簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)XAF1基因誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的研究姓名朱黎明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師涂水平20090501上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文中文摘要2跡法檢測(cè)XAF1基因表達(dá)。2甲基噻唑基四唑（MTT）、ANNEXINVFITCPI雙染和原位末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)感染AD5F35XAF1前后細(xì)胞增殖和凋亡變化；以蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白CASPASE3、CASPASE8、CASPASE9、PARP和CYTOCHROMEC的表達(dá)。3建立肝癌細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型研究AD5F35介導(dǎo)XAF1基因在體內(nèi)對(duì)肝癌生長(zhǎng)的抑制作用及評(píng)價(jià)其治療的安全性。結(jié)果結(jié)果1成功構(gòu)建重組腺病毒AD5F35XAF1、AD5F35NULL和AD5F35EGFP。AD5F35EGFP感染48H，MOI為20時(shí)，92以上的肝癌細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白，提示AD5F35病毒載體有較強(qiáng)的感染效率；XAF1基因的MRNA和蛋白的表達(dá)水平在三株肝癌細(xì)胞株均較低甚至不表達(dá)感染AD5F35XAF1后，該基因的表達(dá)水平均明顯升高；AD5F35XAF1按不同MOI和不同時(shí)間感染SMMC7721細(xì)胞后，XAF1MRNA和蛋白表達(dá)均明顯增高而感染對(duì)照病毒AD5F35NULL的細(xì)胞其XAF1MRNA和蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化。2腺病毒載體介導(dǎo)的XAF1基因呈劑量和時(shí)間依賴性地抑制肝癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，并伴隨CASPASE3、CASPASE8、CASPASE9、PARP等凋亡相關(guān)蛋白的裂解和CYTOCHROMEC的釋放增加，提示其作用與其激活內(nèi)、外源性凋亡通路有關(guān)。

簡(jiǎn)介：目的血液制品的補(bǔ)充是圍手術(shù)期及創(chuàng)傷救治的重要措施之一。普通新鮮冰凍血漿中某些未能檢測(cè)到的病毒如疾病的窗口期輸注到病人體內(nèi)可能造成輸注者感染病毒。有機(jī)溶劑表面活性劑SD處理法能有效地殺滅血漿中的脂包膜病毒。SDP雖然已成功地應(yīng)用于臨床，但其臨床救治效果、適應(yīng)癥、安全性及臨床副作用仍需進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證。本研究著重探討SD血漿輸注后對(duì)機(jī)體凝血、纖溶功能及血液流變學(xué)影響，以便為臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)作用。方法接受四肢、脊柱手術(shù)，并估計(jì)失血量在500ML以上的擇期手術(shù)病人，60例，病人年齡在1860歲。分段隨機(jī)法隨機(jī)分為三組SD血漿組SDP組，N20、普通新鮮冰凍血漿組FFP組，N20、10％羥乙基淀粉組HES組，N20。所選擇病例均采取全身麻醉方式，術(shù)中連續(xù)監(jiān)測(cè)直接橈動(dòng)脈血壓、心電圖、脈搏氧飽和度、呼末二氧化碳分壓、間斷監(jiān)測(cè)中心靜脈壓。在失血量達(dá)400500ML時(shí)開(kāi)始在各組輸注實(shí)驗(yàn)藥物，輸注量為810MLKG，在60MIN內(nèi)輸注完畢，術(shù)中根據(jù)HCT考慮是否輸注紅細(xì)胞。在兩種血漿輸注后留取少量血漿標(biāo)本；各組在輸注試驗(yàn)藥物前、輸注完畢后60MIN、輸注完畢后120MIN采集血樣。檢測(cè)凝血相PT、APTT、TT、INR、FIB、TEG、血小板計(jì)數(shù)、ATⅢ抗凝血酶Ⅲ、蛋白C、D二聚體、TPA組織纖溶酶原激活劑、PAI纖溶酶原激活抑制物含量以及全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、變形指數(shù)、剛性指數(shù)、紅細(xì)胞壓積以及病毒學(xué)檢測(cè)甲肝抗體、乙肝表面抗原、丙肝抗體、愛(ài)滋病抗體、梅毒抗體。采用SPSS110軟件對(duì)各組間進(jìn)行重復(fù)測(cè)量的方差分析法處理，P＜005有顯著性差異，P＜001有非常顯著性差異。結(jié)果1凝血相及TEG檢測(cè)常規(guī)的凝血相檢查在三組病人輸注前后均無(wú)明顯變化P＞005。三組病人在輸注后均朝著凝血速度加快的有利方向發(fā)展，R、K、ANGLE值在輸注血漿組SDP、FFP及血漿代用品組HES均呈現(xiàn)出相似的變化P＜005；輸注SDP及FFP后，血凝塊的強(qiáng)度和血栓的穩(wěn)定性均有不同程度的提高M(jìn)A值明顯升高P＜005，HES組則在輸注后明顯下降P＜001。2輸注HES后體內(nèi)蛋白C及ATⅢ含量在輸注后有不同程度的下降P＜005。