簡介：背景G蛋白偶聯(lián)受體GPROTEINCOUPLEDRECEPT，GPCR是一個龐大的受體家族，通過G蛋白與效應分子偶聯(lián)，完成跨膜信號轉(zhuǎn)導，實現(xiàn)多種生理或藥理效應。除真核生物外，許多病毒所編碼的病毒蛋白也具有GPCR的特征，如具有7次疏水跨膜區(qū)域、氨基末端存在糖基化位點、胞內(nèi)區(qū)存在磷酸化位點，氨基末端及胞外環(huán)中存在保守的半胱氨酸等。許多體內(nèi)外研究提示，病毒所編碼的GPCR蛋白對病毒復制以及病毒在自然宿主中所誘導的病理生理效應具有重要調(diào)控作用。例如，鼠巨細胞病毒GPCR蛋白M33的缺陷將導致病毒不能播散至感染鼠的唾液腺部位同時相對于野生型病毒，M33缺陷性的鼠巨細胞病毒對免疫功能底下小鼠的毒性更低而該病毒另一種GPCR基因M78的缺陷使鼠巨細胞病毒無論是在免疫功能健全還是免疫功能底下的小鼠中，都以一更低的水平復制和或播散。Γ2皰疹病毒亞科的卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒KSHV編碼的G蛋白偶聯(lián)受體F74也被認為在卡波氏肉瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。隸屬于Γ皰疹病毒亞科的EB病毒亦編碼一種GPCR蛋白BILF1，BILF1是目前發(fā)現(xiàn)的唯一的EB病毒GPCR蛋白。迄今為止，PUBMED僅收錄5篇有關(guān)BILF1的文獻。這些研究顯示，BILF1屬于一新型G蛋白偶聯(lián)受體的亞家族，定位于漿膜系統(tǒng)，組成性激活GAI蛋白并借助其傳遞生物信號BILF1還可通過下調(diào)MHCI類分子在宿主細胞膜表面的表達，在病毒免疫逃逸過程中發(fā)揮極其重要的作用。具有GPCR活性的BILF1是EB病毒的立早蛋白之一，已知其調(diào)控ERK，NFКB等多條信號通路，參與病毒的裂解性復制，而它對宿主細胞更多調(diào)控作用機制有待進一步發(fā)掘。EB病毒在人群中廣泛感染9095％，其感染的一個重要特征是病毒能在機體能完成反復多次的潛伏裂解期轉(zhuǎn)換。EBV潛伏在外周血的記憶性B細胞中，當遇到特定信號的刺激，潛伏在記憶性B細胞中的EBV被激活，釋放出的病毒最終在口咽部上皮細胞中發(fā)生爆發(fā)性復制?？梢?，攜帶EBV的B細胞在循環(huán)系統(tǒng)中游走、遷移、最后在效應部位定居和大量復制。EBV在機體中的生活史依賴于細胞粘附分子的作用。同時EBV能轉(zhuǎn)化B細胞與B細胞淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌等多種腫瘤有關(guān)。而許多粘附分子介導了腫瘤的惡性行為。細胞間粘附分子INTERCELLULARADHESIONMOLECULEICAM1以其介導異質(zhì)粘附的功能受到研究人員的關(guān)注。ICAM1屬于免疫球蛋白超家族，是調(diào)節(jié)異質(zhì)黏附的重要因素，它在一些惡性腫瘤，如惡性黑色素瘤、胃癌、結(jié)腸癌、腎癌等腫瘤細胞中過度表達，與腫瘤轉(zhuǎn)移和預后密切相關(guān)。我們在研究中發(fā)現(xiàn)BILF1可在蛋白水平上調(diào)ICAM1分子的表達，在此基礎(chǔ)上，我們設(shè)計了相關(guān)實驗，進一步分析BILF1對ICAM1表達調(diào)控作用及機制。目的分析EB病毒立早蛋白BILFI對細胞間粘附分子ICAM1表達的上調(diào)作用，并初步探討其調(diào)控信號及機制。方法首先，我們在人B淋巴瘤細胞系RAJI中構(gòu)建了TPASB誘導EBV激活的細胞模型并分析了BILF1在EBV激活過程中的表達模式。我們同時構(gòu)建了BILFI的真核表達載體并通過電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)外源轉(zhuǎn)入BILF1，應用WESTEMBOLT、REALTIMEPCR、雙熒光素酶報告載體實驗和特異性SIRNA干擾技術(shù)，分別在蛋白水平和MRNA水平分析了BILF1對細胞間粘附分子ICAM1表達水平的影響并分析其調(diào)控機制。為進一步分析BILFL蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)EKT結(jié)構(gòu)域與BILF1生物學功能之間的關(guān)系，我們構(gòu)建了BILFIK122A突變體，并通過WESTEMBOLT、雙熒光素酶報告載體實驗和免疫熒光技術(shù)，在蛋白水平、MRNA水平及亞細胞定位等方面進一步探討B(tài)ILFI的功能與作用方式。結(jié)果研究結(jié)果顯示，BILF1是EBV立早蛋白之一，在TPASB誘導的EBV激活模型中，BILF1表達模式與立早轉(zhuǎn)錄因子ZTA的表達完全一致過表達BILF1在MRNA和蛋白水平上調(diào)粘附分子ICAML分子的表達BILF1可激活I(lǐng)CAM1的啟動子活性，提示BILF1調(diào)控了ICAM1的轉(zhuǎn)錄。NFКB和AP1是ICAM1啟動子上重要的反應元件。通過報告載體分析發(fā)現(xiàn)，過表達BILFI可直接上調(diào)APL和NFКB報告載體活性，且對AP1的激活更顯著，呈劑量依賴性。提示BILF可能通過激活NFКB和AP1上調(diào)ICAM1啟動子活性，從而影響ICAM1轉(zhuǎn)錄及表達。進一步通過WB分析實驗觀察到過表達BILF1在上調(diào)ICAMI表達的同時誘導P65的磷酸化，上調(diào)NFКB靶基因BCLXL和IКBΑ表達，同時上調(diào)AP1成員CJUN磷酸化和CFOS水平。用MEKL抑制劑阻斷ERK通路的活化，觀察到BILFI的AP1的激活和ICAMI的上調(diào)作用只是部分受到的影響。提示BILF1對ICAM1的上調(diào)作用依賴于其它通路。