簡介：本研究分為三部分第一部分大鼠TC1基因的擴(kuò)增及重組慢病毒載體的構(gòu)建目的構(gòu)建攜帶大鼠TC1TRANSDUCEROFREGULATEDCREBACTIVITY1）目的基因的重組慢病毒，并初步檢測其體外表達(dá)目的基因的能力。方法PCR法擴(kuò)增出TC1編碼區(qū)片段，定向克隆入PGCFU載體，LIPOFECTAMINE2000法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝攜帶TC1目的基因的重組慢病毒，測序證實為TC1重組慢病毒后大量擴(kuò)增，以實時定量PCR法測定病毒滴度，WESTERNBLOT法檢測TC1在293T細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建了攜帶大鼠TC1目的基因的重組慢病毒，并證實其在293T細(xì)胞中可高水平表達(dá)TC1。結(jié)論大鼠TC1重組慢病毒可在體外高表達(dá)其所攜帶目的基因，為研究TC1在脊髓損傷中的作用打下基礎(chǔ)。第二部分TC1重組慢病毒的體外生物學(xué)效應(yīng)目的研究TC1重組慢病毒載體對大鼠原代脊髓運動神經(jīng)元（SMN）的生物學(xué)效應(yīng)。方法取13D新生大鼠進(jìn)行原代SMN培養(yǎng)，用構(gòu)建好的TC1重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染SMN，應(yīng)用RTPCR、WESTERNBLOT及細(xì)胞形態(tài)學(xué)驗證其對SMNTC1MRNA、蛋白表達(dá)的影響，以及對SMN生長情況的作用。結(jié)果成功培養(yǎng)出大鼠原代SMN，用構(gòu)建的TC1重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染原代SMN，可以明顯提高TC1MRNA和蛋白的表達(dá)水平，并改善了神經(jīng)元軸突生長情況。以正常組和空白載體組細(xì)胞作對照，實驗組TC1MRNA和蛋白表達(dá)量均有明顯提高P結(jié)論TC1重組慢病毒載體可以有效地提高SMNTC1基因表達(dá)并促進(jìn)其生長，為后續(xù)動物實驗奠定了基礎(chǔ)。第三部分TC1重組慢病毒的體內(nèi)生物學(xué)效應(yīng)目的建立大鼠脊髓損傷模型，研究TC1重組慢病毒載體在脊髓損傷修復(fù)中的作用。方法取健康成年SD大鼠，切斷T10脊髓，建立脊髓損傷動物模型，術(shù)中將TC1重組慢病毒載體和PGCFU載體注入損傷區(qū)，術(shù)后2周、4周、6周進(jìn)行BBB評分，并通過RTPCR、WESTERNBLOT檢測TC1MRNA及蛋白表達(dá)，同時進(jìn)行免疫組化染色觀察神經(jīng)纖維再生情況。結(jié)果術(shù)后第2周，實驗組除TC1蛋白表達(dá)水平上調(diào)外組P＜005，TC1MRNA表達(dá)、BBB評分以及損傷區(qū)神經(jīng)纖維再生情況與陰性對照組沒有差異P結(jié)論TC1重組慢病毒載體可有效改善大鼠脊髓損傷，而且效果持久，具有很好的應(yīng)用前景。

簡介：點擊查看更多不同抗病毒方案治療慢性乙型肝炎對患者T細(xì)胞亞群的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的探討大劑量甲基強(qiáng)的松龍與IVIG聯(lián)合治療兒童重癥病毒性腦炎的臨床療效。方法52例兒童重癥病毒性腦炎隨機(jī)分為兩組對照組20例，治療組32例。對照組給予抗病毒、降顱壓等對癥治療，治療組加用大劑量甲基強(qiáng)的松龍（METHYLPREDNISOLONE，MP）和IVIGINTRAVENOUSIMMUNEGLOBULIN，靜脈用人免疫球蛋白）治療。比較兩組病例熱退時間、意識好轉(zhuǎn)時間、抽搐停止時間、肢癱好轉(zhuǎn)時間及平均住院時間。結(jié)果治療組熱退時間、意識障礙好轉(zhuǎn)時間、抽搐停止時間、肢癱好轉(zhuǎn)時間及平均住院時間均與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異P結(jié)論大劑量甲基強(qiáng)的松龍與IVIG聯(lián)合治療兒童重癥病毒性腦炎療效優(yōu)于常規(guī)治療，可較快緩解病情，減少死亡，值得推廣。