SDP組在輸注后血漿內(nèi)蛋白C含量也呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)P＜005，而FFP組輸注前后無(wú)差異性改變P＞005。ATⅢ在兩組輸注血漿的病例中顯示無(wú)明顯改變P＞005。3D二聚體SDP組、FFP組于輸注后呈明顯增高趨勢(shì)P＜005；HES組輸注前后無(wú)明顯改變P＞005。TPASDP組、FFP組在輸注后逐漸增高，直至輸注后120MIN較輸注增高明顯P＜005；HES組輸注后60MIN明顯下降P＜005，而在120MIN后恢復(fù)至輸注前水平P＞005。PAI1FFP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005，SDP組在輸注后120MIN升高明顯P＜001；HES組在輸注后60MIN，120MIN明顯升高P＜001。4血液流變學(xué)全血高切黏度HBV、全血低切黏度LBVFFP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005；SDP組于輸注后120MIN較輸注明顯降低P＜005；HES組輸注后60MIN，120MIN明顯低于輸注前P＜005。血漿黏度PV各組在輸注前后均無(wú)前明改變P＞005。紅細(xì)胞壓積HCTSDP組、FFP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005；HES組輸注后明顯下降P＜001。紅細(xì)胞聚集指數(shù)AISDP組及HES組輸注后60MIN120MIN較輸注前均有明顯下降P＜005，F(xiàn)FP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005。紅細(xì)胞變形指數(shù)DI、及紅細(xì)胞剛性指數(shù)RI各組在輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005。5病毒學(xué)檢測(cè)所有輸注血漿的病例于輸注后均無(wú)新的病毒感染證據(jù)。結(jié)論1血漿進(jìn)行病毒滅活處理與否，輸注后對(duì)機(jī)體血凝塊的強(qiáng)度和血栓的穩(wěn)定性均有不同程度的提高；但輸注羥乙基淀粉后，血凝塊的強(qiáng)度及血栓的穩(wěn)定性有所下降。2SDP及FFP輸注后機(jī)體抗凝血功能優(yōu)于HES組，二者效果相似。3SDP對(duì)于維持機(jī)體失血后凝血與纖溶功能的平衡，防止凝血物質(zhì)過(guò)度消耗上較FFP及HES更為理想。4SDP輸注后可降低血液黏度及紅細(xì)胞聚集能力，改善血液流變學(xué)特性效果與HES相似均優(yōu)于FFP組。5安全性及臨床副作用SD血漿輸注后無(wú)新的病毒感染證據(jù)，臨床副作用與新鮮冰凍血漿相似。經(jīng)病毒滅活的SD血漿在安全性方面更優(yōu)于新鮮冰凍血漿。

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簡(jiǎn)介：該研究通過(guò)對(duì)承載可溶性CD40IGGFC融合基因的質(zhì)粒PCD40插入片斷進(jìn)行測(cè)序，構(gòu)建并合成引物，采用PCR方法獲得目的基因，從而應(yīng)用亞克隆的方法逐步構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒與重組腺病毒基因組質(zhì)粒，經(jīng)線性化后以脂質(zhì)體方法轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，凍融后獲得原代病毒，經(jīng)過(guò)293細(xì)胞的擴(kuò)增，以終點(diǎn)稀釋試驗(yàn)的方法檢測(cè)病毒滴度得到重組腺病毒滴度達(dá)到13X10PFU通過(guò)ELISA與WESTERNBLOTTING方法檢測(cè)目的蛋白可溶性CD40表達(dá)，通過(guò)PCR方法驗(yàn)證目的基因該研究以脂質(zhì)體方法將可溶性CD40IGG1FC重組PCDNA31轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304，通過(guò)200ΜGMLG418抗性篩選轉(zhuǎn)染克隆，或以重組腺病毒按10100PFU細(xì)胞感染上述細(xì)胞，并采用ELISA與WESTERNBLOTTING方法檢測(cè)可溶性CD40表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒感染的內(nèi)皮細(xì)胞ECV304表達(dá)目的蛋白水平顯著高于以重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮細(xì)胞株該研究通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的方法，驗(yàn)證了內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304膜表面存在CD40高表達(dá)，從而為可溶性CD40的功能研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)該實(shí)驗(yàn)研究觀察了體外可溶性CD40表達(dá)載體阻斷CD40CD40L結(jié)合的抗重構(gòu)效果以正常血管內(nèi)皮細(xì)胞為空白對(duì)照，并同時(shí)設(shè)立抗CD40抗體陰性對(duì)照首先將抗CD40抗體與正常內(nèi)皮細(xì)胞孵育10分鐘，再分別加入重組人CD40L，培養(yǎng)24小時(shí)，分別于0，2，6，12，24小時(shí)收集上清液，并通過(guò)ELISA方法定量檢測(cè)可溶性CD40與基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP9）表達(dá)水平總之，該研究應(yīng)用基因重組的方法獲得SCD40IGG1FC重組腺病毒基因組，并通過(guò)293細(xì)胞包裝并擴(kuò)增SCD40IGG1FC重組腺病毒，重組腺病毒能夠感染ECV304，并表達(dá)融合蛋白，其表達(dá)高于SCD40IGG1FC重組PCDNA31轉(zhuǎn)染的ECV304克隆，SCD40重組腺病毒感染的ECF304能夠有效預(yù)防由CD40L所誘導(dǎo)的MMP9表達(dá)

