簡介：當(dāng)機體受到病毒感染時，免疫細(xì)胞將通過模式識別受體識別病毒成分并活化下游的信號通路，從而表達(dá)Ⅰ型干擾素INTERFERON，IFN和促炎癥細(xì)胞因子。其中，Ⅰ型干擾素在激發(fā)抗病毒免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用，并且其表達(dá)受機體精確調(diào)控，而病毒本身也能干預(yù)抗病毒信號通路，實現(xiàn)其對機體抗病毒天然免疫的逃逸進(jìn)而增強自身的復(fù)制。病毒干預(yù)和逃逸機體抗病毒天然免疫應(yīng)答的機制是天然免疫研究的重大科學(xué)問題。此外，MIRNA在天然免疫應(yīng)答的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用，病毒在MIRNA層面與機體的相互作用和機制目前受廣泛關(guān)注。據(jù)此，本研究擬通過探求在病毒感染過程中胞內(nèi)表達(dá)改變的MIRNA并進(jìn)一步研究其作用機制，以尋求病毒通過調(diào)控機體MIRNA的表達(dá)進(jìn)而干預(yù)抗病毒天然免疫應(yīng)答和實現(xiàn)免疫逃逸的分子機制。我們先期通過高通量MIRNA芯片篩選，發(fā)現(xiàn)在RNA病毒VSV感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的過程中，MIR27A的表達(dá)顯著降低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，MIR27A的表達(dá)受到IFNJAKSTAT1信號通路的調(diào)控，并且依賴于RUNX1蛋白。MIR27A的表達(dá)下調(diào)將顯著抑制病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生進(jìn)而增強病毒自身的復(fù)制。在分子機制研究中，通過小鼠全基因組表達(dá)譜芯片發(fā)現(xiàn)，MIR27A能夠靶向作用于唾液酸凝集素受體SIGLEC1和TRIM家族的E3泛素化連接酶TRIM27，過表達(dá)MIR27A后能在MRNA和蛋白水平上降低SIGLEC1和TRIM27的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SIGLEC1能與DAP12相互作用，進(jìn)而活化酪氨酸磷酸酶SHP2，活化的SHP2能招募E3泛素化連接酶TRIM27后作用于TBK1，使TBK1上251位和372位的賴氨酸殘基發(fā)生K48位連接的泛素化修飾進(jìn)而促進(jìn)其在蛋白酶體中降解，最終導(dǎo)致負(fù)向調(diào)控Ⅰ型干擾素的表達(dá)。我們構(gòu)建了MIR27ASPONGE的轉(zhuǎn)基因小鼠，在體內(nèi)進(jìn)一步驗證MIR27A的功能，當(dāng)腹腔注射VSV后，與對照組相比，MIR27ASPONGE小鼠血清中的IFNΒ的表達(dá)量顯著降低，HE染色發(fā)現(xiàn)，小鼠肺臟中炎癥細(xì)胞浸潤更明顯，肝、脾、肺中VSV病毒的復(fù)制更強。由此，我們證明了病毒感染誘導(dǎo)表達(dá)下調(diào)的MIR27A能靶向增強負(fù)調(diào)控因子SIGLEC1和TRIM27的表達(dá)，促進(jìn)TBK1的降解，進(jìn)而反饋抑制Ⅰ型干擾素的表達(dá)和增強病毒自身的復(fù)制，即病毒利用MIR27A來實現(xiàn)自身的免疫逃逸，因此我們發(fā)現(xiàn)了一種病毒逃逸抗病毒天然免疫的新機制。

簡介：徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文黃芪甲甙對小鼠病毒性心肌炎TLR4、P38MAPK和MCP1表達(dá)的干預(yù)作用姓名王利利申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師路明201204徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文組FO05240013，0070014K匕較明顯上調(diào)P005，黃芪甲甙組小鼠心肌P38MAPK表達(dá)00630027，O08140011較心肌炎組明顯下調(diào)PO05；5、心肌炎組小鼠MCP11095044，126023水平較對照組013006，01501升高P005，黃芪甲甙組MCP一1O70030，0830377J平較心肌炎組下降PO05；6、心肌炎組小鼠一T5肌TLR4與P38MAPK的表達(dá)呈正相關(guān)10612，P005，N16，P38MAPK與MCPL的表達(dá)呈正相關(guān)RO592，P005，NL6。結(jié)論TLR4、P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及其下游分子MCP一1可能在VMC疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用；黃芪甲甙可能通過下調(diào)TLR4、P38MAPK、MCP一1的水平減輕CVB3感染小鼠的心肌損害，起到保護(hù)心肌作用。關(guān)鍵詞黃芪甲甙；VMC；單核細(xì)胞趨化蛋白一1；TOLL樣受體4；P38絲裂原活化蛋白激酶4

簡介：研究背景和目的丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV感染可導(dǎo)致慢性肝病、肝硬化、肝細(xì)胞癌等，是肝臟疾病的主要原因之一。WHO評估目前全球約有18億人口感染HCV（感染率3％）。我國人群抗HCV陽性率約為32％，全國約有4000萬人感染HCV。聚乙二醇化干擾素PEGYLATEDINTERFERON，PEGIFN聯(lián)合利巴韋林（RIBAVIRIN，RBV）治療是目前慢性丙型肝炎（CHRONICHEPATITISC，CHC或慢性丙肝）患者的標(biāo)準(zhǔn)方案。但此方案對HCV1B亞型的療效欠佳，持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答率SVR僅約為50％。在對HCV1B型基因序列的研究中，許多報道發(fā)現(xiàn)HCVNS5A蛋白多個區(qū)域的氨基酸AMINOACID，AA序列突變與IFN、IFNRBV的療效有關(guān)，這些區(qū)域包括ISDRAA22092248、PKRBDAA22092274、V3AA23562379、IRRDRAA23342379。ISDR1995年日本學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)HCV的非結(jié)構(gòu)蛋白5A區(qū)NS5AC端22092248位氨基酸突變數(shù)目可作為HCV1B型干擾素療效的獨立預(yù)測因素，干擾素應(yīng)答組患者的ISDR變異數(shù)目高于無應(yīng)答組病人。遂把HCVNS5A22092248氨基酸序列命名為干擾素敏感性決定區(qū)IFNSENSITIVITYDETERMININGREGION，ISDR。其重要的研究結(jié)論為HCV1B型患者ISDR區(qū)氨基酸序列與干擾素療效密切相關(guān)，與HCVJ相比，突變型（氨基酸變異≥4個）對干擾素敏感，中間型（氨基酸變異13個）和野生型（未變異）不敏感。