簡介：目的1體外培養(yǎng)JEGⅢ確定ADHGF感染人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞JEGⅢ的最佳感染強(qiáng)度檢測不同時間點細(xì)胞對HGF的表達(dá)水平初步探討肝細(xì)胞生長因子HGF對JEGⅢ的調(diào)節(jié)作用為下一步實驗奠定基礎(chǔ)。2ADHGF以最佳感染強(qiáng)度轉(zhuǎn)染JEGⅢ建立乙型肝炎病毒HBV感染轉(zhuǎn)染ADHGF的JEGⅢ細(xì)胞模型從形態(tài)學(xué)及定量兩方面探討HGF對HBV感染JEGⅢ的作用為HBV宮內(nèi)感染的防治提供理論依據(jù)。方法第一部分體外培養(yǎng)JEGⅢ以攜帶HGF基因的重組腺病毒ADHGF為實驗組攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒ADGFP為對照組不同感染強(qiáng)度MOI1025501002004008001600轉(zhuǎn)染絨毛膜癌細(xì)胞系JEGⅢ通過MTT法檢測細(xì)胞損傷程度篩選和確定最佳MOI高轉(zhuǎn)染效率且對細(xì)胞低損傷作為下一步攜帶HGF基因的重組腺病毒ADHGF轉(zhuǎn)染細(xì)胞的最優(yōu)條件。以最佳的MOI轉(zhuǎn)染JEGⅢ后0244872H后收集細(xì)胞上清用ELISA法檢測HGF蛋白的表達(dá)水平。第二部分基于前期研究于5％CO237℃的培養(yǎng)箱中用含5血清濃度的培養(yǎng)液使細(xì)胞饑餓培養(yǎng)JEGⅢ細(xì)胞至50鋪滿時ADHGF以最佳MOI200PFUCELL轉(zhuǎn)染JEGⅢ48H后再加入HBV陽性血清蘭州軍區(qū)總醫(yī)院檢驗科采自乙型肝炎志愿者2108HBVDNAL使其終濃度為100DNA細(xì)胞共同孵育24H后每隔12H分別于感染HBV后2436486072H收集上清及細(xì)胞將細(xì)胞用PBS洗一遍800RMIN離心10MIN棄去上清再加入200ΜLPBS置于70℃冰箱中冷凍30分鐘再放入37℃水浴中反復(fù)凍融三次1000RMIN離心10MIN吸取上清與所收集培養(yǎng)上清混勻分別用HE、GIMSA染色及透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化熒光定量PCR檢測培養(yǎng)物中HBVDNA。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS120軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果1以高轉(zhuǎn)染效率且對細(xì)胞低損傷為標(biāo)準(zhǔn)確定最佳MOI為200PFUCELL。2ADHGF轉(zhuǎn)染JEGⅢ不同時間段后ELISA法檢測HGF表達(dá)水平的結(jié)果顯示ADHGF有效的導(dǎo)入了細(xì)胞且HGF表達(dá)水平48H內(nèi)有時間依賴性72H開始下降。3HE染色顯示Ⅱ組較Ⅰ組細(xì)胞有較明顯染色質(zhì)濃縮、邊緣化核膜裂解和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。Ⅲ組較空白對照組無明顯形態(tài)學(xué)改變。GIMSA染色與HE染色結(jié)果相近。4電鏡顯示Ⅱ組較Ⅰ組細(xì)胞有較明顯細(xì)胞內(nèi)線粒體嵴模糊不清或消失核周間隙增寬線粒體擴(kuò)張核膜模糊等現(xiàn)象且Ⅱ組胞質(zhì)內(nèi)可見球形HBSAG顆粒呈圓球形Ⅳ組、空白對照組可見胞膜完整清晰核仁大而明顯細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有豐富的脂滴、線粒體、高爾基器、糖原顆粒以及大量游離的核糖體兩細(xì)胞膜接近處可見明顯的細(xì)胞連接為橋粒連接。Ⅲ組較Ⅳ組無明顯變化。5分別于24H、36H、48H、60H、72H收集培養(yǎng)上清及細(xì)胞內(nèi)的病毒在轉(zhuǎn)染ADHGF的情況下各時間點收集的標(biāo)本中檢測到的HBVDNA量均低于未轉(zhuǎn)染ADHGF的情況有統(tǒng)計學(xué)意義P005提示HGF對HBV感染滋養(yǎng)細(xì)胞有保護(hù)作用而各時間點之間HBVDNA量差異不顯著。結(jié)論1HGF可有效導(dǎo)入JEGⅢ并促進(jìn)細(xì)胞的增殖。2HGF可有效抑制HBV感染滋養(yǎng)層細(xì)胞。