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)對(duì)小兒輪狀病毒性腸炎的臨床病例進(jìn)行調(diào)查探索小兒輪狀病毒性腸炎的發(fā)病特點(diǎn)及其與中醫(yī)證候的關(guān)系初步探討尋求本病的中醫(yī)證型分型規(guī)律為臨床治療本病提供客觀依據(jù)。方法通過(guò)收集110例門診及住院病例進(jìn)行臨床資料調(diào)查建立相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)采用SPSS160統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行描述性分析、頻數(shù)分析、LOGISTIC等方法分析小兒輪狀病毒性腸炎的發(fā)病特點(diǎn)及其與中醫(yī)證候的相關(guān)性初步確立該病主要證候的辨證要素。結(jié)果1、發(fā)病特點(diǎn)男女比例為10751發(fā)病年齡主要在8個(gè)月到2歲以人工喂養(yǎng)為主伴輕度脫水436％中度脫水282伴心肌損害709。2、證候分布特點(diǎn)濕熱瀉為小兒輪狀病毒性腸炎的常見(jiàn)證型占全部中醫(yī)證型的691風(fēng)寒瀉占163脾虛瀉占91傷食瀉占55秋季、冬季多為濕熱瀉病程在69天辨證多為濕熱瀉男性多為濕熱瀉首發(fā)癥狀為發(fā)熱者辨證多為濕熱瀉。3、證侯辨證要素探討LOGISTIC回歸結(jié)果顯示蛋花湯樣大便、小便短黃、苔黃膩、指紋紫滯或脈滑數(shù)為主要辨證依據(jù)。結(jié)論小兒輪狀病毒性腸炎中醫(yī)分型依次為濕熱瀉、風(fēng)寒瀉、脾虛瀉、傷食瀉主要證型與性別、病程、發(fā)病季節(jié)、首發(fā)癥狀具有相關(guān)性濕熱瀉辨證的重要依據(jù)是蛋花湯樣大便、小便短黃、苔黃膩、指紋紫滯或脈滑數(shù)。

簡(jiǎn)介：丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUSHCV是有包膜的下鏈RNA病毒全球約17億人口感染HCV我國(guó)的感染人數(shù)高達(dá)30006000萬(wàn)HCV感染后導(dǎo)致急性和慢性肝炎約20﹪發(fā)展為肝硬化并與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)HCV只能感染人和黑猩猩等靈長(zhǎng)類動(dòng)物目前缺乏合適的動(dòng)物模型和穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)所以對(duì)病毒生活周期、致病機(jī)制及新的抗病毒治療方案的評(píng)價(jià)等進(jìn)展緩慢一、人LDLR分子真核表達(dá)載體的構(gòu)建從能感染HCV的人肝癌細(xì)胞系HEPG2中提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄得到CDNA然后用人LDLRHLDLR基因的特異引物分兩段進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到基因片段HLDLR1和HLDLR2將目的基因HLDLR1和HLDLR2分別經(jīng)用HINDⅢ、BALⅡ和BALⅡ、XBAⅠ雙酶切后回收酶切片段將兩片段共同插入真核表達(dá)載PCDNA3的HINDⅢ和XBAⅠ酶切位點(diǎn)之間構(gòu)建成含全長(zhǎng)HLDLR基因的真核表達(dá)載體二、轉(zhuǎn)染細(xì)胞陽(yáng)性克隆的篩選及鑒定將HLDLR真核表達(dá)載體PCDNA3HLDLR和該室已構(gòu)建的小鼠白蛋白啟動(dòng)子調(diào)控的人CD81HCD81和人SIPLHSIPL的真核表達(dá)載體PCDNA3ALBEPHCD81、PCDNA3ALBEPHSIPL分別轉(zhuǎn)染小鼠肝癌細(xì)胞系HEPAL6G418加壓篩選后，分別在MRNA和蛋白質(zhì)水平上檢測(cè)到穩(wěn)定表達(dá)HCD81分子的陽(yáng)性細(xì)胞克隆由于缺乏HLDLR和HSIPL的單克隆抗體，表達(dá)HLDLR和HSIPL的陽(yáng)性細(xì)胞克隆只是在MRNA水平上做了鑒定三、HCV感染轉(zhuǎn)基因小鼠肝癌細(xì)胞模型的初步建立用含10﹪HCV陽(yáng)性血清的培養(yǎng)基與穩(wěn)定表達(dá)目的分子的小鼠肝癌細(xì)胞HEPAL6在37℃共孵育24H，在染后的第1、3、5、7天分別用套式RTPCR和間接免疫熒光方法進(jìn)行HCVRNA和蛋白水平上的檢測(cè)RNA檢測(cè)顯示在穩(wěn)定表達(dá)HLDLR分子的小鼠肝癌細(xì)胞中該研究證明HLDLR和HCD81等受體導(dǎo)入小鼠肝癌細(xì)胞HEPAL6能使HCV感染小鼠肝癌細(xì)胞，初步建立了HCV感染的小鼠肝癌細(xì)胞模型，為進(jìn)一步建立HCV轉(zhuǎn)基因小鼠模型和篩選抗HCV藥物及疫苗評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)