BILF1的GPCR活性依賴于其分子中的EKT結(jié)構(gòu)域，我們構(gòu)建了EKT功能缺陷的BILF1突變體K122A，通過報告載體活性分析及WB實驗觀察到EKT功能域缺陷后部分的抑制了BILF1對AP1的激活，提示BILF1對AP1的激活部分依賴于‘EKT結(jié)構(gòu)域。最后我們通過，RNA干擾實驗結(jié)果證實，特異性敲低BILF1可抑制EBV激活所誘導的ICAM1表達上調(diào)。結(jié)論具有GPCR活性的EB病毒立早蛋白BILF1可在MRNA和蛋白水平上調(diào)細胞間粘附分子ICAM1表達，這一效應主要是通過不完全依賴于ERK的AP1信號通路實現(xiàn)的。BILF1上調(diào)ICAM1分子表達，可增強細胞的異質(zhì)黏附能力，介導細胞與內(nèi)皮細胞的黏附，促進其穿內(nèi)皮過程，從而在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。這一結(jié)果提示我們，BILF1很可能參與了EBV相關(guān)腫瘤的惡性演進過程，并在其侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用。

簡介：目的建立兔椎間盤退變模型應用腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS介導BMP7HUMANBONEMPHOGEIEPROTEIN7和SOX9雙基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤，觀察單基因及雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對退變椎間盤的生物學效應。方法選取30只成年新西蘭大白兔，雌雄不限，重量約3KG，1歲齡，用20G針頭針刺L3、4、L4、5、L5、6椎間盤，制備椎間盤退變動物模型。4周后將30只兔子隨機分成5組A、B、C、D、E組分別于造模髓核中注射AAVBMP7SOX9、AAVBMP7、AAVSOX9、AAVEGFP，磷酸鹽緩沖液PBS。分別于二次手術(shù)后3、6、9周，采用計算機X線攝影術(shù)COMPUTEDRADIOGRAPHY，CR和WESTERNBLOT技術(shù)，觀察對椎間盤退變的修復效果并檢測Ⅱ型膠原基因表達及蛋白多糖的合成。結(jié)果針刺損傷椎間盤4周后，椎間盤發(fā)生早期退變基因轉(zhuǎn)染后椎間盤的改變影像學檢測A、B、C組椎間隙較E組有明顯恢復，其中A組最明顯D、E組椎間隙無明顯差異。分子生物學檢測基因轉(zhuǎn)染后3、6、9周后WESTERNBLOT結(jié)果示A、B、C組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達較E組增高，各組均有顯著差異D、E組比較無顯著差異A組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達高于B、C組，各組均有顯著差異。結(jié)論本方法可以成功建立一種椎間盤退變動物模型SOX9基因可以明顯提高Ⅱ型膠原的表達，不能提高蛋白多糖的表達BMP7基因可以協(xié)同SOX9逆轉(zhuǎn)椎間盤退變BMP7和SOX9共轉(zhuǎn)染具有協(xié)同效應。

簡介：目的研究HLAA33表型TNFATNFRⅡ單核苷酸多態(tài)性與腸道病毒71型EV71感染遺傳易感性的關(guān)系探討不同基因表型對EV71感染患病風險的影響。方法收集2009年9月2010年10月EV71檢測為陽性的急性期中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患兒123例根據(jù)病情輕重分成輕癥組、重癥組提取患兒外周血白細胞的基因組DNA用序列特異性引物聚合酶鏈反應PCRSSP技術(shù)檢測EV71感染患兒及正常對照兒童HLAA33表型、TNFA308位點的多態(tài)性和限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應PCRRFLP檢測TNFRⅡ196位點的多態(tài)性。結(jié)果1EV71感染患兒中HLAA33表型陽性率2439與健康兒童組陽性率1182的差異有統(tǒng)計學意義X26099P＜005。2EV71中樞感染患兒TNFA308位點A等位基因頻率明顯高于正常對照組X26367P＜005感染組TNFA308GG基因型分布頻率顯著低于正常對照兒童X25393P＜005而輕癥組與重癥組相比其差異無統(tǒng)計學意義P＞005。3TNFRⅡ196位點T等位基因頻率在EV71感染組與對照組、輕癥組與重癥組之間的差異均無統(tǒng)計學意義P＞005。4HLAA33患兒中EV71感染組TNFRⅡ196TG基因型頻率明顯高于正常對照組X23866P＜005面在HLAA33兒童中其差異無顯著意義。結(jié)論1HLAA33表型與EV71中樞感染有關(guān)HLAA33升高了EV71腦炎的發(fā)病幾率。2TNFA308位點基因多態(tài)性與EV71中樞感染有一定的相關(guān)性TNFA308GG基因型可能為兒童不易感染EV71的保護基因。3TNFRⅡ196位點基因多態(tài)性與EV71感染沒有明顯的相關(guān)性。4TNFRⅡ196TG基因型升高了HLAA33患兒EV71中樞感染的發(fā)病幾率。

簡介：分類號UDCIU72616編號10299J0714001江艨大擎JIANGSUUNIVERSITY高教碩士學位論文論文題目基王譴痘耋全基因莊到鮑丕統(tǒng)進絲拯基固重組巫究學科專業(yè)造廢檢驗途逝堂作者姓名使短墊指導教師陵壁霞熬援韭室擅答辯日期壘Q呈生Q魚旦Q璺旦分類號UDC11372616密級坌孟編號Q222』Q21壘QQL碩士學位論文基于博卡病毒全基因序列的系統(tǒng)進化及基因重組研究PHYLOGENETICANDRECOMBINATIONANALYSISBASEDONTHECOMPLETEGENOMEOFBOCAVIRUS姓2012年4月