此結(jié)論被日本的諸多后續(xù)研究證實，但是來自歐洲和美國的多項研究結(jié)果與這一結(jié)論存在矛盾之處。PKRBD1997、1998年GALE等通過體外實驗證實，HCV抵抗IFNA主要是通過NS5A和PKR蛋白的相互作用，PKR蛋白是主要的宿主抗病毒蛋白之一。這種相互作用需要ISDR以及其后的26個氨基酸殘基，該區(qū)域位于AA22092274，被稱為PKRBINDINGDOMAINPKRBD。HCV1B型PKRBD變異與IFNA或IFNAPEGIFNA聯(lián)合RBV的持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答明顯相關(guān)已有報道。V3和IRRDR近些時候，VEILLON和ELSHAMY等研究發(fā)現(xiàn)HCVNS5A的V3區(qū)AA23562379，以及V3加上其N端側(cè)翼區(qū)，被稱為INTERFERONRIBAVIRINRESISTANCEDETERMININGREGION（IRRDRAA23342379）存在高度變異現(xiàn)象，V3和IRRDR的氨基酸變異與IFNA和RBV治療的應(yīng)答有關(guān)。更有2009年BOUZGARROU等報道NS5A從ISDR至V3AA22092379的氨基酸變異能夠影響抗病毒治療的應(yīng)答。IFNA的經(jīng)典信號通路是通過JAKSTAT途徑。Ⅰ型IFN與相應(yīng)的受體結(jié)合，激活信號級聯(lián)反應(yīng)，從而調(diào)節(jié)一系列干擾素刺激基因ISGS的轉(zhuǎn)錄翻譯，而翻譯的一些蛋白因子具有抗病毒活性，如PKR、MXA、ISG15等。蛋白激酶PKR在RNA病毒基因復(fù)制時可與DSRNA結(jié)合而激活，激活后能夠磷酸化翻譯啟始因子EIF2A亞單位的51位絲氨酸殘基，使磷酸化的EIF2A無法參與蛋白多肽鏈的翻譯過程，從而抑制病毒或細(xì)胞蛋白的合成，達(dá)到抗病毒的效果。而GALE等通過體外實驗證明NS5A蛋白通過PKRBD，能夠結(jié)合IFNA誘導(dǎo)產(chǎn)生的PKR。HCVNS5A蛋白與宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶PKR的相互作用對細(xì)胞內(nèi)干擾素刺激基因ISGS的翻譯起著重要抑制作用。綜上所述，HCV1B型NS5A關(guān)鍵區(qū)域發(fā)生氨基酸突變的數(shù)目不同，則干擾NS5APKR蛋白相互作用的程度不同，進(jìn)而不同程度地影響干擾素發(fā)揮其療效。除過日本，來自亞洲其他國家和地區(qū)的相關(guān)研究報道極少，尤其是中國大陸的研究報道。所以，本研究的目的是首先確定是否治療前HCV1B亞型感染患者的NS5A的氨基酸變異與PEGIFN聯(lián)合RBV治療療效有關(guān)。分析聚焦于NS5A區(qū)的ISDR、PKRBD、IRRDR和V3四個功能區(qū)域。同時篩選NS5A關(guān)鍵區(qū)域變異數(shù)目不同的合適的臨床毒株構(gòu)建HCV重組REPLICON，建立HCV復(fù)制子細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，對HCVNS5A不同氨基酸變異數(shù)目與以IFN為基礎(chǔ)抗病毒治療應(yīng)答的機理進(jìn)行初步探討。第一部分HCV1B型NS5A全長基因的擴增和克隆構(gòu)建研究方法采用RTPCR技術(shù)從53例臨床丙型肝炎患者血標(biāo)本中擴增HCV1B型NS5A全長基因，測序分析，MEGA4軟件比對其與HCVJ株GENBANK注冊號D90208病毒NS5A蛋白PKRBD、ISDR、V3和IRRDR區(qū)的氨基酸突變數(shù)目和位點，了解廣東HCV1B亞型NS5A氨基酸突變情況。同時根據(jù)NS5A測序結(jié)果，挑選合適的NS5A基因片段與PMD18T載體連接，構(gòu)建PMD18NS5A克隆。統(tǒng)計分析軟件應(yīng)用SPSS170，統(tǒng)計描述采用頻數(shù)表示，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差X±S表示，組間比較采用兩獨立樣本T檢驗，進(jìn)行LEVENE方差齊性分析，方差齊同條件下采用T檢驗，方差不齊條件下采用SATTERTHWAITE近似T檢驗。P＜005有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1HCV1B亞型NS5A基因成功擴增，全長1477BP，PMD18NS5A克隆成功構(gòu)建。2廣東地區(qū)HCV1B亞型NS5A的ISDR區(qū)氨基酸突變率為736％3953，ISDR突變數(shù)目超過4個以上的僅占19％153，其余均為為野生型和中間型。PKRBD氨基酸殘基突變數(shù)目57±14，V3氨基酸殘基突變數(shù)目49±11，IRRDR氨基酸殘基突變數(shù)目57±15。3HCV1B型NS5A氨基酸突變數(shù)目與性別、年齡和傳播途徑的統(tǒng)計結(jié)果顯示年齡分組（≥50歲＜50歲）與V3區(qū)氨基酸變異數(shù)目有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（T0555，P0033），年齡分組（≥50歲＜50歲）與IRRDR區(qū)氨基酸變異數(shù)目有顯著統(tǒng)計學(xué)差異T0288，P0041，說明感染HCV年紀(jì)較大的患者IRRDR和V3區(qū)氨基酸變異較多，而ISDR和PKRBD區(qū)無顯著差異（P0222和P0081）。NS5A氨基酸突變數(shù)目與性別和傳播途徑無關(guān)P＞005。第二部分HCVNS5A變異對PEGIFNRBV治療1B亞型CHC療效的影響研究方法對廣東地區(qū)53例HCV1B亞型感染的慢性丙型肝炎患者，經(jīng)PEGIFNRBV標(biāo)準(zhǔn)方案（40例經(jīng)180ΜG次或135ΜG次PEGYLATEDIFNΑ2A聯(lián)合RBV8001200MG日方案，13例經(jīng)80ΜG次PEGYLATEDIFNΑ2B聯(lián)合RBV8001200MG日方案）治療48周隨訪24周，進(jìn)行回顧性研究。分析HCVNS5AAA變異及其影響抗病毒治療應(yīng)答的特點。分析主要聚焦于NS5A區(qū)的ISDR、PKRBD、IRRDR和V3功能區(qū)域。統(tǒng)計分析軟件應(yīng)用SPSS170，統(tǒng)計描述采用頻數(shù)表示，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，組間比較采用兩獨立樣本T檢驗分類變量比較采用X2檢驗二分類LOGISTIC回歸用于分析與SVR有關(guān)的各種因素。P＜005有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果153例慢性丙型肝炎患者采用PEGIFN聯(lián)合RBV治療48周并隨訪24周，EVR、ETVR和SVR分別是698％3753、736％3953和509％2753。治療前基線特征中年齡與SVR有顯著統(tǒng)計學(xué)差異T3499，P0001，PLT與SVR有顯著統(tǒng)計學(xué)差異T2611，P00120，EVR與SVR有顯著統(tǒng)計學(xué)差異X26173，P0013，ETVR與SVR有顯著統(tǒng)計學(xué)差異X219757，P0000。