簡介：點擊查看更多流式熒光微球技術(shù)高通量篩查血液中多種病毒模型的建立及檢測血液感染HBV、HCV的應(yīng)用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙型肝炎是嚴(yán)重的肝臟感染性疾病。目前全世界慢性HBV感染者已經(jīng)超過4億，乙肝相關(guān)肝硬化和肝癌的死亡率也逐年增加，嚴(yán)重威脅著人類健康。由于目前HBV感染后慢性化的確切機(jī)制尚不清楚，所以無法制定出行之有效的治療方法和方案。HBV作為嗜肝性DNA病毒，本身對肝細(xì)胞并沒有損害，在清除病毒和造成肝細(xì)胞損傷中起關(guān)鍵作用的是CD8細(xì)胞毒性T細(xì)胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTE，CTL。急性乙肝病毒感染可激發(fā)強(qiáng)烈的多表位特異性CTL應(yīng)答；但慢性感染時，特異性CTL增殖、細(xì)胞因子分泌及細(xì)胞毒效應(yīng)功能均發(fā)生不同程度損傷，與HBV感染持續(xù)不能清除直接相關(guān)，其原因仍待研究。T細(xì)胞的分化、活化及發(fā)揮效應(yīng)功能除了需要來自TCR的第一信號，還需要來自共刺激分子的輔助調(diào)節(jié)信號。PD1是CD28家族的共刺激分子，與配體PDL結(jié)合后可阻斷TCR信號的傳遞。眾多研究表明，PD1PDL共刺激信號通路在T細(xì)胞活化、增殖和細(xì)胞因子分泌等各個過程中均發(fā)揮重要的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。2006年，BARBER小組的研究工作發(fā)現(xiàn)，在淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒LCMV感染小鼠體內(nèi)，功能衰竭的T細(xì)胞表達(dá)PD1上調(diào)，阻斷PD1與其配體之間的相互作用能使衰竭的T細(xì)胞恢復(fù)活力并顯著降低病毒載量。此后，在HIV，HCV等慢性病毒感染性中也相繼發(fā)現(xiàn)PD1PDL1通路與病毒特異性CD8T細(xì)胞功能障礙有關(guān)，該通路在慢性HBV感染中的研究也已初見報道。但是，PD1PDL通路對HBV特異性CTL分化、活化過程的影響目前仍不清楚，而特異性CTL的分化和活化是其發(fā)揮效應(yīng)功能的基礎(chǔ)。另一方面，PD1PDL通路在HBV的感染的靶器官肝臟中的表達(dá)及其與疾病發(fā)展的關(guān)系仍未見報道。因此，為更全面地認(rèn)識PD1PDL共刺激信號通路在乙型肝肝炎病毒慢性感染中對特異性CTL功能的調(diào)節(jié)作用，我們開展了以下研究首先，利用多色流式細(xì)胞儀結(jié)合PENTAMER技術(shù)檢測了PD1分子在HBV特異性CTL的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，慢性乙肝患者HBV特異性CTL表達(dá)PD1百分率顯著增高，顯著高于作為對照的CMV特異性CTL及外周血總CD8T細(xì)胞。而分析PD1的表達(dá)水平與患者血漿病毒載量及性別、年齡和ALT水平之間關(guān)系顯示，PD1的表達(dá)水平與血漿中HBV病毒的載量正相關(guān)，與其他指標(biāo)無顯著相關(guān)性。以上結(jié)果提示，可能是患者體內(nèi)高載荷的HBV病毒引起了PD1表達(dá)的上調(diào)。那么PD1表達(dá)的上調(diào)對特異性CTL的分化、活化及多種抗病毒效應(yīng)功能是否發(fā)生影響呢結(jié)合表面分化抗原CD27、CD45RA和趨化因子受體CCR7的表達(dá)，我們觀察了在T細(xì)胞不同分化階段PD1表達(dá)的變化，我們發(fā)現(xiàn)在CTL細(xì)胞分化的不同階段，PD1表達(dá)存在顯著差異。CCR7CD27CD45RA初始CD8T細(xì)胞PD1表達(dá)極少，在遭遇抗原后CD45RAPD1表達(dá)上調(diào)。在分化中期CCR7CD27CD45RAT細(xì)胞上PD1表達(dá)達(dá)到最高。而分化至終末階段的CCR7CD27CD45RAT細(xì)胞中，PD1表達(dá)又復(fù)下調(diào)。PD1表達(dá)與CTL分化之間存在明顯關(guān)聯(lián)。而慢性乙肝感染患者特異性CTL多集中于分化中后階段，高表達(dá)PD1分子；但作為對照的CMV特異性CTL大多高分化，PD1表達(dá)水平較低的。因此，分化與PD1表達(dá)的差異使HBV特異性CTL可能接收更強(qiáng)的抑制信號。通過表面活化標(biāo)志檢測，我們發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者體內(nèi)PD1CTL高表達(dá)活化標(biāo)志CD38和HLADR。