒顆粒的ECA一9706細(xì)胞內(nèi)存在MASHL基因的高表達(dá)。結(jié)論本研究成功建立了小鼠MASHLCDNA克??；成功構(gòu)建了LENTIVIRUS_MASHL慢病毒表達(dá)載體；經(jīng)過(guò)包裝產(chǎn)生病毒顆粒，感染ECA．9706細(xì)胞，檢測(cè)到MASHL基因高表達(dá)；為千細(xì)胞的神經(jīng)定向分化調(diào)控研究及MASHL基因治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞MASHL；BHLH基因轉(zhuǎn)染；基因表達(dá)；RTPCRII

簡(jiǎn)介：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文乙型肝炎病毒X蛋白反式調(diào)節(jié)作用的研究姓名李進(jìn)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（傳染病學(xué)）指導(dǎo)教師張玲霞成軍20060523軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文乙型肝炎病毒X蛋白反式調(diào)節(jié)作用的研究中文摘要乙型肝炎病毒HBV感染，不僅引起急，慢性病毒性肝炎，而且是肝纖維化和肝細(xì)胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC的主要病因。病毒基因組編碼的蛋白通過(guò)反式調(diào)節(jié)宿主肝細(xì)胞基因組的表達(dá)，調(diào)控肝細(xì)胞的生長(zhǎng)，可能是HBV致病癌的重要分子機(jī)制之一．HBV基因組具有4個(gè)主要的開(kāi)放讀碼框架0RF，分別命名為S、C、P，X區(qū)，其中X區(qū)編碼154個(gè)氨基酸殘基組成的17．5KDA的產(chǎn)物一HBX。HBX是一種具有反式調(diào)節(jié)作用的病毒蛋白質(zhì)，關(guān)于其反式調(diào)節(jié)作用，來(lái)自不同研究小組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果甚至相互矛盾，因此，HBX在病毒復(fù)制和發(fā)病機(jī)制中的確切作用還有待進(jìn)一步闡明．利用寡核苷酸基因芯片技術(shù)對(duì)HBX蛋白反式調(diào)節(jié)靶基因進(jìn)行新的開(kāi)拓，全面了解HBX蛋白反式調(diào)節(jié)作用的靶基因，有助于闡明耶V感染的部分分子生物學(xué)機(jī)制．本課題首先應(yīng)用常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建HBX蛋白的真核表達(dá)載體PCDNA3．1一X，并將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系HEPG2細(xì)胞，以空載體為平行對(duì)照。應(yīng)用寡核苷酸基因芯片技術(shù)對(duì)HBX反式調(diào)節(jié)的靶基因進(jìn)行篩選，同時(shí)結(jié)合生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行分析。在篩選的2L，329條基因中，有426條差異表達(dá)的基因，其中168條基因表達(dá)上調(diào)，258條基因表達(dá)水平下調(diào)，這些基因包括許多與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡．信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫反應(yīng)．物質(zhì)代謝，細(xì)胞分裂周期、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等相關(guān)的基因，還包括一些未知功能的新基因，其中之一命名為HBX蛋白反式激活基因11XTPLL．為進(jìn)一步研究細(xì)胞中表達(dá)的HBX蛋白對(duì)抑癌基因P53的調(diào)節(jié)作用，我們利用生物信息學(xué)技術(shù)確定抑癌基因P53的啟動(dòng)子區(qū)域P53P，構(gòu)建真核報(bào)告基因表達(dá)載體PCAT3一P53P；以該質(zhì)粒單獨(dú)及與PCDNA3．1_一X共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，用酶聯(lián)免疫吸附法ELISA檢測(cè)氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶CAT的表達(dá)活性．結(jié)果顯示，克隆的P53啟動(dòng)子序列具有激活下游基因轉(zhuǎn)錄的活性，當(dāng)PCAT3一P53P與PCDNA3．1一X共轉(zhuǎn)染時(shí)CAT的表達(dá)活性明顯下降；進(jìn)一步采用反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR技術(shù)檢測(cè)表明，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染了PCDNA3．1一X的HEPG2細(xì)胞中P53基因ML【NA表達(dá)減少．說(shuō)明HBX蛋白在轉(zhuǎn)錄水平上反式抑

