簡介：第一部分外周血單核細胞來源樹突狀細胞的體外培養(yǎng)該研究擬建立從人外周血單核細胞誘導擴增大量DC的簡便方法并進行表型鑒定，從而為今后開展疾病發(fā)病機制、治療和預防措施等方面的研究打下基礎(chǔ)第二部分外周血單核細胞CD83表達及其在慢性病毒性肝炎中的意義該研究擬運用流式細胞儀研究不同臨床類型肝炎患者外周血單核細胞表達CD83的變化情況，闡述DC在慢性乙型病毒性肝炎發(fā)病機制中所發(fā)揮的作用，并研究其可能的臨床意義第三部分胸腺肽ΑL對TNFΑ、LPS增強樹突狀細胞功能的影響該文擬通過研究LPS、TNFΑ對DC功能的作用，以及胸腺肽ΑL對該過程的影響，從而了解DC參與慢性重型肝炎發(fā)病的可能機制

簡介：目的通過體外細胞培養(yǎng)和雛鴨體內(nèi)試驗，探討不同濃度的蒼耳子提取物對HBV的影響。方法體外實驗選用HBVDNA轉(zhuǎn)染的HEPG22215細胞，分別加入含有蒼耳子提取物10MGML、1MGML、01MGML、001MGML、0001MGML的培養(yǎng)液，作用2D、4D、6D，采用四甲基偶氮唑藍MTT比色法篩選出蒼耳子提取物無毒濃度，再以免疫熒光法、流式細胞術(shù)FCM、放射免疫定量法IRMA及熒光定量PCR等方法，檢測不同時間藥物對細胞分泌的HBSAG、HBEAG、HBCAG及HBVDNA的影響。同時以3TC50ΜGML、IFNΑ1000UML組作為陽性藥物的無毒濃度組，不加藥組作細胞病毒對照。體內(nèi)實驗以鴨乙型肝炎病毒DHBVDNA陽性雛鴨作動物模型，分別給予1MGKG1D1、01MGKG11、001MGKG1D1的蒼耳子提取物，每天1次，連續(xù)給藥10D。定期采血，檢測用藥前后血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST的變化，用斑點雜交試驗檢測藥物對鴨血清中DHBVDNA的影響，并取鴨肝作HE染色，觀察組織學變化；陽性對照藥給以3TC2MGKG1D1；病毒模型對照組和空白對照組DHBVDNA陰性的雛鴨，給予同體積的三蒸水。結(jié)果1體外試驗①用MTT法檢測藥物對2215細胞的毒性作用，蒼耳子提取物毒性呈濃度依賴性，其中10MGML、1MGML濃度組分別在第2D及第6D出現(xiàn)對2215細胞的毒性作用P＜005；01MGML濃度以下實驗組，6D內(nèi)對2215細胞生長無毒性作用P＞005；3TC隨著濃度增加對2215細胞的毒性亦增加，50ΜGML濃度組6D內(nèi)未見明顯細胞毒性P＞005；IFNΑ各組在6D內(nèi)，未見細胞生長抑制現(xiàn)象P＞005。②用流式細胞術(shù)、放射免疫法檢測藥物對2215細胞分泌的HBSAG、HBEAG及HBCAG的作用，蒼耳子提取物01～0001MGML組對HBSAG有抑制作用P＜005，其中01MGML組對HBSAG的抑制作用優(yōu)于3TC50ΜGML組P＜005；該濃度對HBEAG有抑制作用P＜005，但不優(yōu)于兩種陽性藥；001～0001MGML組對HBEAG無抑制作用；三種濃度蒼耳子提取物對HBCAG均無抑制作用；3TC50ΜGML組對HBSAG、HBCAG均有顯著抑制作用P＜005，其毒性呈時間依賴性，對HBEAG有顯著抑制作用P＜001；IFNΑ1000UML組對HBSAG的抑制作用更明顯P＜001，隨培養(yǎng)天數(shù)增加，抑制率逐漸增加，至第6D時，抑制率達7129％，對HBEAG、HBCAG有抑制作用P＜005；兩種陽性藥物比較，IFNΑ1000UML組對HBSAG、HBCAG的抑制作用優(yōu)于3TC50ΜGML組P＜005，在同一時間內(nèi)IFNΑ1000UML對HBEAG的抑制作用與3TC50ΜGML組無差異P＞005。③用熒光定量PCR法檢測HBVDNA，三種濃度的蒼耳子提取物可降低HBVDNA拷貝數(shù)，但無統(tǒng)計學意義P＞005。3TC50ΜGML組對HBVDNA有顯著抑制作用P＜005，IFNΑ1000UML抑制作用更明顯P＜001。