接著利用胞內(nèi)因子染色法檢測抗病毒效應(yīng)分子的表達(dá)，我們發(fā)現(xiàn)PD1特異性CTL胞內(nèi)仍有較高的GRB的表達(dá)，但PERFMN表達(dá)低下、IFNΓ表達(dá)極低。以上表型提示慢性乙肝患者PD1特異性CTL雖然高度活化，但實際處于功能受損狀態(tài)。PD1PDL通路的抑制效應(yīng)不僅取決于PD1的表達(dá)量，還取決于PD1與其配體配接的程度，因此慢性HBV感染時PDL的表達(dá)量也至關(guān)重要。于是我們檢測了外周血淋巴和單核細(xì)胞中PD1配體PDL1和PDL2的表達(dá)。結(jié)果顯示，慢性乙肝患者外周血單核細(xì)胞表面PDL1表達(dá)顯著上調(diào)，而T和B淋巴細(xì)胞群體表面PDL1的表達(dá)無顯著變化，同時PDL2在單核和淋巴細(xì)胞中的表達(dá)也沒有顯著變化。結(jié)合患者臨床信息分析發(fā)現(xiàn)，外周血單核細(xì)胞PDL1的表達(dá)量與血漿ALT水平顯著正相關(guān)。這可能提示，在肝臟炎癥增加的同時機(jī)體也開始上調(diào)免疫抑制因子以控制炎癥損傷程度。慢性乙肝感染時單核細(xì)胞上調(diào)PDL1表達(dá)是否抑制特異性T細(xì)胞的應(yīng)答阻斷PD1PDL1通路又是否能夠恢復(fù)特異性T細(xì)胞的功能為回答上述問題，我們進(jìn)行了PD1PDL1通路阻斷實驗分離慢性乙肝感染患者外周血PBMC進(jìn)行體外培養(yǎng)，其中加入特異性表位肽刺激特異性CTL發(fā)生活化和增殖，在以上體系中利用PDL1的阻斷性抗體阻斷PD1PDL通路后觀察特異性CTL增殖和效應(yīng)功能的變化。結(jié)果顯示，加入阻斷性抗體以后，特異性CTL的增殖能力顯著增強(qiáng)，清除病毒的重要效應(yīng)因子IFNΓ的分泌能力顯著提高。上述結(jié)果提示，在慢性HBV感染患者外周血中，PD1PDL1通路參與特異性CTL的功能障礙的調(diào)節(jié)，阻斷該通路能使功能受損的特異性CTL的增殖和細(xì)胞因子分泌效應(yīng)功能恢復(fù)。肝臟是HBV特異性感染的靶器官，且有研究表明PD1PDL1通路參與肝內(nèi)T細(xì)胞免疫耐受的調(diào)節(jié)。因此，為闡述PD1PDL這一重要的免疫調(diào)節(jié)通路在慢性乙肝感染肝臟的表達(dá)及其在疾病進(jìn)程中的可能作用，我們進(jìn)行了以下研究首先，利用免疫組織化學(xué)方法檢測了PD1在慢性乙肝感染患者肝活檢組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，慢性乙肝感染肝組織中PD1陽性細(xì)胞顯著增加，且PD1分子主要表達(dá)在匯管區(qū)和肝小葉中浸潤單個核細(xì)胞上。免疫雙熒光染色實驗提示，PD1表達(dá)在CD4和CD8T淋巴細(xì)胞以及少量CD20B淋巴細(xì)胞上。這提示，在慢性乙肝感染肝臟中浸潤著大量活化的淋巴細(xì)胞，它們表達(dá)PD1分子上調(diào)。接著我們檢測了PD1的兩個配體在慢性乙肝感染肝臟中的表達(dá)。結(jié)果顯示，PDL1的表達(dá)在HBV慢性感染肝臟中顯著上調(diào)，除了浸潤炎癥細(xì)胞以外，KUPFFERS細(xì)胞、血竇內(nèi)皮細(xì)胞及DC細(xì)胞等大量肝臟原位抗原遞呈細(xì)胞均上調(diào)PDL1的表達(dá)。而另一個配體PDL2的表達(dá)則沒有顯著變化。比較炎癥損傷程度不同及炎癥細(xì)胞浸潤程度不同的肝組織中原位抗原遞呈細(xì)胞上PDL1的表達(dá)，我們發(fā)現(xiàn)PDL1的表達(dá)與肝組織炎癥損傷和炎癥細(xì)胞浸潤程度均密切相關(guān)。上述結(jié)果提示，肝組織的炎癥損傷和免疫應(yīng)答上調(diào)了肝臟原位抗原遞呈細(xì)胞表面PDL1的表達(dá)，這可能起到控制免疫反應(yīng)強(qiáng)度，保護(hù)肝組織的作用。因此，PD1PDL1抑制性通路在慢性乙肝感染肝臟中上調(diào)可能起著雙重作用一方面保護(hù)肝組織免受免疫病理損傷，另一方面也導(dǎo)致特異性免疫應(yīng)答下調(diào)、病毒持續(xù)不能清除。本研究發(fā)現(xiàn)，慢性乙肝感染患者外周血及肝組織中抑制性共刺激分子PD1PDL1通路均上調(diào)，阻斷該通路能緩解特異性CTL的功能低下狀態(tài)。這對于認(rèn)識HBV感染的慢性化機(jī)制有著重要意義，PD1PDL1通路的精確調(diào)控可能為慢性乙型肝炎的治療提供新的線索和思路。