簡(jiǎn)介：目的探討重慶地區(qū)下呼吸道感染患兒中人博卡病毒（HBOV）的流行情況、喘息性疾病患兒感染HBOV的臨床特點(diǎn)、呼吸道HBOV病毒載量與患兒臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系，以期明確HBOV在下呼吸道感染中是扮演的是病原（PATHOGEN）還是“過(guò)客（PASSENGER）”的角色。方法1從2006年4月～2010年1月，共收集136例喘息性疾病住院患兒的下呼吸道分泌物。同時(shí)，收集了50例同期住院、臨床無(wú)喘息表現(xiàn)患兒的下呼吸道分泌物作為對(duì)照。所有標(biāo)本經(jīng)纖維支氣管鏡檢查吸取。2利用免疫熒光快速診斷試劑盒篩查標(biāo)本7種常見(jiàn)呼吸道病毒。3DNA病毒檢測(cè)用PCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中DNA病毒。標(biāo)本收集后，取200ΜL用QIAAMP（）DNAMINIKIT（QIAGENINC，USA）提取病毒基因組DNA，提取的DNA用于病毒基因核酸片斷的擴(kuò)增。4RNA病毒檢測(cè)用RTPCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中RNA病毒。標(biāo)本收集后，取200ΜL上清用QIAAMP（）RNAMINIKIT（QIAGENINC，USA）提取病毒基因組RNA，提取的RNA經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄后用于病毒基因核酸片斷的擴(kuò)增。5REALTIMEPCR定量檢測(cè)HBOV使用TAQMAN探針?lè)▽?duì)HBOV陽(yáng)性標(biāo)本中提取的DNA進(jìn)行HBOV定量檢測(cè)，結(jié)果以COPIESML下呼吸道分泌物表示。6統(tǒng)計(jì)分析計(jì)數(shù)資料的比較使用X2檢驗(yàn)，計(jì)量資料如病毒載量、住院時(shí)間、臨床癥狀評(píng)分之間的比較使用兩組計(jì)量資料的秩和檢驗(yàn)、兩獨(dú)立樣本的T檢驗(yàn)，組間比較以P結(jié)果1一般情況2006年4月至2010年1月，共收集標(biāo)本186份。其中對(duì)照組（C組）患兒50例，男性28例，年齡分布為3月～169月，年齡中位數(shù)為16月。喘息組（W組）患兒136例，男性89例，年齡分布為1月～141月，年齡中位數(shù)為10月。2下呼吸道病毒檢出情況186例中61例患兒下呼吸道分泌物標(biāo)本經(jīng)過(guò)呼吸道病原免疫熒光、PCR檢測(cè)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)常見(jiàn)呼吸道病毒。186例患兒下呼吸道分泌物標(biāo)本均未檢出PIV2。本組資料所有病毒中，檢出率最高的是PIV3，其次是RSV、HBOV、RV。單一病毒感染的檢出率，仍是這四種病毒居前四位。31例HBOV陽(yáng)性標(biāo)本中，單純HBOV陽(yáng)性14例，其余17例為混合感染，HBOV混合感染率高達(dá)55％，與HBOV混合感染的常見(jiàn)病毒依次為RSV、RV、PIV3、ADV。冬季HBOV檢出率最高，以12月份最為突出，除9月份外，全年各月份均有HBOV感染病例。HBOV感染的患兒年齡分布為4～169月，平均年齡1641±561月（X±SEM）。HBOV感染以6～24月大小的患兒為主。3HBOV定量檢測(cè)結(jié)果REALTIMEPCR定量檢測(cè)HBOV結(jié)果，根據(jù)參考文獻(xiàn)140個(gè)循環(huán)之前有擴(kuò)增反應(yīng)、病毒載量大于500COPIESML分泌物的標(biāo)本視為特異性、有效擴(kuò)增，HBOV定量1E4COPIESML分泌物定義為高病毒載量。對(duì)31例患兒的下呼吸道分泌物標(biāo)本進(jìn)行HBOV定量檢測(cè)，標(biāo)本HBOV定量介于502E2～526E9COPIESML分泌物之間。對(duì)HBOV定量500COPIESML分泌物的標(biāo)本進(jìn)行分析，其中高載量標(biāo)本10例，占32％，低載量標(biāo)本21例，占68％。對(duì)照組、喘息組HBOV載量平均值分別為435E3±172E3COPIESML分泌物、258E7±189E7COPIESML分泌物，中位數(shù)分別為229047COPIESML分泌物、1334283COPIESML分泌物，喘息組標(biāo)本HBOV載量顯著高于對(duì)照組（P001）。4喘息性疾病患兒HBOV感染的臨床特點(diǎn)高載量組與低載量的呼吸道癥狀評(píng)分無(wú)顯著差異（T檢驗(yàn)，P005）。高載量組平均住院時(shí)間明顯長(zhǎng)于低載量組，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（T檢驗(yàn)，P高載量組中喘息時(shí)間超過(guò)4周的病例數(shù)顯著多于低載量組（X2檢驗(yàn)，P結(jié)論1重慶地區(qū)下呼吸道感染的兒童HBOV感染陽(yáng)性率為17％，HBOV與其它呼吸道常見(jiàn)病毒的混合感染率是55％，與HBOV混合感染的病毒依次是RSV、RV、PIV3、ADV。