簡(jiǎn)介：人巨細(xì)胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV為獨(dú)特的Β皰疹病毒，一旦發(fā)生感染，常終身帶毒。目前HCMV感染在引起先天性宮內(nèi)感染的微生物中居于首位。綜合國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果，活產(chǎn)新生兒的先天性HCMV感染率約為03％23％。其中有癥狀或明顯改變的占5％，主要包括黃疸性肝炎、先天性巨結(jié)腸、小頭畸形，智力發(fā)育遲緩等；有輕微癥狀或非典型癥狀改變的占5％；其余90％HCMV感染表現(xiàn)為無(wú)癥狀感染，但其中5％15％HCMV感染患兒多在生后兩年內(nèi)發(fā)生神經(jīng)性耳聾或不同程度的神經(jīng)精神運(yùn)動(dòng)障礙。目前，關(guān)于HCMVULB區(qū)基因的多態(tài)性及其與發(fā)病機(jī)制的關(guān)系成為國(guó)際HCMV最活躍的研究領(lǐng)域。其中人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其在HCMV感染過(guò)程中發(fā)揮一定作用的基因包括UL141、UL142、UL144以及UL146、UL147。HCMVUL141基因表達(dá)產(chǎn)物能夠下調(diào)自然殺傷細(xì)胞NK細(xì)胞一激活配體CD155的表達(dá)，從而介導(dǎo)了HCMV感染細(xì)胞有效防止自然殺傷細(xì)胞的殺傷作用。HCMVUL142基因編碼的包膜糖蛋白能夠下調(diào)自然殺傷細(xì)胞激活性受體NKG2D的配體MHCⅠ相關(guān)分子AMICA，從而也能夠有效的防止NK細(xì)胞的殺傷作用；同時(shí)UL142編碼蛋白還可以抑制NK細(xì)胞的裂解。HCMVUL144編碼一種I型跨膜糖蛋白，據(jù)推測(cè)其編碼產(chǎn)物是一種皰疹病毒穿入介子HVEA或HVEM的類似分子，HVEA是腫瘤壞死因子受體超家族成員TNFR之一，在人類細(xì)胞和體液免疫防御中都發(fā)揮重要作用；有關(guān)UL144不同基因型是否與HCMV感染臨床及預(yù)后相關(guān)尚處于爭(zhēng)論之中。HCMVUL146、UL147基因編碼產(chǎn)物與Α趨化因子白細(xì)胞介素IL8有相同的信號(hào)肽及半胱氨酸空間位置。但到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)上述哪個(gè)基因多態(tài)性與HCMV感染致病性明確相關(guān)；這使我們推測(cè)在這個(gè)區(qū)域的其他基因是否能夠在HCMV致病性方面起重要作用。HCMVUL139、UL140和UL138基因均定位于實(shí)驗(yàn)室株不存在的19個(gè)F中，目前它們編碼蛋白在理論上是存在的，但其生物學(xué)功能還不清楚，少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。本文主要研究HCMVUL139、UL140和UL138基因在低傳代臨床分離株中的多態(tài)性，為探討其多態(tài)性與HCMV感染不同致病性之間的關(guān)系奠定基礎(chǔ)；同時(shí)推測(cè)其編碼蛋白的生物學(xué)功能，進(jìn)而為在分子水平上揭示HCMV感染的致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：本課題從人類肝臟組織中克隆出抗凋亡基因BCLXL，構(gòu)建出滴度較高的含BCLXL基因的重組復(fù)制缺陷型腺病毒，觀察它對(duì)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的抗凋亡作用并將其應(yīng)用于大鼠急性心肌梗死的動(dòng)物模型，評(píng)價(jià)它對(duì)大鼠急性缺血心肌的保護(hù)作用。本文根據(jù)多克隆位點(diǎn)選用XHOⅠ和SALⅠ雙酶切PTARGETTMBCLXL和內(nèi)含GFP的穿梭質(zhì)粒PADTRACKCMV，將BCLXL亞克隆至PADTRACKCMV上，將陽(yáng)性克隆用XHOⅠ和SALⅠ雙酶切鑒定，得到PADTRACKBCLXL轉(zhuǎn)移質(zhì)粒。本文建立心肌細(xì)胞體外缺氧模型，觀察重組BCLXL腺病毒對(duì)缺氧心肌細(xì)胞的抗凋亡能力，評(píng)價(jià)它對(duì)體外缺氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用和可能機(jī)制。本文采用原核細(xì)胞內(nèi)同源重組法快速高效地獲得了含目的基因BCLXL的復(fù)制缺陷型重組腺病毒，在體外心肌細(xì)胞缺氧損傷模型上，腺病毒載體介導(dǎo)外源性BCLXL基因轉(zhuǎn)染通過(guò)抑制線粒體釋放CYTC而阻斷線粒體介導(dǎo)的凋亡通路，能夠有效抑制缺氧心肌細(xì)胞凋亡。本文論述了在大鼠急性心肌缺血模型上，重組腺病毒介導(dǎo)的BCLXL基因可有效轉(zhuǎn)入大鼠心肌，能夠減少梗死區(qū)心肌細(xì)胞凋亡起到保護(hù)急性缺血心肌、改善左室功能的作用。