EVR和ETVR作為IFN的預(yù)測因素已被廣泛接受。本研究顯示PLT與SVR相關(guān)P0012，分析原因是由于患者基線特征的差異所致，因為獲得SVR的27例患者中有6例為肝硬化222％，而26例未獲得SVR的患者中有10例為肝硬化385％。進(jìn)一步年齡分組比對，≥50歲組的CHC患者SVR率比＜50歲組的SVR率低P0008，但是兩組都可以獲得較高的EVR和ETVR。提示對于獲得了ETVR的≥50歲的CHC患者，延長療程至72周或更長，可能提高SVR。2ISDRAA突變數(shù)目與SVR有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（13±11對06±05T3095，P0003）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)ISDRAA突變數(shù)目≥2組與＜2組之間SVR率存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異X27767，P0005。研究結(jié)果顯示采用PEGIFNRBV抗病毒治療，ISDR氨基酸突變數(shù)目不僅能夠預(yù)測SVR，更為重要的是，ISDRAA變異數(shù)目由既往ENOMOTO報道的4個降為2個即可對SVR進(jìn)行有效預(yù)測。經(jīng)與META分析結(jié)果對比發(fā)現(xiàn)，采用PEGIFNRBV聯(lián)合方案，主要提高了既往HCV1B亞型感染患者ISDRAA突變中間型的SVR。3PKRBDAA突變數(shù)目與SVR有顯著統(tǒng)計學(xué)差異61±17對53±07T2315，P0027。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)PKRBDAA突變≥6組與＜6組之間的SVR率存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異X24259，P0039。研究結(jié)果說明PKRBDAA序列的變異數(shù)與PEGIFNRBV療效明顯正相關(guān)，變異數(shù)≥6的病例所獲得的SVR顯著高于其他病例，從臨床的角度支持GALE等的研究結(jié)果。4對于V3、IRRDR以及整個NS5AISDRV3區(qū)，統(tǒng)計分析未發(fā)現(xiàn)其氨基酸突變與病毒學(xué)應(yīng)答有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P0819、P0949和P0244）。5廣東HCV1B亞型NS5A區(qū)單個氨基酸突變的常見位點為2218、2257、2259、2260、2262、2265、2268、2270、2271、2336、2351、2356、2360、2367、2368、2372、2373、2375和2378。統(tǒng)計分析未發(fā)現(xiàn)上述單個氨基酸位點的突變與PEGIFNRBV治療療效有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005），有必要增加病例數(shù)進(jìn)行深入研究。6LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示影響SVR的最主要因素是ISDRAA突變數(shù)目（92，P0006），其次為年齡09，P0006。第三部分HCV1B亞型NS5A插入式復(fù)制子重組質(zhì)粒的構(gòu)建研究方法以能夠高效復(fù)制的HCV1BREPLICON質(zhì)粒為骨架，構(gòu)成帶有MIUI和BCLI雙酶切位點的拉鏈質(zhì)粒，前期采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR從不同CHC患者血清中擴增獲得HCV1B亞型NS5A全長片段，克隆到PMD18載體中，測序分析其中的PKRBD、ISDR、V3和IRRDR區(qū)域的變異情況，挑選重要區(qū)域AA突變數(shù)目不同的NS5A片段，插入到此HCVREPLICON拉鏈質(zhì)粒中。擴增產(chǎn)物中無MIUI和BCLI酶切序列的，在引物中引入相關(guān)酶切序列后再擴增，雙酶切后將NS5A區(qū)段置換入HCV1BREPLICON骨架中，構(gòu)建包含中國NS5A區(qū)段的插入式復(fù)制子重組質(zhì)粒。結(jié)果分析DRZHUANG惠贈的HCV1BREPLICON質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)其NS5A區(qū)具有MIUI和BCLI的單一酶切位點，雙酶切移去質(zhì)粒中原有的NS5A后（此時暫稱為HCVREPLICON拉鏈質(zhì)粒），可以方便地插入從具有不同臨床抗病毒治療結(jié)局的CHC患者血清標(biāo)本中克隆出的HCVNSSA，進(jìn)而在細(xì)胞培養(yǎng)中深入分析不同來源的NS5A的生物學(xué)特點，闡明其與抗病毒藥物療效之間的關(guān)系。本研究從克隆的NS5A全長片段中挑選重要區(qū)域AA突變數(shù)目不同的3個片段，插入到HCVREPLICON拉鏈質(zhì)粒中，成功構(gòu)建了包含中國NS5A區(qū)段的插入式復(fù)制子重組質(zhì)粒，為研究中國HCV1B亞型NS5A蛋白的生物學(xué)功能、難治性CHC干擾素抵抗的機制以及個體化抗病毒治療相關(guān)因素的分析奠定了的基礎(chǔ)。第四部分HCVNS5A變異與以IFN為基礎(chǔ)抗病毒治療應(yīng)答機理的初步探討研究方法通過將各個HCV1B亞型NS5A插入式復(fù)制子重組質(zhì)粒進(jìn)行SCAI單酶切線性化，體外轉(zhuǎn)錄成RNA，轉(zhuǎn)染HUH751細(xì)胞，利用熒光素酶檢測鑒定不同時間點HCVRNA的瞬時表達(dá)，經(jīng)G418篩選得到含有HCVRNA穩(wěn)定復(fù)制的HUH751細(xì)胞，利用RTPCR法和免疫熒光檢測鑒定細(xì)胞中HCVNS5A的基因和蛋白表達(dá)，驗證各重組REPLICON質(zhì)粒是否能夠正常工作。用干擾素Α2B0IUML、25IUML、50IUML、100IUML、200IUML和400IUMLRBV0ΜGML、5ΜGML、10ΜGML、20ΜGML、40ΜGML和80ΜGMLIFNRBV不同方案IFN25IUMLRBV10ΜGML、IFN50IUMLRBV10ΜGML和IFN100IUMLRBV10ΜGML，分別干預(yù)負(fù)載有重組REPLICON的HUH751細(xì)胞48H后，收集細(xì)胞裂解液，測定熒光素酶活性，從而通過體外實驗驗證臨床研究的結(jié)果，對其機理做初步探討。統(tǒng)計分析軟件用SPSS170，實驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，不同濃度和方案的藥物干預(yù)HUH751，三組間采用析因設(shè)計資料的方差分析進(jìn)行顯著性檢驗統(tǒng)計分析，同時對每個濃度藥物、每個方案干預(yù)HUH751的結(jié)果采用ONEWAYANOVA方法進(jìn)行顯著性檢驗統(tǒng)計分析，方差齊同條件下，采用LSD法對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，方差不齊條件下，采用DUNTT3方法對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，P＜005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1經(jīng)檢測不同時間點各重組REPLICON轉(zhuǎn)染HUH751的瞬時表達(dá)效率，通過G418篩選得到含有HCVRNA穩(wěn)定復(fù)制的HUH751細(xì)胞，利用RTPCR法和免疫熒光檢測鑒定細(xì)胞中HCVNS5A的基因和蛋白表達(dá)，證明重組的HCVREPLICON能夠正常工作，可用于進(jìn)一步的實驗研究。