簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多烏司他丁對(duì)膿毒癥及膿毒癥所致急性認(rèn)知功能障礙的保護(hù)作用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：背景和目的全球每年約5％10的成年人和200的兒童被流感病毒感染。病毒的不斷進(jìn)化可致疫苗保護(hù)性下降甚至失效，產(chǎn)生抗藥毒株。除季節(jié)性流感，過去已發(fā)現(xiàn)大量禽流感感染人類并引起嚴(yán)重疾病如H5N1、H7N9、H10N8和H5N6等。兒童是感染流感的高危人群之一，且可傳染成人看護(hù)者，因此在兒童中監(jiān)測(cè)流感對(duì)防控流感有重要意義。本研究旨在監(jiān)測(cè)汕頭兒童中流感流行活動(dòng)及H3N2和H7N9的分子變異特征和進(jìn)化規(guī)律。方法使用RTPCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)）對(duì)ILI標(biāo)本進(jìn)行流感分型。在某些情況下，用MDCK細(xì)胞分離病毒，對(duì)比RTPCR與細(xì)胞分離法在流感檢出效率上的差異。選出陽性標(biāo)本測(cè)序，分析分子變異特征和進(jìn)化規(guī)律。比較不同流感患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床特征。為了解H7N9的傳播途徑，還在本地菜市場(chǎng)活禽中開展了小規(guī)模采樣監(jiān)測(cè)。結(jié)果流感在汕頭幾乎全年流行。甲型H1N1和H3N2基本處于此消彼長(zhǎng)的形態(tài)。2014年夏出現(xiàn)抗原性漂移的H3N2毒株。檢出一例兒童H7N9輕癥，和汕頭報(bào)導(dǎo)的4例重癥H7N9的病毒基因組各片段的進(jìn)化距離都非常近。未出現(xiàn)人傳人的突變組合和神經(jīng)氨酸酶抑制劑耐藥性的突變，但有優(yōu)先結(jié)合SAΑ26GAL受體的突變（HAT160A、Q226L和T221P），抗離子通道抑制劑類藥物的突變（M2S31N和V27I）和在小鼠感染中增強(qiáng)毒力的突變（M1N30D和T215A，NS1A42S，NA6973位缺失），然而能在小鼠感染中增強(qiáng)病毒復(fù)制能力的兩個(gè)氨基酸位點(diǎn)保守未變PB2E627和D701。活禽市場(chǎng)同時(shí)檢出H7N9和H9N2?！?歲更易感染流感；結(jié)論1流感在汕頭幾乎全年流行。甲型H1N1和H3N2基本處于此消彼長(zhǎng)。22014年夏發(fā)現(xiàn)抗原性漂移的H3N2毒株，對(duì)20142015和20152016年疫苗的保護(hù)性均具挑戰(zhàn)。3不同型流感患者在人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床特征上的某些顯著性差異，可為醫(yī)生診斷、治療流感提供參考。4在汕頭兒童普通流感監(jiān)測(cè)中成功篩查出輕癥病例，說明在兒科普通流感監(jiān)測(cè)中檢測(cè)H7N9十分必要。5人感染H7N9的威脅仍來自環(huán)境。H7N9和H9N2在禽類中仍在進(jìn)行內(nèi)部基因交換。但該時(shí)期汕頭的H7N9基因多樣性還比較穩(wěn)定。