簡介：點擊查看更多EB病毒潛伏膜蛋白2A（LMP2A）特異性CTL的體外誘導(dǎo)及其特性的初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：天津大學(xué)博士學(xué)位論文睡眠剝奪對大腦認(rèn)知能力及腦電特征的影響研究姓名李寧申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師劉海嬰王明時20081201三域的特征，相位相干特征和非線性動力學(xué)特征，形成了一個相對完整的對SD影響腦認(rèn)知的評價方法，為本領(lǐng)域已有的認(rèn)知科學(xué)推斷提供了客觀支持，更深一步探索了SD的作用機(jī)制，為將來提出對SD的對抗措施提供了客觀依據(jù)。關(guān)鍵詞睡眠剝奪腦電事件相關(guān)電位時頻轉(zhuǎn)換平行因子分解相位相干性非線性分析腦信息圖

簡介：點擊查看更多語言理解中時制信息加工的認(rèn)知神經(jīng)機(jī)制——來自事件相關(guān)電位的證據(jù).pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的研究慢性乙型肝炎CHRONICHEPATITISB，CHB患者乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV全基因組基因變異及其與干擾素INTERFERON，IFNΑ療效的關(guān)系。方法PCR擴(kuò)增并克隆干擾素治療前慢性乙型肝炎患者血清中HBV全基因組DNA，測序并進(jìn)行基因變異分析及其與干擾素療效的關(guān)系。結(jié)果獲得干擾素治療前慢性乙型肝炎患者來源的33株HBV全基因組DNA，它們均屬于C或B基因型。與標(biāo)準(zhǔn)株相比，HBV缺失變異在B、C基因型間的發(fā)生率分別為143％214和632％1219。其中，HBVPRES2NT19NT56缺失突變只發(fā)生在C基因型干擾素治療有效的患者中，發(fā)生率為152％533，占C基因型有效病例的50％510；TPSPACE區(qū)6株缺失變異HBV全基因組DNA中，5例干擾素治療無效，1例有效。HBV插入突變一例，3460BP，B基因型，干擾素治療無效病例。HBV點突變結(jié)果顯示4例C基因型NTG2699T變異為干擾素有效病例，占C基因型有效病例的40％，且發(fā)生在無PRES2缺失的病例中。因此，PRES2缺失變異和NTG2699T變異占C基因型有效病例的90％可作為預(yù)測干擾素應(yīng)答的因素。另外，體外實驗有抗干擾素作用的T1504C、A1762T、G1764A、G1896A變異在本研究中對干擾素療效無影響。TP257研究發(fā)現(xiàn)，B基因型的H135Y和Q176H；C基因型的N89D和K142QK142E可能有抗干擾素作用。結(jié)論HBV缺失變異在B、C基因型間的發(fā)生率存在顯著性差異；HBVPRES2缺失突變和NTG2699T變異與C基因型干擾素應(yīng)答相關(guān)；B基因型的H135Y和Q176H；C基因型的N89D和K142QK142E可能有抗干擾素作用。

簡介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文EPSTEINBARR病毒動態(tài)檢測在鼻咽癌診斷和治療中的意義姓名王巍巍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床檢驗診斷學(xué)指導(dǎo)教師唐發(fā)清20080501中南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要％。在30例鼻咽癌患者治療前和治療后1、2、3、4、5、6、7周及3月后復(fù)查9次EBVVCA／IGA檢測中，多數(shù)病例17／24治療后EBVVCA／IGA降低，部分患者6／24治療后EBVVCA／IGA變化不明顯。4通過分析EBVVCA／IGA、EBVDNA與鼻咽癌腫瘤大小相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)EBVDNA拷貝數(shù)與鼻咽癌腫瘤體積有一定相關(guān)性。結(jié)論1將巢式PCR技術(shù)與熒光定量PCR技術(shù)結(jié)合，成功建立了血漿EBVDNA的檢測方法一一巢式熒光定量PCR。2通過動態(tài)監(jiān)測鼻咽癌患者治療過程中血漿EBVDNA拷貝數(shù)，明確了EBVDNA水平與鼻咽癌治療療效、腫瘤大小的關(guān)系。EBVDNA在一定程度上反映鼻咽癌腫瘤大小。3EBVVCA／IGA和EBVDNA拷貝數(shù)聯(lián)合用于鼻咽癌的早期篩查，具有一定的臨床價值。關(guān)鍵詞LMPL，EBVDNA，EBVVCA／IGA，EB病毒，鼻咽癌N