2用不同濃度的IFN和RBV分別干預(yù)負(fù)載有重組REPLICON的HUH751細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)三組的熒光素酶活性均呈現(xiàn)劑量依賴性的下降，說明IFN和RBV對HCVRNA復(fù)制的抑制作用呈劑量依賴性增加。以不同濃度的IFN處理HCV復(fù)制子細(xì)胞后，析因設(shè)計資料的方差分析結(jié)果顯示不同組間有顯著差異F5432，P0009。不同藥物濃度間有顯著差異（F583930，P0000）。對每個濃度干預(yù)結(jié)果統(tǒng)計分析時，三組的ONEWAYANOVA分析顯示在100IUML濃度時，三組有顯著性差異（F6588，P0031），在200IUML濃度時，三組有顯著性差異F34220，P0010。多重比較發(fā)現(xiàn)經(jīng)過這2個藥物濃度干預(yù)后，NS5A3組的熒光素酶活性都是最低水平。說明HCVNS5A關(guān)鍵區(qū)域PKRBDISDR區(qū)發(fā)生氨基酸突變較多毒株，對IFN治療的反應(yīng)敏感。3用不同方案的IFN聯(lián)合RBV進(jìn)行了干預(yù)實驗，采用不同方案干預(yù)HUH751，析因設(shè)計資料的方差分析結(jié)果顯示不同組間有顯著差異F10579，P0001。對每個濃度干預(yù)時，三組的ONEWAYANOVA分析顯示IFN50IUMLRBV10ΜGML方案下，三組比較有顯著性差異F8565，P0017，多重比較發(fā)現(xiàn)NS5A1組病毒量顯著高于NS5A2組和NS5A3組，說明HCVNS5A關(guān)鍵區(qū)域PKRBDISDR區(qū)發(fā)生氨基酸突變的REPLICON，對聯(lián)合用藥反應(yīng)敏感。而而IFN100IUMLRBV10ΜGML方案下，三組比較有顯著性差異（F14317，P0005），多重比較顯示組間兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)差異，而NS5A3組的病毒量最低，NS5A2組居中。說明聯(lián)合用藥方案情況下，HCV對以IFN為基礎(chǔ)的聯(lián)合抗病毒治療的反應(yīng)敏感，并且HCVNS5A關(guān)鍵區(qū)域PKRBDISDR區(qū)變異數(shù)目越多，對藥物的反應(yīng)越好，這些發(fā)現(xiàn)與我們前期的研究結(jié)果相符合。結(jié)論1本研究表明HCV1B亞型NS5A氨基酸變異與以干擾素為基礎(chǔ)的抗病毒治療應(yīng)答密切相關(guān)，關(guān)鍵區(qū)域集中在NS5A的ISDR和PKRBD區(qū)。并且采用PEGIFN聯(lián)合RBV標(biāo)準(zhǔn)方案治療，ISDR氨基酸突變對治療應(yīng)答的預(yù)測可由4個降為2個。而實驗部分也證明對于HCV1B型NS5A區(qū)PKRBDISDR變異數(shù)目較多的病毒株，采用IFN聯(lián)合RBV用藥干預(yù)較單用IFN干預(yù)，治療反應(yīng)會更加敏感，并且HCVNS5A關(guān)鍵區(qū)域PKRBDISDR區(qū)變異數(shù)目越多，對聯(lián)合治療的反應(yīng)越好。2本研究提示對于HCV1B型NS5A蛋白與抗病毒治療的研究應(yīng)給予足夠重視，在基礎(chǔ)實驗研究中，利用本實驗構(gòu)建的重組REPLICON細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，針對NS5A區(qū)不同區(qū)域氨基酸突變?nèi)绾斡绊慖FN信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的實驗研究值得深入探索。

簡介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文選擇復(fù)制性腺病毒M4對卵巢癌細(xì)胞系體外治療作用及機制的初步探討姓名方海艷申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師汪輝201105華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文2THETHERAPEUTICEFFECTSOFM4TOOVARIANCANCERCELLLINESTHEPRIMARYMECHANISMABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHETHERAPEUTICEFFECTOFM4INTHEOVARIANCANCERCELLLINESOV2008C13KINVITROMEANWHILETOINVESTIGATETHEPRIMARYMECHANISMOFM4WHICHCANREVERSETHEDRUGRESISTANCEOFC13KTODDPMETHODSAFTERTHEINFECTIONOFM4TOTHECELLSMENTIONEDABOVETHEINHIBITIONRATEOFPROLIFERATIONCANBEMEASUREDBYMTTTHERATEOFAPOPTOSISWASMEASUREDBYFLOWCYTOMETRYWECARRIEDOUTTHEWESTERNBLOTTOEVALUATETHEPROTEINEXPRESSIONOFSTAT3ITSTARGETPROTEINTRANSWELLCANELLUMINATETHEINVASIVEABILITYOFTHECELLSDDPWASUSEDTOOVARIANCANCERCELLC13KTHENTHEINHIBITIONRATEOFPROLIFERATIONCANBETESTEDBYMTTALSOTHERATEOFAPOPTOSISCANBEMEASUREDBYFLOWCYTOMETRYBOTHM4DDPWEREADDEDTOC13KTHENTHEINHIBITIONRATEOFPROLIFERATIONCANBETESTEDBYMTTBESIDESREALTIMEPCRWASAPPLIEDTOEVALUATETHEEXPRESSIONOFMDR1RESULTAFTERTHEINFECTIONOFM4THEPROLIFERATIONOFOV2008C13KWASINHIBITEDOBVIOUSLYP005THEAPOPTOTICRATEOFTHESECELLLINESWASOBVIOUSLYRAISEDP005WESTERNBLOTSHOWEDTHATAFTERTHEINFECTIONTHEPROTEINEXPRESSIONLEVELOFSTAT3ITSTARGETPROTEINMMP9SURVIVINBCLXLCYCLIND1WEREALLDECREASEDP005TRANSWELLSHOWEDTHEINVASIVEABILITYOFOVARIANCANCERCELLWASDECREASEDDDPHASLITTLEEFFECTTOTHERATEOFPROLIFERATIONAPOPTOSISOFTHEOVARIANCELLLINEC13KBUTWHENCOMBINEDWITHM4THERATEOFPROLIFERATIONWASDECREAEDOBVIOUSLYMDR1WASDECREASEDTOOCONCLUSIONM4CANBEEFFECTIVETOOVARIANCANCERCELLSOV2008C13KTHEPRIMARYMECHANISMMAYBEATTRIBUTEDTOITSBLOCKAGETOTHEEXPRESSIONOFSTAT3WHICHTRIGGEREDTHEDECREASEDEXPRESSIONOFPSTAT3ITSTARGETPROTEINMMP9BCLXLSURVIVINCYCLIND1ETALULTIMATELYRESULTEDINTHEAPOPTOSISOFCANCERCELLSM4COMBINEDWITHDDPCANDECREASEEXPRESSIONOFMDR1THERATEOFPROLIFERATIONINC13KKEYWDSGENETHERAPYIVEREPLICATIONADENOVIRUSSTAT3C13KOV2008

簡介：自1985年我國首次發(fā)現(xiàn)艾滋病以來艾滋病在我國以不可阻擋之勢迅猛發(fā)展我國政府亦以積極姿態(tài)出臺相關(guān)政策、采取有效措施應(yīng)對艾滋病。隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展艾滋病感染人群從高危人群逐漸向普通人群蔓延性傳播成為艾滋病感染主要方式之一的特征逐漸明顯。由于自身所處的特殊年齡階段和身心特點高校學(xué)生成為重要的易感染人群之一。調(diào)查結(jié)果顯示高校學(xué)生對艾滋病相關(guān)知識的了解深度不夠加之高校學(xué)生當(dāng)下性觀念開放高危性行為可能性趨向明顯目前高校學(xué)生對艾滋病感染者和患者仍普遍持歧視的態(tài)度。高校學(xué)生艾滋病相關(guān)知識的認(rèn)知程度直接影響著自身性行為以及其對艾滋病感染者及患者的社會態(tài)度。加強高校艾滋病教育宣傳勢在必行迫在眉睫。單調(diào)不健全的高校艾滋病健康教育方式不能滿足學(xué)生的需求更不能適應(yīng)當(dāng)下艾滋病發(fā)展的嚴(yán)峻形勢實行全面的、多層次的、多方式的教育方式才能有效的提高高校艾滋病健康教育效果才能切實有效的預(yù)防艾滋病在高校的蔓延以及對學(xué)生的影響。重要結(jié)論非傳播途徑的知曉在很大程度上影響著高校學(xué)生對艾滋病的認(rèn)知艾滋病感染者與艾滋病患者同屬于艾滋病病毒攜帶者兩者危害性相當(dāng)?shù)歉咝W(xué)生在這方面存在認(rèn)識誤區(qū)社會標(biāo)簽強化了高校學(xué)生對艾滋病感染者及患者的社會歧視高校學(xué)生對艾滋病感染者及患者的歧視比例仍比較高高校學(xué)生高危性行為趨向明顯政府主導(dǎo)以學(xué)校為主學(xué)校、社會、家庭三方面相結(jié)合的系統(tǒng)的全面的教育方式預(yù)期會達(dá)到良好的效果。

簡介：點擊查看更多非內(nèi)分泌科護(hù)士糖尿病知識認(rèn)知與需求調(diào)查及培訓(xùn)效果研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的本研究通過觀察天地精丸治療血管性認(rèn)知障礙痰濁阻竅癥的總療效、認(rèn)知功能變化、日常生活能力變化、MMSE評分、中醫(yī)癥候評分、用藥安全性等情況，評價化痰開竅法在治療血管性認(rèn)知障礙中的作用機制，驗證天地精丸對該病的臨床療效及用藥安全性。方法1臨床資料本臨床研究所選病例均來源于2012年5月2013年12月在湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院武漢市中醫(yī)醫(yī)院腦病科門診部、住院部就診患者。中醫(yī)診斷參照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則中“中藥新藥治療癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則”進(jìn)行診斷，西醫(yī)診斷參照NINDSAIREN標(biāo)準(zhǔn)1993年美國國立神經(jīng)系統(tǒng)疾病與卒中研究所和瑞士神經(jīng)科學(xué)研究國際協(xié)會納入病例標(biāo)準(zhǔn)），辨證為血管性認(rèn)知障礙痰濁阻竅癥。共收集有效病例64例，隨機將病例分為治療組33例、對照組31例進(jìn)行臨床觀察。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，兩組病例在性別、年齡、教育程度、病程方面無顯著性差異P＞005，無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。2治療方法治療組每日口服天地精丸（天地精原方天麻10G，地龍3G，黃精10G，水蛭1G，石菖蒲6G，女貞子10G），一次6G，一日3次，共服藥45天。服藥期間禁食辛辣油膩發(fā)膻之品。對照組每日睡前口服鹽酸多奈哌齊片（安理申）5MG，共服藥45天。3療效評定觀察兩組治療前、治療第15天、治療第30天、治療第45天認(rèn)知功能變化、日常生活能力變化、中醫(yī)證候和臨床癥狀變化及臨床用藥中出現(xiàn)的不良反應(yīng)。主要通過MMSE評分、老年呆病療效評分表評分、神經(jīng)功能缺損積分值變化量表評分、中醫(yī)證候和臨床癥狀評分、對藥物不良反應(yīng)的及時記錄及藥物試驗結(jié)束后對患者的回訪記錄判定。4統(tǒng)計方法運用SPSS190統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料采用T檢驗，以X±S表示，計數(shù)資料采用X2檢驗，等級資料采用RIDIT分析。P＜005認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜001認(rèn)為具有顯著性的統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果1兩組MMSE評分比較對比兩組患者治療前、治療第15天、治療第30天、治療第45天MMSE評分情況，P值分別為P0604、P0979、P0015、P0004。治療前及治療前期（治療第15天），兩組認(rèn)知功能改變差異無顯著性P＞005，無統(tǒng)計學(xué)意義，提示經(jīng)治療后兩組認(rèn)識功能改變均不大。治療后期（治療第30天、治療第45天），兩組認(rèn)知功能改變差異顯著P＜005、P＜001，具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示經(jīng)治療后治療組認(rèn)知功能有明顯改善，優(yōu)于對照組。對比兩組組間，治療第45天和治療前比較，治療組積分差異具有顯著性P＜001，具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示經(jīng)治療后治療組認(rèn)知功能較前有明顯改善對照組積分改變無顯著性差異P＞005，無統(tǒng)計學(xué)意義，提示對照組經(jīng)治療后認(rèn)識功能改善較前不明顯。