2體內(nèi)實驗①用賴氏比色法對ALT和AST進行檢測，空白對照組和病毒模型對照組在實驗期間ALT和AST結(jié)果穩(wěn)定，組間無差異P＞005；用藥期間與模型對照組比較，蒼耳子提取物各濃度組ALT及AST水平無顯著性差異P＞005，表明該藥未對肝功能造成損害；陽性藥物對照組3TC2MGKG1D1在用藥第10D后，ALT升高，與同時期病毒模型組比較有差異P＜005，提示該濃度3TC對肝臟可能有一定的毒性。②鴨肝病理切片觀察可見，DHBVDNA陽性鴨肝細胞出現(xiàn)明顯空泡變性，胞漿疏松，匯管區(qū)可見炎細胞浸潤，有點狀出血、壞死；隨著蒼耳子提取物濃度增高，肝細胞病變程度逐漸減輕，蒼耳子提取物1GKG1D1治療的鴨肝細胞水腫程度明顯輕于病毒模型對照組；3TC組鴨肝細胞形態(tài)正常。③用斑點雜交試驗檢測鴨血清中的DHBVDNA，蒼耳子提取物各組治療5DT5、治療10DT10與治療0DT0比較，對DHBVDNA無抑制作用P＞005；陽性藥物3TC組，DHBVDNA量明顯減少P＜005，而停藥3DP3DHBVDNA明顯反彈P＜005。結(jié)論蒼耳子提取物體外實驗可抑制2215細胞分泌HBSAG、HBEAG，但對HBCAG、HBVDNA無抑制作用，在體內(nèi)實驗中，對鴨肝的病理改變有延緩作用，不影響轉(zhuǎn)氨酶水平，不能降低鴨血清中DHBVDNA。

簡介：華中科技大學碩士學位論文細菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建載有NPC1基因的復制缺陷型腺病毒載體及其鑒定的實驗研究姓名曹小麗申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師徐金枝20040401華中科技大學同濟醫(yī)學院碩士學位論文THESTUDYOFCONSTRUCTIONANDIDENTIFICATIONOFARECOMBINANTREPLICATIONDEFICIENTADENOVIRUSVECTORENCODINGNPCLGENEBYHOMORECOMBINATINGINBACTERIALCANDIDATEOFMASTERCA0XIAOLISUPERVISORXUJINGZHABSTRACTOBJECTIVECONSTRUCTINGARECOMBINANTREPLICATIONDEFICIENTADENOVIRUSVECTORENCODINGMOUSENPELGENE，F(xiàn)ORTHEPURPOSEOFTHERAPEUTICGOALINTHETREATMENTOFNIEMARMPICKDISEASETYPECO舊Q，WHICHISANINHERITEDNEURODEGENERATIVEDISEASEINVOLVINGTHEBRAINANDTHEINTERNALORGANSMETHODSTHENPCLWASEXNACTEDFROMPRPPROMNPCLWITHHINDMANDKPNL，THENINSERTEDTOTHEE1DELETEDEXPRESSIONPLASMIDPADTRACKCMVSHUTTLEVECTORTHEUGAFIONPRODUCTWASHOMORECOMBINATIONWITHTHEBACKBONEPLASMIDPADEASYIINTHERECANECOILBJ5183THERECOMBINATIONPLASMIDSHAVEBEENTRANSFECTEDTHE293CELLSBYLIPOSOMEMEDIATEDMETHODTHETRANSFECTINNOFRECOMBINANTADENOVIRUSESINTHECELLSWASCONFMEDBYEXAMININGTHEEXPRESSIONOFGREENFLUORESCENCEPROTEINGFPRTPCRMETHODWASUSEDTOTOCONFIRMTHEEXPRESSIONOFTHEINTERESTINGGONE印C1RESULTSBYELCCTROPHORESISANDRESTRICTIONENDONUCLEASEANALYSIS，WEHAVECONFIRMEDTHATTHEPRPPROMNPCLPLASMIDSPROVIDEDBYDRLOFTUSCONTAINEDTHECORRECTGENE，NPCLRESTRICTIONENDONUCLEASEANALYSISCONFIRMEDTHESUCCESSFULCLONINGOFNPCLGENEINTOTHEPADTRACKCMVTHERECOMBINANTSPADNPCLWERESELECTEDFOR2