簡介：輪狀病毒RV能夠引起人類、哺乳動物類、禽類腹瀉，其中A組RV是引起嬰幼兒急性胃腸炎的主要病原體。完整的RV共有三層衣殼，其基因組包裹在同心衣殼蛋白組成的二十面體顆粒中，由11個分節(jié)段的雙鏈RNA組成。RVVP6蛋白位于病毒的中間層衣殼，既是病毒含量中最豐富的蛋白，也是RV的組抗原蛋白。VP6蛋白氨基酸序列具有高度保守性，并具有較強的抗原交叉反應性RVVP4和VP7是主要的中和抗體原蛋白。VP4蛋白在病毒外殼形成刺突樣結(jié)構(gòu)，能獨立誘導機體產(chǎn)生中和抗體。目前上市的RV疫苗均為減毒活疫苗，這些疫苗雖有其優(yōu)勢，也有一定潛在的不足，開發(fā)安全有效的新型疫苗仍具有重要意義。本研究選取VP4蛋白上具有高度保守性和抗原交叉反應性的第296313位和第381401位氨基酸抗原表位進行重組抗原表位嵌合蛋白研究。采用基因工程技術(shù)，成功構(gòu)建A組人RVTBCHEN株VP6載體蛋白，將上述兩個抗原表位分別插入VP6蛋白載體基因同一位點，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒，在大腸桿菌（ECOLI）細胞中成功表達出兩個在VP6載體蛋白表面攜帶有VP4中和抗原表位的重組嵌合蛋白。表達的嵌合蛋白可與相應抗體發(fā)生特異性反應可誘導豚鼠產(chǎn)生特異性血清抗體抗嵌合蛋白血清抗體可特異性識別載體蛋白VP6F，WA株病毒的VP6和VP4蛋白，可中和WA株病毒在MA104細胞上的感染性。結(jié)果表明，所構(gòu)建和表達的兩個以VP6為載體的VP4抗原表位嵌合蛋白具有較高抗原反應性和免疫原性嵌合蛋白攜帶的VP4抗原表位具有增強載體蛋白免疫原性作用。本研究為研制新型RV重組蛋白疫苗的奠定較好基礎(chǔ)。

簡介：分類號密級UDC編號碩士學位論文缺血性腦白質(zhì)病變與認知功能障礙的相關(guān)性研究學位申請人人閆文軍指導教師師黃麗娜教授學科專業(yè)業(yè)神經(jīng)病學學位類別別醫(yī)學2012年3月摘要論文題目論文題目缺血性腦白質(zhì)病變與認知功能障礙的相關(guān)性研究缺血性腦白質(zhì)病變與認知功能障礙的相關(guān)性研究專業(yè)業(yè)神經(jīng)病學神經(jīng)病學研究生生閆文軍閆文軍指導教師指導教師黃麗娜黃麗娜教授教授摘要目的目的第一，研究缺血性腦白質(zhì)病變患者認知功能障礙的發(fā)病率及相關(guān)危險因素；第二，探討不同部位和不同程度腦白質(zhì)病變（WML）對患者認知功能障礙的影響。方法方法前瞻性選取河南科技大學第一附屬醫(yī)院腦白質(zhì)病變患者75例，同時選取正常對照組30例。收集患者的人口學資料和血管危險因素，并應用蒙特利爾認知評估量表（MOCA）進行認知功能評定。首先，將WML患者分為認知障功能礙組和認知功能正常對照組，兩組對比研究，探討WML患者認知障礙的可能危險因素；其次病例組根據(jù)頭顱MRIT2加權(quán)像及FLAIR像，分為腦室旁病變和深部白質(zhì)病變亞組，再根據(jù)病變嚴重程度進行分級，分別與正常對照組比較，探討不同程度與不同部位腦白質(zhì)病變對認知影響的不同。結(jié)果結(jié)果通過MOCA測試，75例WML患者中44例587％出現(xiàn)了不同程度的認知功能障礙。LOGISTIC回歸分析顯示W(wǎng)ML患者發(fā)生認知功能障礙與高血壓（4050，95CI130912526）、糖尿?。?820，95CI110313231）和年齡（1133，95CI10231255）有關(guān)。與對照組比較，不同程度WML病例亞組MOCA量表總分、視空間與執(zhí)行功能、語言、延遲回憶和定向力均降低（P005）。結(jié)論結(jié)論1、WML患者常可出現(xiàn)認知功能障礙，高血壓、糖尿病和老齡與認知功能障礙的發(fā)生關(guān)系密切。2、WML患者視空間、執(zhí)行功能、語言、抽象、延遲回憶和定向力等多個認知功能領(lǐng)域受損明顯；隨著病變程度的加重，認知功能領(lǐng)域受損的范圍越大。3、腦室旁和深部WML都可引起認知功能下降，但對

簡介：目的觀察完全弗氏佐劑CFA導致的慢性炎性痛大鼠的認知功能改變和所出現(xiàn)的負性情緒（抑郁和焦慮），使用加巴噴丁鎮(zhèn)痛能否使慢性炎性痛大鼠的認知功能得到恢復，焦慮和抑郁得到改善。方法健康成年雄性大鼠32只，隨機分成4組，正常組，CFA組，CFA加巴噴丁組，加巴噴丁組，每組8只。CFA組和CFA加巴噴丁組大鼠左后足底注射CFA100UL，從第15天開始到第28天，CFA加巴噴丁組和加巴噴丁組大鼠加巴噴丁灌胃（50MGKG，每天兩次，上午8點和晚上8點）。電子測痛儀觀察縮足閾值的改變，高架十字迷宮實驗觀察焦慮，曠場試驗觀察認知功能和抑郁，強迫游泳實驗觀察抑郁。結(jié)果1加巴噴丁能使大鼠縮足閾值明顯增高P＜005。2焦慮情緒的行為學結(jié)果14天和28天的時候CFA大鼠開放臂的時間百分比明顯低于正常組P＜005，產(chǎn)生了焦慮情緒第28天，CFA加巴噴丁組大鼠開放臂的時間百分比要高于CFA大鼠P＜005，焦慮情緒有所改善。3認知能力的行為學結(jié)果14天和28天的時候CFA大鼠中央格停留時間延長，認知功能下降。第28天，CFA加巴噴丁組大鼠在中央格的停留時間要低于CFA大鼠P＜005，認知功能有所恢復。4抑郁情緒的行為學結(jié)果第28天的時候CFA大鼠不動時間延長P＜005，產(chǎn)生了抑郁情緒，CFA加巴噴丁組大鼠不動時間要短P＜005，抑郁程度更輕。結(jié)論慢性炎性痛大鼠會出現(xiàn)認知功能下降，產(chǎn)生焦慮和抑郁。加巴噴丁鎮(zhèn)痛效果確切，可以使認知功能得到恢復，也能改善慢性炎性痛導致的焦慮和抑郁。