簡介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文子宮頸癌篩查及認(rèn)知現(xiàn)狀的調(diào)查分析姓名顧曉芬申請學(xué)位級別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)教師高曉虹20090601檢出率分別為212％、150％和O36％，早診率均達(dá)到90％以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于同期當(dāng)?shù)蒯t(yī)院早診率；對CINII及以上的病例進(jìn)行治療，早治率均達(dá)到75％以上，江西靖安的早治率已達(dá)L00％。對各年齡組CINII及以上的檢出率進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)深圳市以45～49歲年齡組為最高，其次為3034歲和4044歲年齡組；山西襄垣以50～54歲年齡組為最高，其次為45～49歲和35～39歲年齡組；江西靖安以30～34歲和55～59歲年齡組較高。除山西襄垣外，深圳和江西靖安現(xiàn)場研究對象對子宮頸癌的認(rèn)知率及對篩查目的的認(rèn)知率均超過70％，而且隨著文化程度的增加，認(rèn)知率也隨之增加P005。對參加篩查的原因進(jìn)行分析，結(jié)果顯示深圳現(xiàn)場以自愿參加為主，而山西、江西現(xiàn)場則以職能部門組織為主。三個現(xiàn)場的研究對象對篩查必要性的認(rèn)識及篩查費用的支付意愿都很高，達(dá)到80％以上，但支付能力較低，且不愿意支付費用的原因以費用高和經(jīng)濟(jì)困難為主。結(jié)論①開展子宮頸癌的篩查可以提高早診率和早治率。②不同地區(qū)子宮頸癌高發(fā)年齡段不同。③受教育程度是影響子宮頸癌及其篩查目的認(rèn)識水平的主要因素。④婦女對子宮頸癌篩查必要性的認(rèn)識及篩‘查費用的支付意愿都很高，但支付能力較低，目前愿意支付的費用不能滿足篩查需求。關(guān)鍵詞子宮頸癌篩查早診早治認(rèn)知意愿2

簡介：四川大學(xué)博士學(xué)位論文重組人內(nèi)皮抑素腺病毒基因治療小鼠LEWIS肺癌的實驗研究姓名羅鋒申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師魏于全20050401四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文第一部分LEWIS肺癌縱隔轉(zhuǎn)移動物模型的建立方法探討研究生羅鋒導(dǎo)師魏于全教授中文摘要目的建立LEWIS肺癌縱隔轉(zhuǎn)移動物模型。方法小鼠LEWIS肺癌細(xì)胞體外培養(yǎng)，以5X104LEWIS肺癌細(xì)胞混懸液經(jīng)皮穿刺植入肺內(nèi)，此穿刺植入腫瘤過程每只動物控制在LO秒內(nèi)完成，手術(shù)死亡率5％。分期分批處死動物，解剖觀察測量稱重肺部腫瘤及縱隔轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。器官腫瘤組織切片HE染色組織病理學(xué)檢查。結(jié)果植入腫瘤后約7天肉眼可見動物肺內(nèi)腫瘤原發(fā)結(jié)節(jié)，約14天肉眼可見動物縱隔腫瘤轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)結(jié)節(jié)，腫瘤病灶隨著時間延長而增大增多，1825天縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)增大融合，與縱隔組織器官心包大血管粘連。在第11，15，18，21天，肺內(nèi)原發(fā)腫瘤體積分別為3．08±0．95MM3，29．62±8．17M3，152．3±36．11INT03，268．2±52．68NULL3。在第15，18，21天，縱隔轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)重量分別為18．4414．6MG，17938．9MG，36890．2ⅢG。病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，在接種后的第15，18天肺內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長，接種后的第21，25天腫瘤結(jié)節(jié)中心出現(xiàn)中心性壞死與出血，在接種后14天出現(xiàn)縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶。結(jié)論建立的LEWIS肺癌縱隔轉(zhuǎn)移動物模型與臨床上肺癌患者病情演變過程相似，提示該模型可作肺癌臨床生物學(xué)行為深入研究、腫瘤臨床新藥研究開發(fā)、腫瘤藥物治療療效評估的技術(shù)平臺。關(guān)鍵詞LEWIS肺癌，動物模型，縱隔轉(zhuǎn)移