簡介：揚州大學碩士學位論文新城疫病毒FMW株體外抗腫瘤作用的初步研究姓名白海申請學位級別碩士專業(yè)遺傳學指導教師孟松樹20080501白海新城疫病毒FMW株體外抗腫瘤作用的初步研究7PBSPFUPHPMSFPSRPMSSDSSDSPAGESPFSWTBS弘GPLVPHOSPHATEBUF＆REDSALINEPLAQUEFBNNINGUNITSHYDROGENIONCONCENTRATIONPHENYLMETHANESULFONYLNUORIDPENICIILINSTREPTOMYCINROTATIONPERMINUTESECONDSODIUMDODECYLSULFATE磷酸鹽緩沖液生理鹽水空斑形成單位氫離子濃度苯甲基璜酰氟青鏈霉素轅F分秒十二烷基硫酸鈉SODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAMIDE十二烷基硫酸鈉一聚丙烯GELELECTROPHORESISSPECIFICPATHOGENFREESTERILEWATERTRISBUF托REDSALINEMICROGRAMMICROLITERVOLT酰胺凝膠電泳無特定病原體超純水TRIS緩沖生理鹽水微克微升伏特

簡介：中山大學博士學位論文丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表達與肝癌發(fā)生關(guān)系的研究姓名單于申請學位級別博士專業(yè)病理學指導教師陳系古20040425中LIL大學博士論文丙黧肝炎病毒核心鬣囪基網(wǎng)的表達與斛癌發(fā)生關(guān)系的研究中文摘要6淡式纓憨儀分辨袤這HCVC麓毽天野纓魏懿生長特毪；7，琢予力顯徽鏡嗣電鏡逶一步觀察表達HCVC基困人群細胞的超微結(jié)櫥特征；8。襟氛受下接韓表達玨C砧E蒸因薛天翳綏艟進行戲癟實驗，述一步驗程表達HCVC鏊函人群緇髓黯惡性生翩學行秀9腫瘸組織分別遜行了裸鼠體內(nèi)接種傳代實驗和瘤組織分離細胞體外培養(yǎng)實驗，分愛健至5代泰∞代。結(jié)果穩(wěn)建了薰縫龔竣表這震粒載髂PCONA3TREC，滕壤俸余譬轉(zhuǎn)染CHANGLIVER夫肝細胞系，建立了帶有鞠環(huán)素反應元釋TRE韻襲遮HCVC基躐的人肝細聰壤型，在此基礎(chǔ)上觀察至U表達HCVC基因的肝細胞體外培養(yǎng)5代以尉，部分細胞出現(xiàn)梭形樣改變，20代鞋焉綴魏摶生長特性菠生了許多改變，與不表達HCVC基囂綴萎于細胞相比1細胞形惑撼現(xiàn)梭形祥躐變，表現(xiàn)出腫瘤性生長方式，郢細胞量聚集性堆積生長。2細胞的艇長速度顯著加快，處于8期細胞數(shù)增多，表明細胞的增殖軀力增強。3≥纓戇黼DNA含量酶趣一性交差。避一步靜澎態(tài)學磋窕縫鬃裝暖表達HEⅥE基因的翳綢腿與對照緞細胞福詫，緗瓤平均最大蕊襁變太，平均高度變低，大部分細胞形態(tài)照極性梭形樣淑變，細胞袋面突起減少變短，細胞邊緣由蔻矮突起爨影或款霞愛狀繚攙及邀纓穗表囂突起掰澎或熬纓魏閼緊密連接減少；很多細胞表現(xiàn)出核大、梭仁明顯、核漿比例變大，常染色質(zhì)事甯等結(jié)構(gòu)特鍤。裸鼠皮下接種細胞成瘤實驗，21天后揆種表達HCVC基因的CHANGLIVER人肝細胞瓣6是襟鬣全豁舂翳瘸長蹬，辮瘙綴綴諺冀HE縶懿顯示韁臻纓穗簿會翳綏腿癱癌理形態(tài)特德，從而證實了HCVC基圓袋達導致了CHANGLIVER入翳細胞韻惡性轉(zhuǎn)他。綞論1成功建立了表逡HCVC纂閑入肝細胞模型，為在細胞水平上進一影研究HCVC基因的生物學特性提供了基礎(chǔ)材料。2，扶生長特性及澎態(tài)學方覆鼴察了HCVC鏊透囂表這辯正嚳天籍縫穩(wěn)靜壘。王I一