簡(jiǎn)介：登革病毒DENGUEVIRUS，DEN，即登革熱的病原病毒，是一種由節(jié)肢動(dòng)物作為傳染媒介的人源病毒，屬于黃病毒科黃病毒屬，依抗原性不同分為I、II、III、IV四種血清型。先前，病毒學(xué)家已經(jīng)通過(guò)低溫電鏡三維重構(gòu)技術(shù)獲得了分辨率為95A的結(jié)構(gòu)，在本研究中，我們獲得了野生型DENII病毒成熟顆粒，并得到以下結(jié)果1獲得了分辨率為7A的野生型登革II型成熟顆粒結(jié)構(gòu)，從其結(jié)構(gòu)中可以觀察到EPROTEIN囊膜蛋白中EIEII，EIII三個(gè)結(jié)構(gòu)域以及其跨膜結(jié)構(gòu)域，同時(shí)還可以發(fā)現(xiàn)MPROTEIN膜蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域的連接，清楚地給出了病毒表面各蛋白及其相互作用的三維表示。2第一次顯示出登革病毒跨膜區(qū)域結(jié)構(gòu)中Α螺旋中的扭結(jié)。3通過(guò)對(duì)密度圖的分析，獲得了膜蛋白M與囊膜蛋白E的相互作用位點(diǎn)和作用關(guān)系，對(duì)相應(yīng)突變導(dǎo)致影響病毒粒子組裝的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象給出了理論上的解釋，并首次比較合理的獲得膜蛋白N端氨基酸的可能排布。我們已通過(guò)低溫電鏡單顆粒技術(shù)獲得了高分辨登革結(jié)構(gòu)，從這個(gè)結(jié)構(gòu)中，可以發(fā)現(xiàn)野生登革II型病毒中協(xié)助病毒裝配的重要功能結(jié)構(gòu)段。

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簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文雙自殺基因重組腺病毒靶向治療大腸癌的體外實(shí)驗(yàn)研究姓名林榮凱申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)普通外科指導(dǎo)教師黃宗海20050512摘要系統(tǒng)是目前所急需解決的問(wèn)題?；蛑委煹陌邢蛐允翘岣咧委熜Ч?，減少并發(fā)癥的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以前腫瘤基因治療的靶點(diǎn)多集中在腫瘤細(xì)胞。為了提高自殺基因的靶向性，近年來(lái)有學(xué)者利用腫瘤細(xì)胞特異的啟動(dòng)子來(lái)調(diào)控目的基因，從而使目的基因在特定的腫瘤組織中表達(dá)，這一定程度上提高了治療效果。如采用甲胎蛋白AFP治療肝癌，癌胚抗原CEA治療大腸癌等，但有部分肝癌、大腸癌的AFP、CEA分泌較低而不適用，從而使這些治療的應(yīng)用受到局限。由于以腫瘤細(xì)胞為靶點(diǎn)的基因治療的療效不能令人滿意，新近以腫瘤血管為靶點(diǎn)的基因治療逐漸成為腫瘤治療的熱點(diǎn)。1971年FOLKMAN首先提出腫瘤生長(zhǎng)具有血管依賴性；在血管形成的諸多因素中，VEGF血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR與其主要受體KDR起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，VEGF是已知最強(qiáng)的促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，是血管形成的關(guān)鍵因子。VEGF促進(jìn)腫瘤血管的生長(zhǎng)必須與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGF受體VEGFR相結(jié)合，使VEGFR在細(xì)胞內(nèi)部分磷酸化而激活，通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)一步激活基因表達(dá)、DNA和蛋白合成，從而產(chǎn)生細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)，促使血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖?，F(xiàn)已知的VEGFR有五型，其中II型受體KDR／F1K1與腫瘤的新生血管形成關(guān)系最為密切。腫瘤新生血管除了營(yíng)養(yǎng)腫瘤細(xì)胞促使腫瘤生長(zhǎng)外，還可以通過(guò)其建立的微循環(huán)促使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。研究表明VEGF水平與大腸癌的惡性程度和轉(zhuǎn)移有關(guān)。由于腫瘤的～條毛細(xì)血管可供養(yǎng)8層腫瘤細(xì)胞，故而破壞其一條毛細(xì)血管可導(dǎo)致其灌注區(qū)大量腫瘤細(xì)胞缺血壞死。因此抑制VEGF表達(dá)、抑制腫瘤血管生成可以大大增強(qiáng)抗腫瘤效果，有效抑制腫瘤。研究發(fā)現(xiàn)許多惡性腫瘤組織內(nèi)KDR表達(dá)很高，我們的實(shí)驗(yàn)也表明大腸癌組織中KDR高表達(dá)。因此腫瘤組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖速度比正常組織快50一100倍，并與腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而與腫瘤病人的生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。而且，KDR不僅表達(dá)于腫II