簡介：目的原發(fā)性肝癌HEPATOCELLULARCARCINOMAHCC是世界第三大導(dǎo)致死亡的惡性腫瘤。HCC發(fā)生的其中一個危險因素是乙型肝炎病毒（HEPATITISBVIRUS，HBV）感染。目前全世界約有4億人感染HBV，中國約占13。HBV基因組由部分環(huán)狀的雙鏈DNA組成，全長約為32KB，基因組包含4個開放閱讀框架，分別為C、P、S和X區(qū)。乙型肝炎病毒X基因（HEPATITISBVIRUSXHBX）編碼154個氨基酸，在病毒的復(fù)制等方面發(fā)揮重要作用。大量的研究報道表明，HBX蛋白在HCC的發(fā)生中發(fā)揮重要的作用。作為一個多功能的調(diào)節(jié)因子，HBX能夠和細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子相互作用，從而影響細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性。此外，HBX還可涉及一些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，例如WNTΒCATENINRASMAPK，SAPKJNK，NFΚB，F(xiàn)AK等。WNTΒCATENIN信號通路調(diào)控著細(xì)胞的衰老、死亡、增殖、轉(zhuǎn)移，以及在決定胚胎形態(tài)等方面都發(fā)揮著重要的作用。大量的研究表明，WNT信號通路的異?；罨梢詤⑴c腫瘤的發(fā)生，例如肺癌、結(jié)腸癌等。以前也有研究表明，WNT信號通路的異常活化也可導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。在肝癌的發(fā)生中，除了WNTΒCATENIN信號通路組成部分的基因突變外，一些表觀遺傳修飾也可導(dǎo)致這條信號通路的異常活化。分泌卷曲相關(guān)蛋白SECRETEDFRIZZLEDRELATEDPROTEINS，SFRPS是一種WNT信號的拮抗因子。SFRPS家族共有5個分泌性糖蛋白家族成員，包括SFRP1～5，由約300個氨基酸殘基組成。有研究報道表明，由于SFRPS啟動子區(qū)甲基化導(dǎo)致其表達(dá)的下調(diào)，在HBV相關(guān)的HCC中發(fā)揮重要作用。相反，回復(fù)SFRP1的表達(dá)，可以有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力。這些數(shù)據(jù)表明，SFRPS基因的表觀沉默表達(dá)，在由WNTΒCATENIN信號通路異?；罨瘜?dǎo)致的HCC中發(fā)揮重要作用。也有研究報道表明，HBX也能夠激活WNTΒCATENIN這條信號通路，但是其在表觀沉默SFRPS從而導(dǎo)致肝癌的發(fā)生等方面，目前還未見相關(guān)的報道。本研究擬在細(xì)胞水平和腫瘤組織標(biāo)本中觀察HBX對SFRPS的表觀調(diào)控，從而進(jìn)一步研究HBX導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制。方法收集臨床肝癌組織標(biāo)本，提取癌組織DNA、RNA和總蛋白，通過RTPCR、WESTERNBLOT檢測腫瘤組織與癌旁組織中SFRP1和SFRP5的表達(dá)情況，進(jìn)一步采用甲基化特異性PCRMETHYLATIONSPECIFICPCRMSP及亞硫酸鹽測序PCR（BISULFITESEQUENCINGPCRBSP），檢測肝癌組織中SFRP1、SFRP啟動子區(qū)的甲基化表達(dá)情況。同時觀察感染HBX的腫瘤細(xì)胞株SFRP1、SFRP5啟動子活性變化，進(jìn)一步證實HBX能否調(diào)控SFRP1、SFRP5的表達(dá)。通過體外功能實驗研究回復(fù)SFRP1、SFRP5或干擾甲基化修飾酶DNMT1后肝癌細(xì)胞的增殖和遷移能力變化，探討HBX蛋白調(diào)控SFRP1、SFRP5的分子機(jī)制。