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簡介：中山大學碩士學位論文雙靶向增殖型腺病毒SG502P53治療鼻咽癌的體外實驗研究姓名方國旗申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師朱振宇20060501雙靶向增殖型腺病毒650ZP53治療鼻咽癌的體外實驗研究中文摘要腫瘤靶向性基因病毒療法的出現(xiàn)，為腫瘤的治療帶了新的希望。將治療基因插入到利用腫瘤特異性增殖型腺病毒基因組中，以其作為輸送載體，治療基因?qū)S著病毒在腫瘤細胞內(nèi)大量增殖而高水平表達，發(fā)揮病毒溶瘤及基因治療的雙熏抗腫瘤作用，從而進一步克服各自的不足。在人類腫瘤中，有60％以上的腫瘤發(fā)生與P53基因的突變或其蛋白功能失活有關(guān)，且其突變頻率很高。因此，將野生型P53基因?qū)肽[瘤細胞，以糾正其異常功能，發(fā)揮抗腫瘤作用。為實現(xiàn)靶向性殺傷腫瘤細胞，本課題采用了人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶HTERT啟動子及缺氧反應元件HRE啟動子調(diào)控的腺病毒轉(zhuǎn)移載體SG502ACR2，將攜帶P53基因的表達盒克隆入其中，與骨架質(zhì)粒PPE3共轉(zhuǎn)染293細胞，經(jīng)同源重組獲得了雙靶向增殖型腺病毒SG502P53。通過細胞實驗，證實了此病毒對鼻咽癌細胞具有高度的選擇性及很強的殺傷能力，為鼻咽癌的體內(nèi)治療提供了一種新的生物學手段及實驗依據(jù)。目的構(gòu)建攜帶P53基因的腺病毒轉(zhuǎn)移載體SG502一ACR2一INSP53，與腺病毒骨架質(zhì)粒PPE3在293細胞中通過同源重組，獲得具有表達P53基因能力的雙靶向增殖型腺病毒SG502一P53；探討此病毒對鼻咽癌細胞的殺傷效應，為鼻咽癌的體內(nèi)生物治療提供一種新的手段及實驗依據(jù)。方法與結(jié)果1、攜帶P53基因的腺病毒轉(zhuǎn)移載體SG502ACR2INSP53的構(gòu)建，病毒的包裝及其大量制備由NCBI核酸數(shù)據(jù)庫，搜索出人全長P53基因序列，大小為1182BP，合成該基因。PCR體外擴增，電泳，以試劑盒回收約為12KB大小的DNA片段經(jīng)肋胡I與YBAI酶切，過柱純化后，插入到PUCL9／ECORIXBAI，得到PUCL9一P53，經(jīng)測序，P53基因序列正確。又以助胡I和XBAI酶切PUTL9一P53，肪棚I和NBEI酶切PCLONL6，兩者酶切產(chǎn)物相連接，得到PCLONL6一P53。AGEI和SPEI切開PCLONL6一P53，與AGEI和船AI酶切PCLON9一INS得到的INS片段相連，獲得PCLONL6一INSP53。再以AGEI和NOTI及SEAI切該載體，回收大小為2449BPONA片段。此片段即為攜帶P53基因的表達框，由INS，MCMVPROMOTER，P53GENE和

簡介：點擊查看更多益氣養(yǎng)陰、活血化瘀方對病毒性心肌疾病小鼠心肌穿孔素和顆粒酶B影響的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙型肝炎病毒HBV感染致肝細胞損傷的機制與病毒蛋白和肝細胞蛋白間的相互作用密切相關(guān)而乙型肝炎E抗原HBEAG是由HBVDNA前C基因區(qū)編碼的一種非顆粒性的分泌蛋白隨HBV復制而增加臨床上將其作為判斷HBV活動性復制的指標之一因此研究HBEAG與肝細胞內(nèi)蛋白的相互作用及其機理能在一定程度上對HBV的致病機制做出解釋并為尋找有效防治方法提供新線索酵母雙雜交技術(shù)是一種研究蛋白蛋白間相互作用的比較快速、可靠并可大規(guī)模篩選的方法該實驗所采用酵母雙雜交系統(tǒng)3基于兩種單倍體酵母A和Α型可以配合形成二倍體而其中表達的外源蛋白仍能相互作用的機理免去了低效率文庫質(zhì)粒與誘餌質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的問題大大提高了雜交效率在原技術(shù)基礎(chǔ)上增加了3個報告