簡介：目的探討慢性乙型肝炎（CHB）患者應用阿德福韋酯抗病毒治療后不同時期，TH1型細胞分泌的細胞因子IFNΓ與TH2型細胞分泌的細胞因子IL4的動態(tài)變化。方法用阿德福韋酯堅持治療1年的慢性乙型肝炎患者29例，分完全應答組17例、部分應答組12例，10例做健康對照組。采集治療前后不同時期的血清，檢測ALT與HBVDNA；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測TH1型細胞分泌的細胞因子IFNΓ及TH2型細胞分泌的細胞因子IL4進行比較。結(jié)果隨著抗病毒治療用藥時間的延長，IFNΓ水平在完全應答組有不同程度的升高；用藥6個月（M6）、12個月（M12）時IFNΓ水平較治療前相比，有統(tǒng)計學顯著差異（P005）。血清HBVDNA陰轉(zhuǎn)率顯著高于部分應答組且有統(tǒng)計學顯差異（P結(jié)論阿德福韋治療可促進機體分泌更多的TH1型細胞因子，以促進機體的抗HBV免疫功能的恢復和增強，不僅有抗病毒作用，而且還具有免疫調(diào)節(jié)作用。

簡介：呼吸道合胞病毒（RESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV）是嚴重危害嬰幼兒健康的最常見呼吸道感染病原體。我國RSV發(fā)病的高峰季節(jié)主要是冬春季，首次感染多發(fā)生在1歲以內(nèi)的嬰幼兒，尤其是26個月的嬰幼兒，感染后常引起嬰幼兒細支氣管炎和支氣管肺炎等下呼吸道疾病，多表現(xiàn)為咳嗽、憋喘、高熱，甚至呼吸困難、心力衰竭導致死亡，給人類健康和生命安全造成了嚴重威脅，由此，WHO提出RSV的防治成為全球首要任務(wù)之一。到目前為止，還沒有安全有效的疫苗批準上市，而其發(fā)病機制尚不清楚，缺乏快速靈敏的檢測方法，沒有模擬人體RSV感染的高致病性病毒株建立理想動物模型是造成這種現(xiàn)狀的主要原因。本論文基于RSV研究沒有高致病性臨床株及理想動物模型的現(xiàn)實問題，開展了呼吸道合胞病毒分離鑒定及其感染乳鼠模型的研究，以期為RSV疫苗與治療藥物的有效性評價及致病機制的研究奠定基礎(chǔ)。目的建立實時熒光定量PCR快速檢測RSV感染體系，利用HEP2細胞分離鑒定臨床RSV高致病性強毒株并建立動物模型，為藥物、疫苗的評價及致病機制的研究奠定基礎(chǔ)。方法利用RSVA2的F基因構(gòu)建RSVA2質(zhì)粒，建立實時熒光定量PCR快速檢測RSVA感染體系，并評價其敏感性、重復性及特異性。收集臨床呼吸道感染重癥患兒的鼻咽分泌物樣本進行實時熒光定量PCR快速檢測，進而采用流式CBA測定患兒血清中細胞因子的變化。陽性臨床樣本通過HEP2細胞分離培養(yǎng)，空斑純化，電鏡、RTPCR及WB鑒定，獲得RSV臨床分離株。測定RSV臨床分離株毒力，并感染14日齡C57乳鼠，通過觀察體質(zhì)量及死亡率的變化篩選RSV高致病性強毒株。采用RSV高致病性強毒株感染乳鼠，通過檢測乳鼠體質(zhì)量、死亡率，感染后1，3，5，7天肺組織的病毒載量、濕干比，病理、炎性細胞總量及血清中細胞因子的變化，建立RSV感染乳鼠模型。結(jié)果100份臨床呼吸道感染重癥患兒鼻咽分泌物樣本中，實時熒光定量PCR鑒定為RSVA亞型陽性共21例。流式CBA檢測陽性血清發(fā)現(xiàn)IL6、GCSF、GMCSF、MCP1、MIP1Α、MIP1Β均較正常血清有顯著性升高，而IFNΓ則顯著性降低。21例陽性臨床樣本經(jīng)病毒分離培養(yǎng)、空斑純化、電鏡、RTPCR及WB鑒定后得到16株RSV臨床分離株。通過測定16株RSV臨床分離株的毒力，并將其感染C57乳鼠，觀察乳鼠體質(zhì)量及死亡率變化，篩選出一株能致死14日齡C57乳鼠的RSV高致病性強毒株。經(jīng)全基因組測序后，構(gòu)建RSV進化樹顯示其為A型NA1基因型，命名為BJ016。將BJ016傳代培養(yǎng)，毒力呈逐漸升高趨勢，到第8代趨于穩(wěn)定達1085TCID50ML，將毒力穩(wěn)定后的BJ016感染乳鼠后，乳鼠體質(zhì)量下降，死亡率達到60％，感染后第5，7日乳鼠肺組織病毒載量、濕干比及炎性細胞總數(shù)均較對照組具有明顯統(tǒng)計學差異，肺組織病理在第3日出現(xiàn)病變，第5日最嚴重。感染后乳鼠血清中IL6、IFNΓ、GCSF、GMCSF、MCP1、MIP1Α、MIP1Β水平變化與臨床患兒血清中細胞因子的變化一致。結(jié)論成功建立了實時熒光定量PCR快速檢測呼吸道合胞病毒感染體系，分離出一株能致死14日齡C57乳鼠的RSV高致病性強毒株并建立了其感染乳鼠模型，高度模擬了人類感染RSV的特點，為RSV疫苗、治療藥物的評價及RSV致病機制的研究奠定了良好的基礎(chǔ)。

簡介：點擊查看更多147例慢性乙型肝炎患者NAs治療中出現(xiàn)病毒學突破的臨床分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的構(gòu)建JEVC蛋白編碼基因的酵母雙雜交誘餌載體并檢測其蛋白表達產(chǎn)物對酵母細胞有無毒性及對酵母細胞內(nèi)報告基因有無自激活效應為篩選及驗證JEVC蛋白相互作用相關(guān)蛋白奠定實驗基礎(chǔ)。材料與方法一、實驗材料1、質(zhì)粒、載體、菌株、細胞質(zhì)粒PMDJC由本實驗室構(gòu)建保存所選表達載體PMD19TSIMPLE購自TAKARA公司大腸桿菌感受態(tài)細胞ECOLICOMPETENTCELLSJM109購自TAKARA公司用于重組質(zhì)粒構(gòu)建、轉(zhuǎn)化酵母菌Y2HGOLD及載體PGBKT7、PGADT7、PGADT7T、PGBKT753、PGBKT7LAM購自CLONTECH公司用于酵母雙雜交實驗。