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文進(jìn)展性動(dòng)脈硬化性腦梗死與人巨細(xì)胞病毒感染及其他因素的相關(guān)性的臨床研究姓名申珊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師高玉林何俊瑛20040301中文摘要其中有41例發(fā)生進(jìn)展41114360POCI型36例36179201其中18例發(fā)生進(jìn)展183650LACI型22例22179123其中有4例發(fā)生進(jìn)展422182以POCI型患者發(fā)生進(jìn)展的頻率最高，其次為TACI型和PACT型患者，LACI型患者出現(xiàn)進(jìn)展的頻率最低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各亞型患者發(fā)生進(jìn)展的頻率無(wú)顯著性差異P005。本組資料中發(fā)病后第1天內(nèi)發(fā)生進(jìn)展的頻率最高為3792566，病后前4天內(nèi)共有53名803患者病情發(fā)生進(jìn)展。動(dòng)脈硬化性腦梗死患者病情進(jìn)展多在前4天。單因素分析比較進(jìn)展組和非進(jìn)展組的各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果顯示，在進(jìn)展組和非進(jìn)展組之間，有8個(gè)因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005分別為女性、有糖尿病史、有高脂血癥史、病后發(fā)熱、HCMVIGM抗體陽(yáng)性、空腹血糖水平升高、血清總膽固醇TC水平升高及高密度脂蛋白HDL水平降低。用多元逐步LOGISTIC回歸分析比較進(jìn)展組和非進(jìn)展組的各項(xiàng)指標(biāo)，最后有5個(gè)因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義按A005，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)絕對(duì)值的大小依次排列順序?yàn)椴『蟀l(fā)熱、有糖尿病史、血清高密度脂蛋白HDL和總膽固醇TC水平、HCMVIGM抗體陽(yáng)性結(jié)果。進(jìn)一步比較所有動(dòng)脈硬化性腦梗死患者血清HCMVIGM抗體的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TACI型進(jìn)展性動(dòng)脈硬化性腦梗死患者出現(xiàn)HCMVIGM抗體陽(yáng)性結(jié)果的頻率最高，LACI型進(jìn)展性動(dòng)脈硬化性腦梗死患者出現(xiàn)IGM抗體陽(yáng)性的頻率最低。并且血清檢測(cè)HCMVIGM抗體陽(yáng)性的動(dòng)脈硬化性腦梗死患者的甘油三脂TG水平215士190MMOLL較血清檢測(cè)HCMVIGM抗體陰性的動(dòng)脈硬化性腦梗死患者甘油三脂TG水平171士081

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)第四軍醫(yī)大學(xué)第四軍醫(yī)大學(xué)第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文學(xué)位論文學(xué)位論文學(xué)位論文（題名和副題名）分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）細(xì)小病毒細(xì)小病毒細(xì)小病毒細(xì)小病毒B19B19B19B19與人博卡病毒的基因檢測(cè)與人博卡病毒的基因檢測(cè)與人博卡病毒的基因檢測(cè)與人博卡病毒的基因檢測(cè)及基因特異性探針的初步研究及基因特異性探針的初步研究及基因特異性探針的初步研究及基因特異性探針的初步研究張學(xué)紅（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名張國(guó)成教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院醫(yī)院兒科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱兒科學(xué)論文提交日期200904答辯日期200905論文起止時(shí)間2007年7月至2009年5月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)細(xì)小病毒細(xì)小病毒細(xì)小病毒細(xì)小病毒B19B19B19B19與人博卡病毒的基因檢測(cè)與人博卡病毒的基因檢測(cè)與人博卡病毒的基因檢測(cè)與人博卡病毒的基因檢測(cè)及基因特異性探針的初步研究及基因特異性探針的初步研究及基因特異性探針的初步研究及基因特異性探針的初步研究研究生張學(xué)紅學(xué)科專業(yè)兒科學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院兒科導(dǎo)師張國(guó)成教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師許東亮副主任技師資助基金項(xiàng)目軍隊(duì)“十一五”課題面上項(xiàng)目關(guān)鍵詞細(xì)小病毒B19；人博卡病毒；基因檢測(cè)；基因特異性探針中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2009年5月