基因降低了假陽性率我們利用該技術(shù)根據(jù)中國HBV流行株序列設(shè)計引物應用多聚酶鏈反應PCR技術(shù)由乙型肝炎患者血清中分離出HBEAG編碼基因序列為進一步確證經(jīng)酵母雙雜交技術(shù)篩選出的結(jié)合蛋白與HBEAG在體外也存在相互作用我們根據(jù)GENBANK中提供的序列信息設(shè)計引物以HEPG2細胞的MRNA為模板通過逆轉(zhuǎn)錄PCR擴增出CD81及新基因AK026018的全序列測序鑒定后經(jīng)相應的限制性內(nèi)切酶消化后克隆入酵母表達載體PGADT7在TNT網(wǎng)織紅細胞裂解物中進行體外翻譯摻入同位素S與HBEAG進行體外免疫共沉淀反應經(jīng)SDSPAGE電泳20℃條件下放射自顯影再次證實上述蛋白間結(jié)合作用的可靠性在新基因功能的研究方面我們對HBEAG結(jié)合蛋白新基因AK026018進行了初步探討

簡介：博士學位論文學校代碼學號10023B20Ⅸ珥27HSVIUS1基因缺失重組病毒和UL35熒光標記重組病毒的構(gòu)建THECONSTRUCTIONOFRECOMBINATIONHSVIVIRUSWITHUSLGENEDELETIONANDRECOMBINATIONHSVIVIRUSWITHVP26NUORESCENCELABELING所院醫(yī)學生物學研究所姓名崔偉指導教師李琦涵研究員導師小組劉龍丁副研究員學科專業(yè)免疫學研究方向病毒免疫學完成日期2009年5月目錄摘要11軻言5日U吞5一實驗材料及方法1O一、實驗材料10二、實驗方法14二結(jié)果與分析30一HSVI8F株的病毒滴度30二構(gòu)建重組質(zhì)粒的鑒定30三重組病毒的制備33四重組病毒的篩選35五重組病毒的鑒定37六重組病毒的生物學特性研究40三討論44一利用同源重組方法構(gòu)建重組病毒過程中的關(guān)鍵因素44二ICP22蛋白缺失重組病毒與VP26蛋白示蹤重組病毒的篩選45三ICP22蛋白缺失的重組病毒的構(gòu)建及鑒定46四VP26蛋白示蹤重組病毒的構(gòu)建及鑒定47五ICP22蛋白缺失重組病毒生物學特性及對其蛋白功能的探討47六VP26蛋白示蹤重組病毒生物學特性及對其蛋白功能的探討48四小結(jié)50參考文獻51論文綜述66論文綜述一基因敲除技術(shù)的研究進展。66論文綜述二重組病毒載體的研究進展72附勇乏79附錄一縮略詞79附錄二病毒名稱的縮寫81

簡介：IMMUNOHISTOCHEMISTRYENVISION二步法檢測宮頸組織標本中端粒酶活性的表達。結(jié)果1端粒酶陽性表達率在對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤變CERVICALINTRAEPITHELIALNEOPLASIA。CINI、CINII、CINIII和宮頸癌組分別為1000％、1667％、4000％、7000％、9500％，宮頸癌組高于CLNIII，CINIII高于CINII，CINⅡ高于CINI，差異均有統(tǒng)計學意義X24329，PO037；X24327，PO0381X2_4022，PO045。2隨著宮頸病變級別的增加，高危型HPV的陽性率和病毒負荷量均增高。宮頸癌和CLNIII組高危型HPV的表達陽性率明顯高于CINII、CINI及對照組X27414～29501，PO01；宮頸癌組、CINIII組及CINII組與CINI組比較差異均有統(tǒng)計學意義PO05。3在各組高危型HPV感染的例數(shù)中端粒酶的陽性率分別為0％0／5、2500％2／8、3750％6／16、7222％13／18、10000％19／19，CINIII及宮頸癌組與其他3組比較均有統(tǒng)計學意義PO05。結(jié)論高危型HPV負荷量和端粒酶活性均與宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，兩者聯(lián)合檢測有望作為宮頸癌早期篩查、處理及預后的輔助指標。碩士研究生孫懷美指導教師王蓁教授關(guān)鍵詞宮頸上皮內(nèi)瘤變；宮頸腫瘤；免疫組化；端粒，末端轉(zhuǎn)移酶；人乳頭瘤病毒POSTGRADUATESTUDENTHUAIMEISUNDIRECTEDBYPROFZHENWANG【KEYWORDS】CERVICALINTRAEPITHELIALNEOPLASIA；CERVIXNEOPLASMS；IMMUNOHISTOCHEMISTRY；TELOMERASE；HUMANPAPILLOMAVIRUS