2、主要試劑PCR用DNA聚合酶CODENODR010S、質(zhì)粒小劑量提取試劑盒CODENODV801A、瓊脂糖凝膠DNA純化試劑盒CODENODV805A、酶促反應DNA片斷純化試劑盒CODENODV807A、DNAT4連接酶CODENODR6023、限制性內(nèi)切酶ECIBAMHI等均購自TAKARA公司用于重組質(zhì)粒構(gòu)建與鑒定氨芐青霉素、卡那霉素購自SIGMA公司瓊脂糖購自TAKARA公司用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及電泳分析酵母培養(yǎng)基、各種氨基酸缺陷培養(yǎng)基、XΑGAL、金擔子素、50聚乙二醇3350、10X醋酸鋰等購自CLONTECH公司用于酵母菌Y2HGOLD感受態(tài)細胞的制備、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞及酵母氨基酸缺陷篩選酵母總蛋白提取試劑盒CODENOD6023購自TAKARA公司SDSPAGE上樣緩沖液、預染蛋白MARKER、PVDF膜購自碧云天公司一抗BDMAB購自CLONTCCH公司辣根過氧化物酶標記羊抗鼠IGG購自SANTA公司GAPDH內(nèi)參抗體購自EARTHOX公司用于WESTERNBLOTTING分析。二、實驗方法1、誘餌質(zhì)粒PGBKT7JC構(gòu)建、轉(zhuǎn)化及鑒定。2、PEGLIAC法將質(zhì)粒PGBKT7JC與載體PGBKT7分別轉(zhuǎn)化酵母菌株Y2HGOLD感受態(tài)細胞。3、經(jīng)酵母氨基酸缺陷培養(yǎng)及表現(xiàn)型篩選檢測誘餌蛋白對酵母細胞毒性。4、經(jīng)酵母氨基酸缺陷培養(yǎng)及表現(xiàn)型篩選檢測誘餌蛋白酵母細胞內(nèi)報告基因自激活效應。5、WESTERNBLOTTING法檢測誘餌蛋白BDJC的表達。實驗結(jié)果1、誘餌質(zhì)粒PGBKT7JC構(gòu)建及鑒定重組質(zhì)粒PGBKT7JC經(jīng)ECIBAMHI酶切后電泳分析得到381BP與73KB大小的兩個片段與預期一致測序分析JEVC蛋白編碼基因與發(fā)表的序列完全相符構(gòu)建成功的誘餌質(zhì)粒命名為PGBKT7JC。2、質(zhì)粒PGBKT7JC與載體PGBKT7分別轉(zhuǎn)化酵母菌株Y2HGOLD感受態(tài)細胞PEGLIAC法將已鑒定正確的PGBKT7JC與空載體PGBKT7分別轉(zhuǎn)化酵母菌Y2HGOLD感受態(tài)細胞涂布于SDTRP進行菌落篩選30℃溫箱孵育3～5天后兩組缺陷培養(yǎng)基上均可見大小均勻陽性菌落生長。3、誘餌蛋白毒性檢測觀察發(fā)現(xiàn)SDTRP氨基酸缺陷培養(yǎng)基上已轉(zhuǎn)化PGBKT7JC與PGBKT7的酵母菌落數(shù)、菌落大小、分布無明顯差異將轉(zhuǎn)化有PGBKT7JC與PGBKT7酵母菌落接種于SDTRP液體培養(yǎng)基中振蕩過夜測得OD600值分別為08643和08706均＞08。4、誘餌蛋白自激活檢測已轉(zhuǎn)化PGBKT7JC的酵母菌在SDTRPXΑGAL缺陷培養(yǎng)基上可見陽性菌落生長但菌落顏色未變藍而已轉(zhuǎn)化PGBKT7JC的酵母菌在SDTRPXΑGALABA缺陷培養(yǎng)基上未見菌落生長。5、WESTERNBLOTTING法檢測誘餌蛋白BDJC的表達WESTERNBLOTTING法分析PGBKT7蛋白樣品約在22KDA處出現(xiàn)目的條帶PGBKT7JC蛋白樣品約在35KDA處可見目的條帶。結(jié)論1、成功構(gòu)建的酵母雙雜交誘餌表達質(zhì)粒PGBKT7JC含有JEVC蛋白編碼基因。2、誘餌質(zhì)粒PGBKT7JC成功轉(zhuǎn)化入酵母菌株Y2HGOLD感受態(tài)細胞且其表達的誘餌蛋白BDJC對酵母細胞無細胞毒性及自激活效應。

簡介：背景乙型肝炎病毒引起的慢性乙型肝炎是一種重大的傳染性疾病。乙型肝炎主要流行于中國及其它一些亞洲國家，目前約有十分之一的中國人口是乙型肝炎病毒攜帶者。慢性乙型肝炎可以導致肝硬化及肝癌的發(fā)生，并且目前沒有藥物可以完全根治，治療種類少且療效有限。因此，尋找一種有效的治療乙型肝炎的方法迫在眉睫。RNA干擾RNAINTERFERING是指一些小的雙鏈RNADSRNA可高效、特異的促使MRNA降解，阻斷相應基因表達。應用RNAI治療乙型肝炎是一種有效的治療策略，能夠突破普通藥物治療療效的局限性，克服易產(chǎn)生逃逸突變株使病情更加惡化等缺點。但化學合成的SIRNA成本高、不穩(wěn)定、體內(nèi)傳輸困難，進入細胞后易被降解，因此，需要研發(fā)一種新的傳輸方式，病毒載體為我們提供了一個契機。腺相關(guān)病毒AAVADENOASSOCIATEDVIRUS屬于人類細小病毒科PARVOVIRIDAE。自建立第一個AAV的感染性克隆以來，重組AAV載體被廣泛應用到基因治療研究及臨床前臨床實驗中，嘗試治療多種疾病。AAV具有無致病性、低免疫原性、能轉(zhuǎn)導分裂和非分裂的細胞、可介導外源基因長期表達等優(yōu)點。因此，本課題選擇腺相關(guān)病毒作為短發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNASHRNA傳遞的載體，進行抗乙型肝炎病毒的研究。乙型肝炎病毒宿主范圍窄，且沒有適合的動物模型進行抗病毒藥物的評估，嚴重制約了抗乙型肝炎病毒藥物的研發(fā)。因此研發(fā)一種新型的乙型肝炎病毒持續(xù)性感染小鼠模型對研究慢性乙型肝炎的致病機制及新型抗病毒藥物的篩查和評估具有重要意義。目的1、構(gòu)建乙型肝炎病毒持續(xù)性感染小鼠模型。2、構(gòu)建一系列AAV2SHRNA表達載體，體外驗證各AAV2SHRNA的抗病毒效果。3、在乙型肝炎病毒持續(xù)性感染小鼠模型上評估AAV2SHRNA的抗病毒效果。方法1、將可復制性的12拷貝的HBV克隆到去除REP和CAP基因的腺相關(guān)病毒質(zhì)粒表達載體PSSV9（REPCAP）中，構(gòu)建出質(zhì)粒表達載體PSSV912HBV，并利用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染技術(shù)制備成重組病毒AAV812HBV。