結(jié)果我們在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院收集到35例原發(fā)性肝癌組織標(biāo)本，分別提取腫瘤和癌旁組織的總RNA、DNA、總蛋白，觀察到與癌旁組織相比，腫瘤組織WNT信號抑制分子SFRP1、SFRP5的表達(dá)明顯下調(diào)，甲基化特異性PCR以及亞硫酸鹽測序PCR實驗均表明腫瘤組織與癌旁組織相比，SFRP1和SFRP5啟動子區(qū)甲基化修飾顯著增高。體外構(gòu)建成功含SFRP1和SFRP5區(qū)的啟動子截短突變報告質(zhì)粒，采用雙熒光素酶報告基因法檢測，結(jié)果表明SFRP1、SFRP5啟動子區(qū)在轉(zhuǎn)錄起始位點400BP左右啟動子活性最強(qiáng)。感染HBX后，SFRP1、SFRP5的啟動子活性明顯低于對照組。在體外功能實驗中，平板克隆形成實驗、MTS實驗、BRDU摻入實驗、結(jié)晶紫實驗均可證實，穩(wěn)定表達(dá)HBX的肝癌細(xì)胞系，HBX蛋白可以明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，并且干擾DNMT1或者回復(fù)SFRP1、SFRP5能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖作用。遷移實驗結(jié)果表明，HBX蛋白能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞系HUH7細(xì)胞的遷移的能力，干擾DNMT1或者回復(fù)SFRP1和SFRP5的表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞的遷移能力。結(jié)論乙型肝炎病毒X蛋白通過降低SFRP1、SFRP5的啟動子活性，明顯下調(diào)WNT信號抑制分子SFRP1、SFRP5的表達(dá)。HBX促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力與活化DNA甲基轉(zhuǎn)移酶下調(diào)SFRPS的表達(dá)進(jìn)而活化WNT信號相關(guān)。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HTERT啟動子調(diào)控腺病毒介導(dǎo)的HSVTKGCV基因系統(tǒng)治療人膀胱癌的動物實驗研究姓名連文峰申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師黎瑋20060301中文摘要水平上，從而可以增強(qiáng)基因治療的靶向性和安全性。利用HTERL、啟動子來調(diào)控病毒攜帶的目的基因，理論上可使病毒選擇性在端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)目的基因。我們擬采用HTERT啟動子調(diào)控腺病毒介導(dǎo)的HSV_T剛GCV自殺基因系統(tǒng)，結(jié)合先天性缺乏胸腺的BALB／C裸鼠建立的人膀胱癌動物模型，給予重組腺病毒尾靜脈注射治療，觀察其在體內(nèi)的治療效果、靶向性及安全性。方法裸鼠膀胱癌模型的建立和分組在小鼠右前肢腋窩皮下接種253J膀胱癌細(xì)胞懸液，觀察小鼠腫瘤生長情況。當(dāng)腫瘤生長至直徑約為6MM時，對荷瘤裸鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，選用瘤體大小一致的裸鼠28只，分為4組，每組7只。A組為AD_HTEIMHSVT剛GCV組；B組為ADHTERTHSV_TK組；C組為GCV組；D組為對照組。AD_HTERTHSVTK經(jīng)尾靜脈注射荷瘤小鼠，GCV腹腔注射治療。ADHTERTHSV_TK／GCV治療后，觀察腫瘤體積、瘤重、腫瘤抑制率、腫瘤體積一時間曲線以及裸鼠生存期。通過常規(guī)病理切片觀察腫瘤破壞情況；通過TU惦L法、流式細(xì)胞學(xué)及透射電鏡進(jìn)一步觀察腫瘤的凋亡情況，免疫組化染色檢測增殖細(xì)胞核抗原PCNA，測定增殖指數(shù)。結(jié)果ADHTERT_HSVT剛GCV治療組腹腔注射GCV后第7D，平均體積為28643MM310392MM3，明顯小于對照組49977MM31叭09MM3P005。直至實驗結(jié)束，腫瘤體積都明顯小于ADHⅡR1二HSVTK、GCV治療組和對照組。說明腫瘤生長速度明顯慢于對照組及AD_HTERL二HSVTK、GCV治療組。從移植瘤抑制率曲線可以看出，ADHTEIMHSVT列GCV組比AD_HTERT_HSVTK、GCV單