簡介：第一部分HYPERIL6重組腺病毒的構(gòu)建及其在真核細胞中的表達目的構(gòu)建融合基因超級白介素6HYPERIL6，應用腺病毒載體構(gòu)建系統(tǒng)ADEASYSYSTEM構(gòu)建重組腺病毒ADHIL6。用ADHIL6感染人肝細胞L02，觀察細胞內(nèi)HYPERIL6MRNA和蛋白的表達情況。方法采用基因拼接GENESOEING法將人類SIL6R和IL6的基因用一富含甘氨酸序列的接頭經(jīng)PCR擴增融合，并定向克隆至PEGFPC1，再將HYPERIL6克隆至穿梭質(zhì)粒PADTRACKCMV，酶切線性化后與腺病毒骨架質(zhì)粒PADEASYL在BJ5183細菌內(nèi)同源重組，構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒。以酶切及PCR方法進行鑒定后，重組腺病毒質(zhì)粒用PACI線性化后轉(zhuǎn)染293細胞，于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光以確定轉(zhuǎn)染效果。RTPCR檢測ADHIL6感染L02細胞后HYPERIL6基因的表達情況，WESTERNBLOT法檢測ADHIL6感染L02細胞后HYPERIL6的蛋白表達情況。結(jié)果PCR擴增出1560BP的HYPERIL6編碼序列并成功構(gòu)建重組質(zhì)粒PEGFPCLHIL6，經(jīng)鑒定證實構(gòu)建的融合基因的編碼序列與理論推斷完全一致。重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)PACI酶切后可見一條30KB和約30KB的條帶，表明同源重組成功。將線性化的重組腺病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293細胞后于熒光顯微鏡下可見明亮的綠色熒光。重組腺病毒ADHIL6能在L02細胞中表達出HYPERIL6基因和蛋白，條帶分別為1600BP和60KD左右。結(jié)論我們成功構(gòu)建了同源重組腺病毒ADHIL6，并且在人類肝細胞L02中得到了HYPERIL一6基因和蛋白的表達，為以后進行肝再生相關(guān)疾病的基因治療等研究奠定了一定基礎(chǔ)。第二部分HYPERIL6重組腺病毒對肝細胞生物學特性的影響目的研究ADHIL6表達的HYPERIL6對HEPG2細胞中急性時相蛋白一結(jié)合珠蛋白HAPTOGLOBINMRNA表達的刺激作用；同時觀察HYPERIL6對人正常肝細胞的促增殖作用，為以后進行肝再生相關(guān)疾病的的基因治療等研究奠定基礎(chǔ)。方法1RTPCR法檢測ADHIL6重組腺病毒感染HEPG2細胞后產(chǎn)生的急性時相蛋白一結(jié)合珠蛋白HAPTOGLOBIN的MRNA表達的量的變化。2MTT法檢測ADHIL6重組腺病毒對人肝細胞L02生長狀態(tài)的影響。3免疫細胞化學法觀察L02細胞感染ADHIL6重組腺病毒后其增殖核抗原PCNA的表達情況。結(jié)果1RTPCR結(jié)果在ADHIL6重組腺病毒刺激下，HEPG2細胞的結(jié)合珠蛋白的MRNA表達相比較于空腺病毒ADO組、ADIL6組均有顯著增高P001。2MTT結(jié)果ADHIL6重組腺病毒、ADIL6重組腺病毒均對L02細胞有促進生長增殖的作用，但是ADHIL6組的促增殖作用顯著高于ADIL6組P001。3免疫細胞化學結(jié)果ADHIL6感染組細胞PCNA陽性表達率遠遠高于其他組P001，提示HYPERIL6具有很強的促肝細胞增殖的能力。結(jié)論ADHIL6表達的HYPERIL6有顯著的生物活性，能夠顯著刺激HEPG2細胞表達結(jié)合珠蛋白的量增加；并且對L02細胞有很強的促增殖作用。