將AAV812HBV尾靜脈注射C57BL6小鼠，定期采血、取組織樣本通過QPCR、RTQPCR、ELISA、免疫組織化學染色、MASSON染色等方法檢測血清中HBVDNA變化、肝組織中HBVCDNA變化、血清中抗原分泌情況、肝細胞內(nèi)抗原表達情況、病理變化及模型小鼠肝組織纖維化指標的變化等。2、制備一系列SHRNA質(zhì)粒表達載體PSCH1SHRNA和串聯(lián)形式的SHRNA質(zhì)粒表達載體PSCH1SHRNAMULTIPLE，利用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染技術(shù)包裝成AAV2SHRNA重組病毒。用AAV2SHRNA重組病毒感染HEPG2215細胞系，定期收獲培養(yǎng)上清液和培養(yǎng)細胞，通過QPCR、RTQPCR和ELISA等方法從DNA水平，RNA水平和蛋白水平評估各AAV2SHRNA抗病毒效果。3、將體外篩選出的抗病毒效果顯著的AAV2SHRNA病毒尾靜脈注射乙型肝炎病毒持續(xù)性感染小鼠模型，定期采血、取組織樣本通過測量與方法1中相同的各項指標，評估AAV2SHRNA體內(nèi)抗HBV的效果。結(jié)果1、模型小鼠血清中可持續(xù)檢測到高滴度的HBVDNA107COPYML超過6個月模型小鼠血清和肝細胞中分別可檢測到HBSAG、HBEAG的分泌與HBSAG、HBCAG的表達。病理切片及纖維化指標定量檢測顯示，小鼠肝組織沒有明顯的急性炎癥反應，但是能誘導肝組織脂肪變性和纖維化。2、所有的AAV2SHRNA體外均有抑制HBV的能力，抗病毒效果呈劑量依賴關(guān)系，但是感染劑量超過MOI104時，抗HBV效果未有顯著增加。相同感染劑量下，AAV2SHRNA13對HBV的抑制率要顯著大于AAV2SHRNA1和AAV2SHRNA134。3、體內(nèi)驗證AAV2SHRNA1，AAV2SHRNA13抗HBV效果，各項結(jié)果顯示AAV2SHRNA13具有更強的抗病毒能力，與體外結(jié)果相符。檢測纖維化相關(guān)指標顯示，AAV2SHRNA13進行抗HBV治療可以改善肝組織脂肪變性和肝組織纖維化的程度。結(jié)論1、成功構(gòu)建了乙型肝炎病毒持續(xù)性感染小鼠模型，此模型不產(chǎn)生明顯的急性炎癥反應，但是能誘導小鼠肝組織纖維化，為慢性乙型肝炎和肝硬化治療藥物的篩選和評估提供了一個良好的平臺。2、體外篩選出的AAV2SHRNA13，具有顯著的抗HBV復制的作用。3、AAV2SHRNA13在HBV持續(xù)性感染小鼠模型上具有顯著的抗病毒作用，能夠改善肝臟組織的脂肪變性和纖維化程度，是非常有前景的慢性乙型肝炎和肝硬化治療的候選藥物。

簡介：水痘是一種急性、高傳染性的兒童常見呼吸道傳播疾病由水痘帶狀皰疹病毒VARICELLAZOSTERVIRUSVZV引起。同時VZV也是導致帶狀皰疹HZ的病原體具有嚴重的危害性。現(xiàn)今使用的VZV減毒活疫苗株VOKA是唯一獲WHO批準使用的水痘帶狀皰疹疫苗株然而有研究顯示VOKA為混合毒株且仍具備感染和潛伏神經(jīng)系統(tǒng)的能力可能存在較復雜的安全性隱患。因此迫切需要發(fā)展新型的可消除長期隱患的水痘疫苗株而VZV關(guān)鍵毒力因子的發(fā)現(xiàn)和驗證是開展該研究的核心基礎(chǔ)。本研究在前期發(fā)現(xiàn)VZVF7抗原缺失可影響病毒在體外人皮膚中感染的工作基礎(chǔ)上通過建立包括人皮膚、胸腺、背根神經(jīng)節(jié)移植人鼠嵌合模型在內(nèi)的VZV體內(nèi)外感染模型全面系統(tǒng)評價了F7抗原對VZV毒力的影響為VZV新型減毒株的建立提供重要依據(jù)。本研究引進建立了基于VZVOKA株的細菌人工染色體BAC系統(tǒng)DY380重組系統(tǒng)應用該系統(tǒng)構(gòu)建了F7全基因敲除的重組VZV毒株ROKA△7及其F7基因再次恢復毒株ROKA△7R。體外細胞感染實驗顯示上述毒株均可在MEWO細胞和ARPE19細胞中進行培養(yǎng)。由于目前尚無針對VZVF7抗原的檢測抗體本研究表達并純化了F7抗原免疫小鼠后篩選獲得了11株可特異結(jié)合F7抗原的單克隆抗體以及1株兔多抗。同時應用連續(xù)步移的合成肽鑒定獲得了上述單克隆抗體的表位。評價實驗結(jié)果顯示其中3G11和8H3單抗可很好地應用于F7抗原的WESTERNBLOTTING、免疫熒光檢測。同時本研究應用F7單抗在免疫熒光檢測中進一步證明了ROKA△7中F7抗原的成功敲除。人鼠嵌合小鼠模型是通過在免疫缺陷小鼠上實現(xiàn)人類組織的移植生長在建立包括VZV在內(nèi)的重要人類病毒的體內(nèi)感染模型上具有顯著的優(yōu)勢和應用價值其在模擬真實性、實現(xiàn)長期復制感染上具有突出的綜合優(yōu)勢。本研究即分別建立了人皮膚、胸腺、背根神經(jīng)節(jié)DRG移植人鼠嵌合模型并應用小鼠活體成像技術(shù)成功建立了可連續(xù)追蹤VZV感染水平的VZV體內(nèi)感染模型。應用建立的人鼠嵌合小鼠感染模型研究發(fā)現(xiàn)相比對照組野生型病毒ROKA△7不能在人皮膚中進行感染和復制不會產(chǎn)生皮膚組織病變同時ROKA△7也不能在人背根神經(jīng)節(jié)DRG中進行復制不產(chǎn)生神經(jīng)組織病變原位雜交檢測不能檢測到ROKA△7的病毒核酸同時其也不能感染體外培養(yǎng)的DRG和誘導神經(jīng)組織細胞。上述研究證明了F7是一個新型的VZV皮膚和神經(jīng)感染趨向性因子F7敲除可導致VZV同時在皮膚和神經(jīng)組織中的減毒。同時本研究應用人胸腺組織移植人鼠嵌合模型研究發(fā)現(xiàn)ROKA△7與未敲除對照病毒均可在人胸腺組織中復制。對分離的人樹突狀淋巴細胞DC的感染實驗顯示ROKA△7與對照病毒均可感染人DC細胞。這說明VZV在人T細胞中的感染和復制不依賴于F7抗原。由于人淋巴組織的感染是人體對VZV減毒疫苗產(chǎn)生免疫反應的重要組織ROKA△7可感染人T細胞有利于VZV作為免疫原被包括人DC細胞在內(nèi)的淋巴細胞識別及呈遞。上述研究顯示了ROKA△7有望成為一種新型皮膚神經(jīng)減毒候選疫苗。本研究也初步探索了F7的可能作用機制。免疫檢測顯示F7主要存在于VZV感染后細胞的高爾基體TGN也存在于VZV病毒粒子中。同時研究顯示F7敲除會在ARPE19細胞中影響VZV感染導致的合胞體形成這表明合胞體的形成可能不僅需要病毒糖蛋白也需要F7。綜上所述本研究通過建立并應用包括人皮膚、胸腺、背根神經(jīng)節(jié)移植人鼠嵌合模型在內(nèi)的VZV體內(nèi)外感染模型全面評價了F7抗原對VZV毒力的影響證明了F7是一個新型的VZV皮膚和神經(jīng)感染趨向性因子F7敲除的ROKA△7有望成為一種新型皮膚神經(jīng)減毒候選疫苗并初步探索了F7的可能作用機制為F7功能的深入研究和VZV新型減毒株的建立提供重要基礎(chǔ)。