2兩組中醫(yī)證候和臨床癥狀變化評分情況比較治療組治療前后評分分別為1021±104，356±112。治療組組間對比，治療后中醫(yī)癥候總積分明顯低于治療前，具有顯著性差異P＜001，提示經(jīng)治療后治療組中醫(yī)證候和臨床癥狀有非常明顯的改善。對照組治療前后評分分別為993±225，756±204。對照組組間對比，治療后中醫(yī)癥候總積分明顯低于治療前，差異具有顯著性P＜005，提示經(jīng)治療后對照組中醫(yī)證候和臨床癥狀有一定的改善。對比治療組和對照組，治療組治療后積分明顯低于對照組，有顯著性差異P＜005，提示治療組在中醫(yī)證候和臨床癥狀方面的療效優(yōu)于對照組。3兩組MMSE療效（認(rèn)知功能療效）比較治療組臨床控制2例，顯效12例，有效9例，無效7例，總有效率為7667％對照組臨床控制1例，顯效6例，有效7例，無效16例，總有效率為4767％?？傆行手委熃M明顯高于對照組，經(jīng)RIDIT分析存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，提示經(jīng)治療后治療組MMSE療效優(yōu)于對照組。4兩組日常生活能力療效比較治療組臨床控制2例667％，顯效8例2667％，有效16例5333％，無效4例1333％，總有效率為8667％對照組臨床控制1例333％，顯效6例20％，有效11例3667％，無效12例40％，總有效率為60％。治療組總有效率明顯高于對照組，經(jīng)RIDIT分析存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學(xué)意P＜005，提示經(jīng)治療后治療組日常生活能力有顯著提高，優(yōu)于對照組。5兩組中醫(yī)證候和臨床癥狀療效比較治療組臨床控制3例10％，顯效10例3333％，有效12例40％，無效5例1667％，總有效率為8333％對照組臨床控制1例333％，顯效6例20％，有效6例20％，無效17例5667％，總有效率為4333％。治療組總有效率明顯高于對照組，經(jīng)RIDIT分析存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，提示經(jīng)治療后治療組中醫(yī)證候和臨床癥狀療效顯著，優(yōu)于對照組。6治療組組間相關(guān)因素與療效比較治療組性別、教育程度和療效經(jīng)RIDIT分析，組間比較無顯著性差異P＞005，提示治療組性別、教育程度與MMSE療效、中醫(yī)證候和臨床癥狀療效無關(guān)。治療組病程和療效經(jīng)RIDIT分析，病程短者較病程長者M(jìn)MSE療效和中醫(yī)證候療效均有顯著性差異P＜005，提示病程短者M(jìn)MSE療效、中醫(yī)證候和臨床癥狀療效均優(yōu)于病程長者。7治療組安全性評價治療組患者用藥前、后的生命體征無明顯變化，其實驗室檢查血常規(guī)、尿常規(guī)、糞常規(guī)、肝腎功能及心電圖均無明顯改變用藥期間均未發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)，未見毒副作用本試驗結(jié)束后1周對患者進(jìn)行的回訪，患者未訴停藥后不良反應(yīng)本試驗結(jié)束后1月對患者進(jìn)行回訪，患者未訴停藥后不良反應(yīng)。結(jié)論綜上所述，天地精丸治療血管性認(rèn)知障礙痰濁阻竅癥臨床總療效顯著，能有效提高患者的日常生活能力，改善患者的認(rèn)知功能，改善患者的中醫(yī)癥候和臨床癥狀在病程長短方面，天地精丸對病程短者的治療效果優(yōu)于病程長者在短期療效和長期療效方面，和鹽酸多奈哌齊相比，在短期療效上面兩者差異不明顯，但在中長期療效上面天地精丸優(yōu)于鹽酸多奈哌齊在安全性方面，天地精丸在治療血管性認(rèn)知障礙過程中無明顯毒副作用，安全可靠且天地精丸臨床療效在性別、年齡、文化程度方面無顯著性差異，說明其適應(yīng)范圍廣泛。

簡介：SOOCHOWUNIVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目利用APEPCR方法篩選白血病原病毒插入位點及相關(guān)基因的研究研究生姓名徐中娟指導(dǎo)教師姓名尹斌專業(yè)名稱細(xì)胞生物學(xué)研究方向白血病發(fā)生的分子遺傳機理論文提交日期2014年5月

簡介：點擊查看更多全麻聯(lián)合硬膜外麻醉及PCEA對老年患者術(shù)后早期認(rèn)知功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：碩士研究生學(xué)位論文宮頸病變患者中人乳頭瘤病毒分型、定量檢測及其意義宮頸病變患者中人乳頭瘤病毒分型、定量檢測及其意義THEDETECTIONMEANINGOFHPVGENOTYPINGQUANTITATIVEDETERMINATIONINPATIENTSWITHCERVICALLESION研究生趙穎專業(yè)臨床檢驗診斷學(xué)導(dǎo)師蔡應(yīng)木主任技師汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院2013年3月中國汕頭學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的工作研究及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在論文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。作者簽名日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人授權(quán)汕頭大學(xué)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？蓪⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存和匯編論文；學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)部門或機構(gòu)送交論文并授權(quán)其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。對于保密的論文，按照保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。作者簽名導(dǎo)師簽名日期年月日日期年月日