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文重組腺病毒ADHNIS介導(dǎo)荷肝癌裸鼠放射性碘攝取的實(shí)驗(yàn)研究姓名沈美娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師趙明201005華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文4ABSTACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEFEASIBILITYOFRADIOIODINETHERAPYFHEPATOCELLULARCARCINOMABYUSINGARECOMBINANTADENOVIRUSVECTDELIVERINGHUMANSODIUMIODIDESYMPTERGENEINTOHEPATOMACELLSMETHODSHEPG2CELLSWERESCINJECTEDINTO20MALEATHYMICNUDEMICEBALBCBILATERALLYWITHTHECONCENTRATIONOF107100ΜLIE107CELLSIN100ΜLOFSTERILENSWHENTHETUMSIZEREACHED810MMINDIAMETERAPPROXIMATELYTWOWEEKSAFTERCELLSINJECTIONTHERECOMBINANTADENOVIRUSVECTADHNISWASADMINISTRATEDINTOTHERIGHTTUMSOFTHENUDEMICE25109PFUIN50ΜLOFPBSENABLINGTHEINFECTEDTUMCELLSEXPRESSIONOFNISPROTEINWHERASEMPTYVIRUSVECTWASADMINISTRATEDINTOTHELEFTTUMSOFTHENUDEMICEASANEGATIVECONTROL72HOURSAFTERINTRATUMALINJECTIONTHEI131IMAGINGOFTHENUDEMICEBEARINGSUBCUTANEOUSHEPATOCELLULARCARCINOMAWASTAKENBYAGAMMACAMMERATHEBIODISTRIBUTIONOFRADIOIODINEAT15H、3H、6H、12HPOSTINJECTIONWASINVESTIGATEDRESULTSHEPATOCELLULARCARCINOMAXENOGRAFTMODELSWERESUCCESSFULLYBUILTATAPERCENTAGEOF875IE35401HAFTERTHEADMINISTRATIONOFRADIOIODINEVIAIPINJECTIONTHEADHNISTREATEDTUMSHOWSOBVIOUSRADIOACTIVEUPTAKEWHERASTHECONTROLTUMSWERENOTVISUALIZEDINTHESCINTIGRAPHYTHEPERCENTAGESOFTHETOTALAMOUNTOFINJECTEDRADIOIODINEPERGRAMOFADHNISTREATEDTUMTISSUEWERE8210771097112586083241066RESPECTIVELYAT15H3H6H12HPOSTINJECTIONIDGOFTHECONTROLTUMSWERE249047158038040010023009IDGOFMUSLESWERE223032、195043、077033029018THEREISNOSIGNIFICANTDIFFERENCEBETWEENTHECONTROLTUMMUSCLEWHERASIDGOFTHEADHNISTREATEDTUMSHOWSSIGNIFICANTSTATISTICALDIFFERENCECOMPAREDWITHTHECONTROLTUMMUSCLECONCLUSIONHEPATOCELLULARCARCINOMACANCONCENTRATERADIOIODINEINVIVOAFTERSUCCEFULLYTRANSFECTEDBYRECOMBINANTADENOVIRUSENCODINGHUMANSODIUMIODIDESYMPTERGENEPROVIDETHEBASISFFURTHERSTUDYTODEMONSTRATETHEFEASIBILYOFRADIOIODINETHERAPYFNONTHYROIDTUMSASHEPATOCELLULARCARCINOMAKEYWDSHUMANSODIUMIODIDESYMPTERRECOMBINANTADENOVIRUSHEPATOCELLULARCARCINOMAGENETARGETEDTHERAPYRADIOIODINETHERAPYNUDEMOUSE

簡(jiǎn)介：西方馬腦炎病毒W(wǎng)ESTERNEQUINEENCEPHALOMYELITISVIRUS，WEEV屬于披膜病毒科TOGAVIRIDAE甲病毒屬ALPHAVIRUSES。它能夠引起人類和馬等動(dòng)物的致死性疾病腦炎，對(duì)馬的病死率可達(dá)50％，對(duì)人的病死率最高可達(dá)10％，嬰幼兒患者常會(huì)導(dǎo)致智力低下、行為失常等。目前已知該病主要分布于加拿大、美國(guó)西部和中部、墨西哥、圭亞那、巴西、阿根廷、秘魯、智利和烏拉圭等國(guó)家。該病在北美地區(qū)呈地方性流行，以不規(guī)則的間隔在馬和人群中引起流行。環(huán)跗庫(kù)蚊CULEXTARSALIS已被證明是北美地區(qū)西方馬腦炎病毒的主要傳播媒介，同時(shí)血清學(xué)調(diào)查證明了鳥(niǎo)類在病毒循環(huán)中的作用。在自然界中，病毒只在野鳥(niǎo)蚊之間進(jìn)行傳播，主要是在環(huán)跗庫(kù)蚊與野鳥(niǎo)之間；人和馬是其非固有的感染對(duì)象，稱為“終末宿主”。此外，經(jīng)證實(shí)能夠自然或?qū)嶒?yàn)室感染W(wǎng)EEV的還有其它庫(kù)蚊屬CULEX、按蚊屬ANOPHELES、伊蚊屬AEDES等7個(gè)屬20多種蚊蟲(chóng)，也有從虱、蜱、螨等節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)分離病毒的報(bào)道。雖然西方馬腦炎只在美洲大陸上發(fā)生，但其仍然是國(guó)際嚴(yán)密監(jiān)控的人畜共患傳染病。除了美洲以外，波蘭和前蘇聯(lián)也曾報(bào)道從正常人血中測(cè)得西方馬腦炎抗體，1962年首次從俄羅斯分離出西方馬腦炎病毒株Y6233。