簡介：目的通過采用橫斷面調(diào)查方法了解社區(qū)老年腦卒中高危人群抑郁狀態(tài)及農(nóng)村腦卒中高危人群認知障礙的發(fā)生狀況，檢測不同同型半胱氨酸水平認知障礙患者血清白介素8的水平，比較采用MMSE量表和MOCA量表兩種認知評定方法對農(nóng)村腦卒中高危人群認知篩查的差異，探討其危險因素及對抑郁、認知障礙發(fā)生的影響及炎性機制，尋找農(nóng)村認知功能評估的敏感工具，為臨床前抑郁、認知障礙的早期識別診斷提供可靠數(shù)據(jù)。方法研究分兩部分第一部分，采用分層隨機整群抽樣的方法于2012年12月～2013年1月對天津市河西區(qū)4個社區(qū)內(nèi)年齡≥45歲的本市戶籍居民進行腦卒中高危人群的橫斷面篩查，選擇年齡≥60歲且信息完整者469例，男222例，女247例，年齡60～926786±509歲，應用漢密爾頓抑郁量表HAMD對其抑郁狀態(tài)進行評估。第二部分，采用分層隨機整群抽樣的方法于2013年12月09日～20日對天津市北辰區(qū)小淀鎮(zhèn)的腦卒中高危人群492例進行凋查，登記人口基本情況、篩查腦卒中危險因素，應用簡易智力狀況檢查法MMSE和蒙特利爾認知評估北京版MOCA分別對其認知狀況進行評估，并根據(jù)空腹HCY的水平將認知障礙者分為三組正常組5～15ΜMOLL，輕度增高組16～30ΜMOLL，中度增高組31～100ΜMOLL，選取性別、年齡、教育程度、腦卒中危險因素基本匹配者，用雙抗體夾心ELISA方法分別檢測同型半胱氨酸正常組、輕度增高組和中度增高組血清IL8的濃度和MOCA得分，并比較3組之間的差異，分析高同型半胱氨酸血癥患者的認知功能與血清中IL8的相關(guān)性。結(jié)果第一部分1輕度抑郁HAMD評分為（1082±259）分，中度抑郁為1944±204分，重度抑郁2850±242分。不同輕、中、重度抑郁HAMD評分比較差異有統(tǒng)計學意義P＜005。2469例天津市社區(qū)老年腦卒中高危人群中，合并抑郁狀態(tài)者146人，發(fā)生率為311％。其中輕度抑郁者124人2644％，中度抑郁者18人384％，重度抑郁者4人085％。3社區(qū)老年腦卒中高危人群抑郁組與非抑郁組一般人口資料比較，抑郁組女性、單身及既往有抑郁病史者所占比例高于非抑郁組，且差異有統(tǒng)計學意義P＜005兩組間年齡、認知功能、文化程度、民族、抑郁家族史、既往職業(yè)構(gòu)成差異無統(tǒng)計學意義P＞005。4社區(qū)老年腦卒中高危人群抑郁組與非抑郁組血管性危險因素比較，抑郁組心臟病患者、缺乏體育鍛煉或體力勞動者及有腦卒中家族史者所占比例高于非抑郁組，且差異有統(tǒng)計學意義P＜005兩組間吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、高脂血癥、既往腦卒中史、高同型半胱氨酸血癥、體質(zhì)量指數(shù)BMI等構(gòu)成差異無統(tǒng)計學意義P＞005。5以是否發(fā)生抑郁為因變量，以年齡、認知功能、性別、文化程度、婚姻狀況、民族、抑郁病史、抑郁家族史、既往職業(yè)、吸煙、飲酒、心臟病、糖尿病、高血壓、高脂血癥、腦卒中史、缺乏體育鍛煉或體力勞動、高同型半胱氨酸血癥、BMI、腦卒中家族史為自變量，采用多因素非條件LOGISTIC回歸分析，性別、婚姻狀況、心臟病、腦卒中家族史進入了LOGISTIC回歸模型，值分別為2542、4272、2734、1583P＜005。其余因素均未進入回歸方程。第二部分1采用MMSE量表對492例農(nóng)村腦卒中高危人群進行認知評估共有80人認知障礙，認知障礙的發(fā)生率為1626％MMSE各認知領(lǐng)域中，除命名能力外，認知障礙組定向、即刻記憶、注意力和計算力、回憶、重復、閱讀、指令、表達、繪圖領(lǐng)域得分均較非認知障礙組低且差異具有統(tǒng)計學意義P＜005根據(jù)MMSE量表評定的認知正常組和認知障礙組間年齡、文化程度、腦卒中史構(gòu)成差異具有統(tǒng)計學意義P＜005，而2組間性別、TC、TG、HDL、LDL、GLU、HCY、身高、體重、BMI、高血壓、高脂血癥、糖尿病、心臟病、運動、吃蔬菜、水果、喝奶、吸煙、喝酒等因素所占比例均無明顯統(tǒng)計學差異P＞005以MMSE量表評定有無認知障礙為因變量，以年齡、性別、文化程度、TC、TG、HDL、LDL、GLU、HCY、身高、體重、BMI、腦卒中史、高血壓、高脂血癥、糖尿病、心臟病、運動習慣、蔬菜攝入量、水果攝入量、喝奶、吸煙、飲酒等因素為自變量，采用多因素非條件LOGISTIC回歸分析，腦卒中史進入了LOGISTIC回歸模型，值為2173P＜005，其余因素均未進入回歸方程。