簡介：目的通過探討PI4KA與慢性乙型肝炎患者病毒載量的關(guān)系觀察PI4KA在肝癌細(xì)胞株HEPG2及HEPG2215中表達(dá)的差異，探究HBV對PI4KA表達(dá)的影響在臨床和細(xì)胞水平探討PI4KA與乙型肝炎病毒復(fù)制的關(guān)系。方法收集180例慢性乙型肝炎患者的血清，利用熒光定量PCR檢測其HBVDNA的載量，根據(jù)其HBVDNA載量的高低，分為三組高病毒載量組HBVDNA＞1107拷貝ML、中病毒載量組（1105拷貝ML≤HBVDNA≤1107拷貝ML）及低病毒載量組HBVDNA＜1105拷貝ML，同時以60名健康人作對照。采用ELISA法，檢測各組外周血清中的PI4KA的含量培養(yǎng)HEPG2及HEPG2215細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到90％時，提取兩細(xì)胞RNA并逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，采用實時熒光定量PCR法檢測HEPG2和HEPG2215細(xì)胞中PI4KAMRNA的表達(dá)水平采用ELISA法檢測此兩種細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PI4KA的表達(dá)水平。結(jié)果60例健康人血清PI4KA的含量為229±075NGML60例低病毒載量組血清PI4KA的含量為273±071NGML60例中病毒載量組血清PI4KA的含量為352±078NGML及60例高病毒載量組血清PI4KA含量為472±077NGML。慢性乙型肝炎患者不同病毒載量組與健康對照組間血清PI4KA的含量差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義F119958，P＜001，并且不同病毒載量組都顯著高于對照組。隨著HBVDNA載量的升高，PI4KA的含量增加，兩者呈正相關(guān)R0758，P＜001HEPG2215細(xì)胞中PI4KAMRNA的表達(dá)水平較HEPG2高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，HEPG2和HEPG2215細(xì)胞PI4KA的含量分別為107±054NGML和163±043NGML，HEPG2215細(xì)胞中PI4KA的含量高于HEPG2細(xì)胞T229，P＜005。結(jié)論慢性乙型肝炎患者血清PI4KA的含量與HBVDNA載量密切相關(guān)HBV能夠在MRNA和蛋白水平上調(diào)肝癌細(xì)胞PI4KA的表達(dá)在臨床水平和細(xì)胞水平證實PI4KA與乙型肝炎病毒復(fù)制密切相關(guān)，乙型肝炎病毒可能通過上調(diào)宿主因子PI4KA的表達(dá)來促進(jìn)自身病毒的復(fù)制。

簡介：目的每日喚醒是2000年由KRESS提出的目前已經(jīng)是ICU鎮(zhèn)靜管理中的一部分其臨床應(yīng)用意義得到了廣泛的認(rèn)同。盡管目前就每日喚醒方面的研究很熱門但大多集中在對每日喚醒臨床意義藥物應(yīng)用的研究。而ICU的護(hù)士對每日喚醒知識的了解情況以及對執(zhí)行每日喚醒的認(rèn)知方面的調(diào)查很少。鑒于此本研究旨在了解目前ICU護(hù)士對每日喚醒的認(rèn)知和實踐情況以便進(jìn)行質(zhì)量改進(jìn)。方法本研究以某三甲醫(yī)院ICU的護(hù)士為研究對象采用自設(shè)問卷進(jìn)行調(diào)查。問卷各條目是基于對國內(nèi)外大量相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行綜述的基礎(chǔ)上提出的并參照國外類似問卷設(shè)計而成。問卷經(jīng)過8名專家的審核得到了認(rèn)可。初稿在20名護(hù)士中進(jìn)行了預(yù)實驗并采用SPSS170統(tǒng)計軟件進(jìn)行了信度驗證。問卷內(nèi)容包括護(hù)士的一般資料每日喚醒的現(xiàn)狀每日喚醒相關(guān)知識情況以及護(hù)士執(zhí)行每日喚醒的意愿和障礙。問卷結(jié)果采用SPSS170統(tǒng)計軟件進(jìn)行錄入和統(tǒng)計分析。具體統(tǒng)計方法有描述性分析和相關(guān)性分析。結(jié)果調(diào)查結(jié)果顯示目前邵逸夫醫(yī)院ICU沒有每日喚醒方面的正規(guī)培訓(xùn)和操作流程；臨床護(hù)士對每日喚醒方面的知識缺乏；臨床護(hù)士人口統(tǒng)計學(xué)特性與知識的了解程度無顯著相關(guān)性。臨床護(hù)士對每日喚醒的意義表示認(rèn)可并愿意在臨床實施每日喚醒。臨床實施每日喚醒的障礙主要在三方面①護(hù)士擔(dān)心喚醒期間病人自行拔除氣管插管動靜脈管道或其他裝置的發(fā)生率增加。②護(hù)士擔(dān)心每日喚醒可引起患者躁動增加氧耗造成患者不適。③每日喚醒期間醫(yī)生不在場。最后大多數(shù)護(hù)士也表示希望得到正規(guī)培訓(xùn)有相關(guān)實施流程幫助他們實施每日喚醒。結(jié)論本研究結(jié)果提示臨床每日喚醒執(zhí)行力低不是護(hù)士不接受每日喚醒與國外研究結(jié)果不一致而主要是與護(hù)士對喚醒期間病人安全的擔(dān)心以及部門沒有相關(guān)的系統(tǒng)培訓(xùn)和實施流程護(hù)士缺乏相關(guān)知識有關(guān)?；诖司蜑榻酉聛淼馁|(zhì)量改進(jìn)提供了方向。由于研究時間和客觀條件的限制研究還存在一定不足和局限性需要進(jìn)一步的改進(jìn)與探討。

簡介：研究目的第一部分巨細(xì)胞病毒CYTOMEGALOVIRUS，CMV是造血干細(xì)胞移植后最常見機會性感染源之一，在造血干細(xì)胞移植早期CMV疾病的死亡率達(dá)80％以上，早期預(yù)防和診斷是減少CMV疾病發(fā)生的關(guān)鍵。CMV感染和致病受到病毒本身基因、宿主基因和機體免疫因素的影響。本研究目的是探討異基因造血干細(xì)胞移植ALLOGENEICHEMATOPOIETICSTEMCELLTRANSPLANTATION，ALLOHSCT術(shù)后受者CMVDNA陽性率（本文稱CMV感染率），CMVDNA首次檢出陽性的中位時間，CMVDNA陽性病例的分布及疑是CMV病的病死率，并分析CMV感染相關(guān)危險因素，為合理選擇供體，制定合適的移植預(yù)處理方案和病毒防治方案提供參考價值。第二部分本部分研究通過對移植后受者T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞重建，初步探索ALLOHSCT后受者的免疫重建狀態(tài)對CMV激活的影響。研究方法第一部分回顧性分析2004年1月至2014年3月在東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院血液科108例行ALLOHSCT患者臨床資料及術(shù)后CMV感染情況。隨訪日期截止至2014年4月31日，隨訪中位時間149251～3484D。詳細(xì)記錄納入病例的性別、年齡、原發(fā)疾病名稱及診斷時間、危險度分層（標(biāo)危、高危）、ABO血型配型和人類白細(xì)胞抗原HUMANLEUCOCYTEANTIGEN，HLA配型相合情況、供者與受者關(guān)系、預(yù)處理方案、移植時間、抗人胸腺細(xì)胞免疫球蛋白ANTIHUMANTHYMUSGLOBULIN，ATG使用情況、造血重建時間、急性移植物抗宿主病ACUTEGRAFTVERSUSHOSTDISEASE，AGVHD及慢性移植物抗宿主病CHRONICGRAFTVERSUSHOSTDISEASE，CGVHD分度及預(yù)后等情況，在隨訪期內(nèi)采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法FLUESCENTQUANTITATIONPOLYMERASECHAINREACTION，F(xiàn)QPCR定期檢測ALLOHSCT術(shù)后受者尿CMVDNA，記錄尿中首次檢出CMVDNA陽性的時間、CMVDNA陽性分布及預(yù)后等情況。