我國(guó)1990年分別從新疆烏蘇縣的一組赫坎按蚊ANOPHELESHYRCANUS和博樂(lè)縣的全溝硬蜱IXODESPERSULCATUS中分離出WEEV，這是在歐亞大陸除俄羅斯外發(fā)現(xiàn)的第二例WEEV分離的報(bào)道。在對(duì)我國(guó)人體血清學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，WEEV抗體陽(yáng)性率為271％。這些情況都表明了WEEV在我國(guó)的存在。近年來(lái)我國(guó)每年均有大量不明原因發(fā)熱及腦炎病例的報(bào)道，提示W(wǎng)EEV可能是我國(guó)感染性疾病的新病原之一。此外，WEEV被列為二類生物恐怖試劑，如果WEEV經(jīng)氣溶膠方式撒布后，當(dāng)?shù)氐乃拗鲃?dòng)物如鳥(niǎo)類等被感染，那么易感蚊蟲(chóng)就有可能通過(guò)吸血將西方馬腦炎傳播給人類，造成更大范圍的傳染病暴發(fā)。因此針對(duì)WEEV對(duì)我國(guó)潛在的威脅，我們首先需要明確在我國(guó)的一些優(yōu)勢(shì)種蚊蟲(chóng)能否感染和傳播WEEV，了解它們對(duì)WEEV的傳播能力，結(jié)合生態(tài)習(xí)性確定哪些是主要的潛在媒介，以便制訂應(yīng)對(duì)一旦西方馬腦炎暴發(fā)后的相應(yīng)的防治策略。在我國(guó)，淡色庫(kù)蚊CXPPALLENS和致倦庫(kù)蚊CXPQUINQUEFIATUS是尖音庫(kù)蚊復(fù)合組CXPIPIENSCOMPLEX成員，嗜吸人血，兼吸禽血，是我國(guó)城鎮(zhèn)的優(yōu)勢(shì)蚊種；白紋伊蚊AEALBOPICTUS和埃及伊蚊AEAEGYPTI是登革熱的主要傳播媒介，也是我國(guó)的重要蚊種；三帶喙庫(kù)蚊CXTRITAENIHYNCHUS廣泛地分布于我國(guó)水稻種植區(qū)，嗜吸畜血，兼吸人、雞血等。本研究以這幾種在我國(guó)十分重要的蚊種為對(duì)象，在實(shí)驗(yàn)室條件下，通過(guò)蚊蟲(chóng)叮咬人工感染W(wǎng)EEV的來(lái)亨雞，采用免疫熒光檢測(cè)病毒抗原和RTPCR檢測(cè)病毒核酸等方法檢測(cè)蚊蟲(chóng)體內(nèi)病毒，確定受試蚊蟲(chóng)對(duì)WEEV的易感性和傳播能力；探討蚊蟲(chóng)對(duì)WEEV的易感機(jī)制，為進(jìn)一步深入理解病毒與媒介的相互作用，尋求對(duì)病媒蚊蟲(chóng)的有效防控手段提供科學(xué)依據(jù)。本工作主要結(jié)果如下1我國(guó)重要蚊種對(duì)WEEV的經(jīng)口感染率在實(shí)驗(yàn)室條件下，叮咬人工感染W(wǎng)EEV的來(lái)亨雞后，淡色庫(kù)蚊、致倦庫(kù)蚊、三帶喙庫(kù)蚊、白紋伊蚊和埃及伊蚊對(duì)WEEV均易感，其感染率分別為455％、600％、800％、367％和250％，不同蚊種之間的感染率有顯著性差異X13709，P0008，其中三帶喙庫(kù)蚊感染率最高，為800％。2我國(guó)重要蚊種對(duì)WEEV的刺叮傳播率在實(shí)驗(yàn)室條件下，淡色庫(kù)蚊、致倦庫(kù)蚊、白紋伊蚊和埃及伊蚊都能通過(guò)刺叮吸血將體內(nèi)的WEEV傳播給易感動(dòng)物1～3日齡的來(lái)亨雞，傳播率分別為4074％、5313％、5714％和4516％，不同蚊種之間的傳播率沒(méi)有顯著性差異X1879，P0598。3WEEV在蚊蟲(chóng)體內(nèi)的散布率在實(shí)驗(yàn)室條件下，WEEV在已感染的淡色庫(kù)蚊、致倦庫(kù)蚊、三帶喙庫(kù)蚊、白紋伊蚊和埃及伊蚊體內(nèi)均能擴(kuò)散至足，散布率分別為600％、611％、750％、545％和500％。不同蚊種間的散布率沒(méi)有顯著性差異X1229，P0873。4WEEV在感染蚊蟲(chóng)體內(nèi)擴(kuò)散與蚊蟲(chóng)經(jīng)口傳播病毒的相關(guān)性研究本研究通過(guò)對(duì)感染和傳播實(shí)驗(yàn)中的單只蚊蟲(chóng)進(jìn)行標(biāo)記，根據(jù)它們感染、擴(kuò)散和傳播的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，感染病毒并擴(kuò)散至足的絕大多數(shù)蚊蟲(chóng)能夠?qū)⒉《緜鞑ソo易感動(dòng)物、也有極少數(shù)不能經(jīng)口傳播；一些感染病毒但未擴(kuò)散至足的蚊蟲(chóng)也是一部分能夠經(jīng)口傳播而另一部分不能；還存在一些體內(nèi)檢測(cè)不出病毒，其叮咬的來(lái)亨雞卻能被感染。5西方馬腦炎病毒抗原在經(jīng)口感染淡色庫(kù)蚊體內(nèi)的分布淡色庫(kù)蚊在經(jīng)口感染W(wǎng)EEV3～4天后，部分蚊蟲(chóng)中腸壁見(jiàn)有WEEV的侵染。個(gè)別蚊蟲(chóng)后腸出現(xiàn)陽(yáng)性斑塊；第7～10D，部分蚊蟲(chóng)中腸、馬氏管、卵巢、后腸均見(jiàn)病毒侵染；第10～14D，除中腸和卵巢等呈陽(yáng)性反應(yīng)外；可見(jiàn)唾液腺亦被病毒侵染；但有些蚊蟲(chóng)個(gè)體僅在中腸有陽(yáng)性反應(yīng)，其它組織器官均為陰性；還有部分蚊蟲(chóng)個(gè)體組織器官均未見(jiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。因此認(rèn)為，淡色庫(kù)蚊對(duì)WEEV的易感性存在個(gè)體差異，不易感的個(gè)體體內(nèi)可能存在中腸屏障，而傳播能力的差異可能是由于唾液腺屏障的存在。