2采用MOCA量表對492例農(nóng)村腦卒中高危人群進行認知評估共有403人認知障礙，其中男180人，女223，認知障礙的發(fā)生率為8191％認知障礙者MOCA各認知領(lǐng)域水平均有下降，且與認知正常者相比差異具有統(tǒng)計學意義根據(jù)MOCA量表評定的認知正常組和認知障礙組比較，2組間年齡、受教育年數(shù)、腦卒中史、高脂血癥及吸煙史所占比例差異具有統(tǒng)計學意義P＜005，而性別、TC、TG、HDL、LDL、GLU、HCY、身高、體重、BMI、高血壓、糖尿病、心臟病、運動、吃蔬菜、水果、喝奶、喝酒所占比例均無明顯統(tǒng)計學差異P＜005以MOCA量表評定有無認知障礙為因變量，以年齡、性別、受教育年數(shù)、TC、TG、HDL、LDL、GLU、HCY、身高、體重、BMI、腦卒中史、高血壓、高脂血癥、糖尿病、心臟病、運動習慣、蔬菜攝入量、水果攝入量、喝奶、吸煙、飲酒等因素為自變量，采用多因素非條件LOGISTIC回歸分析，年齡、受教育年數(shù)和腦卒中史進入了LOGISTIC回歸模型，值分別為1041，1243和2579P＜005，其余因素均未進入回歸方程。3農(nóng)村腦卒中高危人群492例分別采用MMSE和MOCA量表評估認知狀況，PEARSON相關(guān)分析顯示兩者得分存在著顯著的正相關(guān)關(guān)系R0828，P＜001，但兩者的一致性較差KAPPA0082，P0000。采用MOCA量表評估認知障礙的陽性率8191％高于采用MMSE量表評估認知障礙的陽性率1626％。4農(nóng)村腦卒中高危人群認知障礙者中，隨著血清HCY濃度增高，血清IL8水平逐漸增高而認知得分逐漸降低，但HCY正常組、輕度增高組和中度增高組3間血清IL8濃度和認知水平差異并無統(tǒng)計學意義P＞005。結(jié)論1應用HAMD量表對469例天津市社區(qū)老年腦卒中高危人群篩查所得抑郁發(fā)生率為311％，以輕度抑郁多見，中重度抑郁少見。2社區(qū)老年腦卒中高危人群中女性、單身、既往有抑郁病史及有心臟病、缺乏體育鍛煉或體力勞動、有腦卒中家族史者更易發(fā)生抑郁。3女性、單身、有心臟病史及有腦卒中家族史是社區(qū)老年腦卒中高危人群發(fā)生抑郁的獨立危險因素。5社區(qū)老年腦卒中高危人群是抑郁易患人群，提示應早期對其行抑郁量表篩查以早期診斷、早期干預抑郁狀態(tài)，并對抑郁防治具有重要意義。6采用MMSE量表對492例農(nóng)村腦卒中高危人群進行認知評估認知障礙的發(fā)生率為1626％認知障礙患者存在多個認知領(lǐng)域受損，但命名能力尚未受累農(nóng)村腦卒中高危人群中年老、文化程度低、有腦卒中史者易患認知障礙既往有腦卒中史是農(nóng)村腦卒中高危人群患癡呆的獨立危險因素。7采用MOCA量表對492例農(nóng)村腦卒中高危人群進行認知評估認知障礙的發(fā)生率為8191％認知障礙各認知領(lǐng)域水平均有下降農(nóng)村腦卒中高危人群中年老、受教育水平低、有腦卒中史及吸煙者易患認知障礙年老、受教育水平低和既往有腦卒中史時農(nóng)村腦卒中高危人群發(fā)生認知障礙的獨立危險因素。8應用MMSE和MOCA量表對農(nóng)村腦卒中高危人群認知評估，兩者得分存在著顯著的正相關(guān)關(guān)系，但MOCA對農(nóng)村腦卒中高危人群認知障礙篩查更敏感，9天津市農(nóng)村腦卒中高危人群是認知障礙的易患人群，且輕度認知障礙者所占比例大，應早期對其進行認知功能評估并對認知障礙者早期干預以改善其認知狀況或延緩其認知水平的下降。10血清HCY可能參與了認知損傷的炎性反應機制，但對認知水平的影響程度有待于進一步研究。

簡介：目的醫(yī)療保險制度改革已經(jīng)日益觸及人們的生活，成為社會生活中的一個熱點和焦點問題1。進一步了解基本醫(yī)療保險政策落實狀況，參保人尤其是住院病人對醫(yī)保政策的認知、態(tài)度、行為及滿意度，為進一步完善基本醫(yī)療保險制度提供思路及對策。方法采用整群隨機抽樣的方法對住院四類醫(yī)保病人應用自制調(diào)查問卷進行匿名調(diào)查。所有資料均采用SPSS180進行數(shù)據(jù)分析，統(tǒng)計方法包括描述性統(tǒng)計分析、卡方檢驗、確切概率法、K中心聚類分析、單因素分析，非條件LOGISTIC回歸分析。結(jié)果本研究共發(fā)放1020份問卷，有效回收1020份，問卷回收率100％，通過整理校對問卷后，有效問卷1003份，總有效應答率為98％。住院病人的醫(yī)保認知、態(tài)度、行為經(jīng)加權(quán)合計得分為5625±1234。對醫(yī)保KAP影響因素分析結(jié)果顯示職業(yè)、學歷、婚姻狀況、月收入、家庭人均收入、自評身體狀況、每年支付的醫(yī)療費、生病時選擇看病的機構(gòu)、繳納醫(yī)療保險費的方式、參保途徑、醫(yī)保類型、一年的住院次數(shù)、一年的報銷次數(shù)是影響醫(yī)保KAP得分的因素。通過多因素LOGISTIC回歸分析，職業(yè)、婚姻狀況、月收入、家庭人均收入、自評身體狀況、每年支付的醫(yī)療費、生病時選擇看病的機構(gòu)、繳納醫(yī)療保險費的方式、醫(yī)保類型是影響醫(yī)保KAP得分的因素對醫(yī)保滿意度得分情況分析醫(yī)保滿意度總分X±S3645±12584，住院病人對醫(yī)保滿意率為664％。對醫(yī)保滿意度影響因素分析結(jié)果顯示職業(yè)、學歷、婚姻、家庭地址、月收入、家庭人均收入、自評身體狀況、每年支付的醫(yī)療費、生病選擇看病的機構(gòu)、繳納醫(yī)療保險費的方式、參保途徑、醫(yī)保類型、一年的住院次數(shù)、一年的報銷次數(shù)是影響因素通過多因素LOGISTIC回歸分析得出職業(yè)、婚姻狀況、家庭人均收入、每年支付的醫(yī)療費、生病選擇看病的機構(gòu)、繳納醫(yī)療保險費的方式、醫(yī)保類型是影響滿意度的因素。結(jié)論通過對住院病人醫(yī)保的認知、態(tài)度、行為及滿意度的調(diào)查，結(jié)果顯示四類醫(yī)保住院病人對醫(yī)保認知程度不高，對醫(yī)保的滿意度也不高。各級政府、醫(yī)保經(jīng)辦機構(gòu)、醫(yī)療機構(gòu)應加強對醫(yī)保政策合理適行的宣傳及指導，完善醫(yī)療保險模式，滿足參保人的基本衛(wèi)生需求。