第二部分選擇2010年1月～2014年3月行ALLOHSCT受者54例，利用FQPCR定期檢測移植后90D內(nèi)受者尿液中CMVDNA，根據(jù)檢測結(jié)果將54例分為CMVDNA陽性組（簡稱CMV陽性組）和CMVDNA陰性組（簡稱CMV陰性組），同時選取30例尿CMVDNA陰性的健康供者作為本部分的實驗參考，采用流式細(xì)胞儀FLOWCYTOMETRY，F(xiàn)CM檢測技術(shù)連續(xù)檢測54例ALLOHSCT術(shù)后30D，60D和90D受者和30例健康供者外周血CD3，CD3℃D4，CD3CD8以及CD3CD16CD56（即NK細(xì)胞）重建情況，比較CMV陽性組與陰性組免疫狀態(tài)的差異。結(jié)果第一部分按納入標(biāo)準(zhǔn)入選的108例接受ALLOHSCT的受者，尿CMVDNA陽性率為5278％57108，首次尿中檢出CMVDNA陽性的中位時間為443～308D，主要集中在移植后30～100D。截止隨訪期，發(fā)展疑是為CMV病17例，分別分布在肺、腸、膀胱、肝臟以及口腔等部位移植后疑是因CMV病而死亡的病例為10例，占CMVDNA陽性病例數(shù)的1754％1057，其中疑是CMV間質(zhì)性肺炎CMVINTERSTITIALPNEUMONIA，CMVIP病死率最高，占死亡病例的3529％617。單因素分析顯示CMVDNA陽性率與供、受者HLA配型、預(yù)處理方案中是否使用ATG、移植后粒細(xì)胞缺乏（簡稱粒缺）時間＞10D及GVHD等因素有關(guān)與受者年齡，性別，原發(fā)疾病種類，原發(fā)疾病到移植間隔時間，原發(fā)疾病分級，干細(xì)胞來源，供者性別，供、受者ABO血型是否相同及移植季節(jié)均無關(guān)。多因素分析顯示粒缺時間＞10D和GVHD是CMVDNA陽性率增高的高危因素。第二部分納入研究的54例患者均獲得造血重建，粒系造血重建＞05109L的中位時間為129～20D，血小板造血重建＞20109中位時間為2212～46D。32例患者在移植90D內(nèi)出現(xiàn)CMVDNA陽性，CNMVDNA陽性檢出的中位時間為433～76D移植后30DCMVDNA陽性組CD3T細(xì)胞比例低于CMVDNA陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，60D，90D兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。移植后30DCMVDNA陽性組CD3CD4T細(xì)胞比例低于CMVDNA陰性組，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義，移植后60D，90D兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在移植后90D內(nèi)兩組CD3CD8T細(xì)胞比例均無統(tǒng)計學(xué)差異。移植后60DCMVDNA陽性組CD3CD16CD56NK細(xì)胞比例高于CMVDNA陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論第一部分CMV是ALLOHSCT術(shù)后常見的感染病毒之一，預(yù)處理方案中加用ATG，移植后將粒缺時間控制在10D以內(nèi)以及預(yù)防GVHD的發(fā)生均可以降低CMVDNA陽性率。雖然本組研究發(fā)現(xiàn)CMVDNA陽性率與干細(xì)胞來源無關(guān)，但綜合其他文獻(xiàn)的報道，作者主張移植時選擇親緣、HLA配型全相合的供者積極加強CMVDNA陽性病例的搶先治療可能減少CMV病的發(fā)生率和病死率。第二部分造血干細(xì)胞移植后T淋巴細(xì)胞重建緩慢，NK細(xì)胞持續(xù)高比例存在，初步證明其與CMVDNA陽性率增高有關(guān)。

簡介：點擊查看更多病毒感染中JNK信號對殺傷性T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：手足口病HFOOTMOUTHDISEASE，HFMD是由腸道病毒引起的急性傳染病，主要發(fā)生于5歲以下兒童，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱和手、足、口腔等部位皮膚或粘膜紅色丘疹或皰疹。引起手足口病的腸道病毒有多種，包括柯薩奇病毒A組的16CA16、4、6、10、12，B組的2、3、5，?？刹《?、19、30，以及腸道病毒71型EV71等，其中以EV71和CA16最為常見。通常情況下，EV71和CA16等非EV71腸道病毒感染引起的手足口病在臨床癥狀和體征方面難以區(qū)別，但EV71手足口病中部分患者會出現(xiàn)無菌性腦膜炎、腦炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹和神經(jīng)源性肺水腫等多種神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，病情兇險，嚴(yán)重危害嬰幼兒的生命健康。近年來，我國及周邊地區(qū)手足口病疫情日趨嚴(yán)重。2011年我國全年累計報告病例161萬余例，死亡509例。因此早期、快速、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷，特別是鑒別EV71型和非EV71型手足口病，對于積極的臨床救治和疫情防控具有重要意義。RTPCR檢測技術(shù)因有快速、敏感、特異的特點，已成為手足口病病原體快速診斷的重要手段，但目前建立的方法主要針對EV71和CA16，不僅造成其它非EV71病原體的漏診，而且EV71和CA16要分別PCR擴增，繁瑣費時，試劑消耗大，操作步驟多，容易造成實驗失敗。如能建立一種EV71和非EV71的二重RTPCR，在一個擴增管中同時擴增EV71和非EV71，根據(jù)擴增產(chǎn)物的不同鑒別EV71型和非EV71型手足口病。這種單管二重一步法RTPCR必將具有廣泛的應(yīng)用前景。本研究從GENBANK下載了腸道病毒所有67個血清型的216個基因序列，設(shè)計腸道病毒通用引物與EV71特異性引物，并從不同的引物組合中篩選出最優(yōu)二重引物。利用該引物建立的單管二重一步法RTPCR，對EV71的檢測下限為0001TCID50ML，對非EV71腸道病毒檢測下限為001TCID50ML；對不同手足口病病原體進(jìn)行二重RTPCR，所有的EV71毒株都能擴增出兩條目的條帶，分別為889BP和306BP，而對非EV71腸道病毒均只擴增出一條306P的目的條帶。檢測165份來源于手足口病患兒咽拭子標(biāo)本，RTPCR陽性有113份，陽性率達(dá)685％，其中EV71陽性標(biāo)本76份，非EV71腸道病毒陽性標(biāo)本37份。在所有重癥手足口病中，約85的病原體為EV71。同時RTPCR檢出率在發(fā)病一周后開始下降。隨機測序49份EV71RTPCR陽性產(chǎn)物VP1基因序列，均為EV71；通過MEGAV503軟件構(gòu)建基于VP1基因序列的基因進(jìn)化樹，表明上述EV71均為C4A亞型。隨機測序37份非EV71腸道病毒RTPCR陽性產(chǎn)物5’UTR基因序列，均為非EV71型腸道病毒。綜上所述，本研究建立的單管二重一步法RTPCR具有敏感性高，特異性好，簡單方便，能實現(xiàn)一次性完成EV71型與非EV71型腸道病毒相關(guān)基因的擴增，可顯著提高手足口病流行期間EV71型與非EV71型腸道病毒的檢測和鑒別效率，為臨床救治和疫情防控提供重要的病原學(xué)診斷信息。