2HBOV感染主要發(fā)生在6個(gè)月～2歲的兒童，HBOV的流行季節(jié)是冬季。3喘息組標(biāo)本HBOV載量顯著高于對(duì)照組（P001）；在喘息性疾病患兒中，高載量組平均住院時(shí)間明顯長(zhǎng)于低載量組（P005），高載量組中，喘息時(shí)間超過(guò)4周的病例數(shù)顯著多于低載量組。提示喘息是HBOV感染的重要臨床表現(xiàn)，當(dāng)HBOV以較高的病毒載量存在于呼吸道時(shí)，扮演病原（PATHOGEN）的角色。

簡(jiǎn)介：摘要既往的研究表明電刺激NBMNUCLEUSBASALISOFMEYNERT能夠促進(jìn)學(xué)習(xí)功能，并能增加皮層等腦區(qū)的血流量。為了證實(shí)慢性NBM電刺激對(duì)慢性腦缺血低灌注性認(rèn)知功能障礙大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能的改善作用，以及對(duì)海馬區(qū)慢性缺血損傷的保護(hù)作用，我們建立了2VO腦缺血大鼠模型，并對(duì)其進(jìn)行慢性電刺激30MIN／D，15DAYS，刺激參數(shù)為1SON／LSOFF,0．5MSDURATION，50HZ，200UA。進(jìn)行MORRIS水迷宮檢測(cè)，記錄逃避潛伏期和象限偏好程度檢測(cè)其學(xué)習(xí)記憶的損傷程度，對(duì)海馬區(qū)進(jìn)行TUNEL染色，觀察細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果表明電刺激大鼠較對(duì)照組大鼠逃避潛伏時(shí)間有改善PO．05，海馬CAL區(qū)凋亡細(xì)胞明顯減少PO．05。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示慢性NBM電刺激15天能夠改善2VO大鼠在MORRIS水迷宮中的學(xué)習(xí)和記憶能力，其機(jī)制可能與NBM慢性電刺激使海馬區(qū)的細(xì)胞凋亡減少有關(guān)。關(guān)鍵詞MEYNER基底核；深部電刺激；腦缺血；海馬目錄弓}言?????????????????????????????????????????????．1第1章建立慢性腦缺血性認(rèn)知功能障礙大鼠模型??????????????．．21．1建立血管結(jié)扎模型??矗???????????????????????“21．1．1實(shí)驗(yàn)材料、動(dòng)物???????????????????????????21．1．2實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????????21．2檢驗(yàn)?zāi)Ｐ褪欠癯晒??????????????????????????。31．2．1實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????31．2．2實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????????．31．2．3統(tǒng)計(jì)分析??????????????????????????????3第2章NBM電刺激??????????????????????????????????．52．1電極制備??????????????????????????????“52．1．1實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????52．1．2實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????????52．2NBM電極植入????????????????????????????52．2．1實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????62．2．2實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????????62．3NBM電刺激??????????????????????????????????????～72．3．1實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????72．3．2實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????????7第3章行為學(xué)檢測(cè)第4章免疫組化和病理觀察784．1灌注取腦??????????????????????????????。84．1．1實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????。84．1．1實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????????84．2確定電極位置?????????????????????????????84．2．1實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????．9