簡介：分類號密級單位代碼學號馨了了博士學位論文刁口口，，論文題目門林啼碼“殉劍鱗蹄隊觸啊咖恤協(xié)拿跪竹究作者、名了長窟專業(yè)鐘認飯與價卜印甚指導教師姓名專業(yè)技術(shù)職務聞丁年角弘日山東大學博士學位論文論文目錄中文摘要，，，二，二，，，英文摘要，符號說明，論文正文前言，巧第一部分人側(cè)兀，基因第三外顯子反義腺病毒載體的構(gòu)建及包裝材料和方法，結(jié)果討論第二部分側(cè)兀，基因反義對前列腺癌細胞生長抑制作用的體外研究材料和方法結(jié)果，二，，討論第三部分側(cè)尤，基因反義對前列腺癌細胞生長抑制作用的體內(nèi)研究材料和方法，結(jié)果、，討論，，，，，，全文總結(jié)參考文獻，，，發(fā)表文章，致謝‘

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學中國醫(yī)學科學院碩士學位論文ALZHEIMER病及輕度認知功能障礙的神經(jīng)心理學和腦血流灌注研究姓名高平申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師秦紹森20050101NINCDS／ADRDAOMROIRARRCBFSPECTNADONALINSFITUTEOF美國國立神經(jīng)病NEUROLOGICALAND和卒中研究院／COMMUNICATIVE阿爾茨海默病和DISORDERSAND相關(guān)疾病學會STROKE／ALZHEIMER’SDISEASEANDRELATEDDISORDERSASSOCIADONORBITOMEATD眼眶至外耳道REGIONOFINTEREST局部感興趣區(qū)RADIOACTIVITYRATIO放射性計數(shù)值REGIONALCEREBRALBLOODFLOWSINGLEPHOTONEMISSIONCOMPUTEDTOMOGRAPHY局部腦血流單光子發(fā)射計算機斷層

簡介：目的以人類免疫缺陷病毒HIV1為基礎(chǔ)構(gòu)建的慢病毒載體具有感染低分裂潛能細胞、整合目的基因至靶細胞基因組并可以長期穩(wěn)定表達、免疫反應輕微等優(yōu)點，在臨床醫(yī)學和基礎(chǔ)醫(yī)學領(lǐng)域中有廣泛的應用前景。本系統(tǒng)采用“三質(zhì)粒重組痘苗病毒”的方式生產(chǎn)慢病毒載體，期望獲得高拷貝數(shù)、安全型的適合臨床應用的慢病毒載體。方法本系統(tǒng)主要生產(chǎn)方法為構(gòu)建主框架質(zhì)粒PVECRNA、包裝質(zhì)粒PGAGPOL及包膜質(zhì)粒PVSVG。通過脂質(zhì)體將這三個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至BHK21細胞，再用含有T7RNA聚合酶基因的重組痘苗病毒VTF3感染細胞，在生產(chǎn)細胞中，痘苗病毒轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)指導T7RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄和翻譯，然后T7RNA聚合酶指導慢病毒載體CDNA的轉(zhuǎn)錄，痘苗病毒RNA聚合酶指導包裝蛋白P24等以及包膜蛋白水泡性口炎病毒包膜蛋白VSVG的轉(zhuǎn)錄翻譯，最后由VSVG包裝慢病毒載體RNA以及功能蛋白形成慢病毒顆粒，經(jīng)細胞分泌釋放到培養(yǎng)上清中，收集培養(yǎng)上清經(jīng)022ΜM濾膜過濾得到慢病毒載體。結(jié)果RTPCR及測序比對結(jié)果提示培養(yǎng)上清中含有慢病毒載體的基因組RNA。當三質(zhì)粒與輔助痘苗病毒共轉(zhuǎn)染生產(chǎn)細胞BHK21，48H后，共聚焦顯微鏡下觀察到生產(chǎn)細胞表達P24蛋白，并且其主要分布于胞質(zhì)中，而在細胞核中基本不表達，這提示質(zhì)粒PGAGPOL構(gòu)建成功；普通倒置熒光顯微鏡下觀察到生產(chǎn)細胞表達GFP，提示質(zhì)粒PVECRNA構(gòu)建成功，以上結(jié)果也提示生產(chǎn)系統(tǒng)正常工作。