簡(jiǎn)介：陜西師范大學(xué)碩士學(xué)位論文幼兒空間認(rèn)知發(fā)展中感覺(jué)運(yùn)動(dòng)智能和概念智能的關(guān)系姓名焦武萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)應(yīng)用心理學(xué)指導(dǎo)教師游旭群20070501歲6個(gè)月一3歲7個(gè)月比較，左右任務(wù)判斷沒(méi)有得到發(fā)展，格子辨別任務(wù)和自我中心任務(wù)得到了發(fā)展。2、分次旋轉(zhuǎn)任務(wù)條件下，中班幼兒和小班幼兒比較，左右任務(wù)判斷沒(méi)有得到發(fā)展，格子辨別任務(wù)和距離判斷任務(wù)得到了發(fā)展。3、年齡越小，幼兒更為固定反應(yīng)?？紤]到固定反應(yīng)為自我中心，可得出結(jié)論如下更早發(fā)展的是固定反應(yīng)自我中心感覺(jué)運(yùn)動(dòng)及具體形象思維特點(diǎn)較晚發(fā)展的是固定位置客體中心語(yǔ)義特點(diǎn)及抽象思維4、有概念智能的左右判斷任務(wù)在中班和小班幼兒中一致沒(méi)有得到發(fā)展，提示感覺(jué)運(yùn)動(dòng)智能和概念智能共同作用于兒童空間定位的認(rèn)知過(guò)程中，但是不同步的。5、發(fā)展不充分的概念智能對(duì)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)智能有抑制作用。關(guān)鍵詞空間定位知覺(jué)發(fā)展空間想象認(rèn)知發(fā)展兒童

簡(jiǎn)介：華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文社會(huì)認(rèn)知的刻板解釋偏差研究姓名俞海運(yùn)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)基礎(chǔ)心理學(xué)指導(dǎo)教師梁寧建20050401ABSTRACTSTEREOTYPICEXPLANATORYBIASSEBEMERGESWHENONEISMORELIKELYTOPROVIDEEXPLANATIONSFORBEHAVIORSTHATAREINCONSISTENTWITHEXPECTANCIESRELEVANTTOPEOPLE’SSTEREOTYPESASANINDEXTOMEASUREIMPLICITATTITUDES，SEBREFLECTSTHEUNINTENDEDINFLUENCEOFSTEREOTYPESONINFORMATIONPROCESSINGAFTERTHEWAYOFUSINGSEBWASINTRODUCED，INEXPERIMENTL，THEEFFECTIVENESSOFSEBTODETECTPEOPLE’SIMPLICITGENDERSTEREOTYPESINSOCIALCOGNITIONWASVERIFIED。INEXPERIMENT2，HOWTHESEBCOULDPREDICTPEOPLE’SLATERBEHAVIORSINSOCIALCOMMUNICATIONCIRCUMSTANCEWASEXPLOREDINEXPERIMENT3，THECOMPARISONAMONGTHEMEASLLREUSINGSEB，ASANINDEX，THETRADITIONALEXPLICITMEASUREONGENDERSTEREOTYPESANDTHEMODEMIMPLICITASSOCIATIONTESTWASMADE。RESULTSOFTHETHREEEXPERIMENTSSHOWEDTHEFOLLOWINGCONCLUSIONSRESPECTIVELYFIRSTLYSEBSHOWEDSIGNIFICANTLYACERTAINKINDOFIMPLICITGENDERSTEREOTYPES，ANDTHEREWASNOGENDERDIFFERENCEINTHISIMPLICITATTITUDE。MEANWHILE，SEBALSOVERIFIEDTHEFUNDAMENTALATTRIBUTIONBIASANDTHEEGOTISMATTRIBUTIONBIASINPEOPLE’SATTRIBUTIONSTHATIS，NOMATTERWHICHGROUPONEBELONGSTO，HEORSHETENDSTOMAKEINTERNALATTRIBUTIONSINSTEADOFEXTERNALONES，WHICHISESPECIALLYOBVIOUSWHENTHEBEHAVIOROUTCOMEISPOSITIVESECONDLY，SEBPREDICTEDTHESUBJECTS’CHOICESTOASKSTEREOTYPICQUESTIONSINTHELATERSOCIALINTERACTIONCIRCUMSTANCESHOWEVER，SEBDIDNOTSHOWANYCORRELATIONWITHTHERESEARCHASSISTANTS’FEELINGOFSUBJECTS’FRIENDLINESS，WHICHISTHEVARIABLEFROMTHEOTHERSIDEOFSOCIALINTERACTION。