將培養(yǎng)上清感染BHK21細胞和293T細胞，48H后，倒置熒光顯微鏡下觀察到BHK21細胞和293T細胞均表達GFP，這提示利用本系統(tǒng)制備慢病毒載體顆粒的可行性。為了提高系統(tǒng)產(chǎn)量，本研究對培養(yǎng)慢病毒載體所用的細胞系、質(zhì)粒用量、重組痘苗病毒和細胞數(shù)比例MOI三個對慢病毒載體生產(chǎn)起關(guān)鍵作用的條件進行優(yōu)化。每個因素取三個作用水平。所有結(jié)果在SPSS130軟件中整理，按照333析因方差分析方法分析實驗數(shù)據(jù)計量資料用X±S表示，P＜005表示差異有顯著性意義。實驗結(jié)果表明細胞系、質(zhì)粒用量以及MOI對載體產(chǎn)量有交互作用F7728，P＜0001。不同種生產(chǎn)細胞株之間慢病毒載體的產(chǎn)量有顯著的統(tǒng)計學差異F1789772、P＜0001。以BHK21細胞的產(chǎn)量最高，載體拷貝數(shù)為703678±3504974108CML，大于VERO細胞產(chǎn)量167089±96855108CML及HEPG2產(chǎn)量41641±18699108CML。不同的MOI對病毒載體產(chǎn)量有顯著統(tǒng)計學差異F311543、P＜0001。其中病毒載體拷貝數(shù)在MOI為1時病毒載體拷貝數(shù)最高。不同的質(zhì)粒用量對病毒載體產(chǎn)量有顯著性統(tǒng)計學差異F137268、P＜0001，病毒載體拷貝數(shù)在質(zhì)粒用量為10ΜG條件下最高。通過不同細胞株產(chǎn)量之間的比較，發(fā)現(xiàn)以BHK21為生產(chǎn)細胞時的系統(tǒng)產(chǎn)量遠大于以HEPG2和VERO細胞為生產(chǎn)細胞時的系統(tǒng)產(chǎn)量。因此以BHK21為生產(chǎn)細胞，對質(zhì)粒用量和MOI進行33析因分析計量資料用X±S表示，P＜005表示差異有顯著性意義。通過結(jié)果可以得知不同的質(zhì)粒用量和MOI存在交互作用F9980、P＜0001。不同的質(zhì)粒用量對病毒載體產(chǎn)量有顯著性差異F92997、P＜0001。其中病毒載體拷貝數(shù)在質(zhì)粒用量為10ΜG時病毒載體拷貝數(shù)最高。采用TAMHANE法方差不齊進行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒用量為5ΜG時的系統(tǒng)產(chǎn)量與質(zhì)粒用量為10ΜGP0031和15ΜGP0021時系統(tǒng)產(chǎn)量均有顯著性差異；質(zhì)粒用量為10ΜG時的系統(tǒng)產(chǎn)量與質(zhì)粒用量為15ΜGP0987時系統(tǒng)產(chǎn)量無顯著性差異。不同的MOI對病毒載體產(chǎn)量有顯著性差異F174778、P＜0001，病毒拷貝數(shù)MOI為1條件下產(chǎn)量最高。采用TAMHANE法方差不齊進行兩兩比較，得到MOI為01和1時，系統(tǒng)產(chǎn)量沒有顯著性差異P0801，MOI為5時，系統(tǒng)產(chǎn)量與MOI為01P001和1P001時的系統(tǒng)產(chǎn)量均有顯著性差異。最后得出BHK21為生產(chǎn)細胞，37℃，5％CO2培養(yǎng)條件下，質(zhì)粒用量為PVECRNA10ΜG、PGAGPOL10ΜG、PVSVG2ΜG時，病毒載體拷貝數(shù)最高，達到1170767±802263108CML。在病毒載體拷貝數(shù)最優(yōu)條件下GFP方法測得載體滴度達到13±018108TUML。結(jié)論我們利用新的生產(chǎn)體系成功制備出慢病毒載體，為之后慢病毒載體生產(chǎn)體系的進一步完善以及臨床應用奠定良好基礎(chǔ)。