FINALLYBOTHSEBANDIATWEREABLETODETECTIMPLICITGENDERSTEREOTYPESSIGNIFICANTLYWHILEEXPLICITMEASURESCOULDNOTTHATMEANTTHERESULTSSHOWEDTHEEXPERIMENTALDISSOCIATIONBETWEENIMPLICITANDEXPLICITMEASURINGRESULTS締加T‘SMORE，NOCORRELATIONBETWEENANYTWOOFTHETHREEMEASURESWASSIGNIFICAFLTASFARASTHETHREEMEASURES’PREDICTIONSFORTHEBEHAVIORSINIATERSOCIALINTERACTIONSWERECONCERNED，ONONEHAND，IATRESULTSANDEXPLICITMEASURESCOULDNOTPREDICTSUBJECTS’CHOICESTOASKSTEREOTYPICQUESTIONS，WHICHWASDIFFERENTFROMTHESEBRESULTSONTHEOTHERHAND1ATANDEXPLICITMEASURESSHOWEDNOCORRELATIONWITHTHERESEARCHASSISTANTS’FEELINGOFSUBJECTS’FRIENDLINESS，WHICHWASTHESAMEASTHESEB，RESULTSKEYWORDSTEREOTYPICEXPLANATORYBIAS，IMPLICITSTEREOTYPE，GENDERSTEREOTYPES，IMPLICITSOCIALCOGNITION

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)測(cè)定慢性乙型病毒性肝炎CHB患者的血清谷胱甘肽及其系列酶的濃度，以揭示CHB患者體內(nèi)的抗氧化水平，同時(shí)測(cè)定Α干擾素受體2IFNAR2和肝細(xì)胞凋亡的水平，探討氧化還原狀態(tài)與干擾素受體表達(dá)水平、肝細(xì)胞凋亡水平的相關(guān)性，從而指導(dǎo)CHB的臨床治療。方法健康對(duì)照10例，年齡22～38歲，平均297±58歲。其中男女各5例，均為身體健康者。CHB患者66例，為2007年3月～2007年8月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科就診的患者。年齡16～51歲，平均325±105歲。其中男37例，女29例，所有患者均符合2000年第十次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的病毒性肝炎防治方案中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所選患者均未患有其它系統(tǒng)疾病。血清谷胱甘肽GSH、谷胱甘肽還原酶GR、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶GPX、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶GST均采用化學(xué)比色法測(cè)定，外周血單核細(xì)胞PBMCSLFNAR2MRNA測(cè)定采用RTPCR法，肝細(xì)胞凋亡水平采用TUNEL法測(cè)定，用T檢驗(yàn)分析患者組與正常對(duì)照組之間各指標(biāo)的差異。用直線相關(guān)分析分析指標(biāo)之間的相關(guān)性。結(jié)果1CHB患者組與健康對(duì)照組相比，GSH、GPX和GR的濃度均明顯降低，GST的濃度明顯升高；在CHB患者組中，GST的濃度與ALT水平呈明顯正相關(guān)，GSH及GPX的濃度與ALT水平呈明顯負(fù)相關(guān)。2HBVDNA陽(yáng)性組與HBVDNA陰性組相比，GSH及其系列酶的濃度無(wú)差別，HBVDNA陽(yáng)性的CHB患者組中，GSH及其系列酶的變化與HBVDNA的濃度無(wú)相關(guān)性。3CHB患者組PBMCSIFNAR2MRNA的表達(dá)值與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清HBVDNA陰性組PBMCSIFNAR2MRNA的表達(dá)明顯高于HBVDNA陽(yáng)性組。PBMCSIFNAR2MRNA表達(dá)與GSH抗氧化系統(tǒng)無(wú)明顯相關(guān)性。4CHB患者GSH抗氧化系統(tǒng)與肝細(xì)胞凋亡水平無(wú)明顯相關(guān)性。結(jié)論1慢性乙型病毒性肝炎患者機(jī)體內(nèi)抗氧化能力降低，存在氧化損傷，且機(jī)體的氧化損傷狀態(tài)與HBVDNA濃度高低無(wú)關(guān)。2慢性乙型病毒性肝炎患者機(jī)體的氧化損傷狀態(tài)與Α干擾素受體的表達(dá)水平及肝細(xì)胞的凋亡水平無(wú)關(guān)。3由于谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)酶之間的相互聯(lián)系性，對(duì)慢性乙型肝炎患者補(bǔ)充抗氧化劑時(shí)，不能單純補(bǔ)充GSH。

簡(jiǎn)介：1碩士學(xué)位論文論文題目道德認(rèn)知當(dāng)代道德困境的癥結(jié)研究生姓名蔣云蔚指導(dǎo)教師姓名于樹(shù)貴專業(yè)名稱倫理學(xué)研究方向中西方倫理學(xué)史論文提交日期2014年04月3