簡(jiǎn)介：遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文元認(rèn)知干預(yù)技術(shù)對(duì)失眠癥干預(yù)效果的實(shí)驗(yàn)研究姓名丁曉茜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)應(yīng)用心理學(xué)指導(dǎo)教師金洪源20090501元認(rèn)知干預(yù)技術(shù)對(duì)失眠癥干預(yù)效果的實(shí)驗(yàn)研究ABSTRACTOBJECTIVEINVESTIGATINGTHEEFFECTIVENESSOFAPPLYINGTHEMETACOGNITIONINTERVENTIONTECHNIQUEMITINTREATINGINSOMINAMETHODSAMULTIPLEBASELINESINGLESUBJECTDESIGNANDTHEREDUCTIONRATEOFPSQI’SSCOREWEREEMPLOYEDTOEXAMINETHETREATMENTEFFECTRESULTS111EIROVERALLSCORESOFPSQIARE17、14AND14INPREINTERVENTIONAND4、4ANDLINPOSTINTERVENTIONTHEREDUCTIONRATESOFOVERALLSCOREARE765％、714％AND929％THESYMPTOMSOFINSOMINAWEREVERIFIEDDURINGTHEBASELINEOBSERVATION，ANDTHEINDICATORSOFTHESESYMPTOMSWERECONSISTENTLYOBSERVEDAFTERINTERVENINGTHEFIRSTCLIENT’SYMPTOMIETHETIMEFROMLYINGINBEDTOFALLINGASLEEP，THEFREQUENCYOFTHISSYMPTOMREDUCEDDRAMATICALLYTHEOTHERSYMPTOMSALSOSHOWEDADECLININGTENDENCYAFTERTHEDIRECTINTERVENTIONTOEACHOFTHEOTHERCLIENT，THECORRESPONDINGSYMPTOMSWEREEITHERELIMINATEDORREDUCEDSIGNIFICANTLYCONCLUSIONTHESERESULTSSUGGESTEDTHATTHEMITISALLEFFECTIVEMETHODIN仃EATINGINSOMINAMADVANTAGESOFTHEMITANDLIMITATIONSOFTHISSTUDYWILLBEDISCUSSEDKEYWORDSINSOMINA；METACOGNITIONINTERVENTIONTECHNIQUE；MULTIPLEBASELINEDESIGN；INTERVENTIONSTUDYⅡ

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文帕金森病血尿酸與認(rèn)知功能障礙關(guān)系的研究分析姓名王曉君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師羅蔚鋒20090401帕金森病M尿酸與認(rèn)知功能障礙關(guān)系的研究分析中文摘要方法選取蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院2007年9月2009年3月診斷為PD的門診患者104例，對(duì)入選的PD患者進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)分和抑郁評(píng)分，用多重線性回歸方法對(duì)認(rèn)知功能相關(guān)因素以及血尿酸與認(rèn)知功能域的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果1PD患者的認(rèn)知功能水平與受教育年限R2O604，P001、血尿酸水平R20713，P001呈正相關(guān)；與抑郁程度R20654，P001、年齡R2O694，P001和HY分期R20376，P001呈負(fù)相關(guān)；與性別、吸煙、身高體重指數(shù)BMI和I病程長(zhǎng)短無相關(guān)性。2PD患者的血尿酸水平與記憶能力R20292，P0000和語言流暢能力R20236，P0006呈正相關(guān)。結(jié)論1PD患者的受教育程度、血尿酸水平、年齡、HY分期和抑郁嚴(yán)重程度會(huì)影響認(rèn)知功能的改變。2對(duì)于PD患者，適當(dāng)高的血尿酸水平有助于認(rèn)知功能，包括記憶能力和語言流暢能力的改善。關(guān)鍵詞帕金森?。荒蛩?；記憶能力；語言流暢能力作者王曉君指導(dǎo)老師羅蔚鋒

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)BMP-2基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文裂解型基因重組腺病毒對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞及小鼠肝癌抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名周憶新申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師楊吉成20071001THEEXPERIMENTALSTUDYONONCOLYLICRECOMBINANTADENOVIRUSADEIAINHIBITA375INVITROANDH22TUBIOI“SROWTH，月V／VOALMR∞TTHEEXPERIMENTALSTUDYONONCOLYTICRECOMBINANTADENOVIRUSADE1AINHIBITA375／NVITROANDH22TUMORGROWTHINLYLVO●●ABSTRACTOBJECTIVETOCONSTRUCT111EONCOLYTICADENOVIRUSADE1AANDEXPLORETHEEFFECTOFE1AONA375CELLSITINHIBITH22TUMORGROWTHINVIVOANDENHANCETHEIMMUNEFUNCTIONOFBALB／CMICEMETHODSTHEPADTRACKCMVE1AWASCONSTRUCTEDWITHPUCMTE1ARECOMBINEDPLASMIDBYPCRASTEMPLATE，ENZYMEDIGESTIONANDLIGATIONTHEPADTRACKCMVRE1ALINEAREDBYPMELWASCOTRANSDUCTEDINTOBJ5183WITHPADEASYIANALYSISOFPCRAND。DNASEQUENCINGWASCARRIEDOUTTODEMONSTRATETHESEQUENCEOFTHEPLASMID111EPADEASY1PADTRACKCMVE1ARECOMBINEDADENOVIRUSVECTORWASLEAREDWITHPACIANDTHENTRANSFECTEDINTOQBI293ACELLSTHEADE1ARECOMBINEDADENOVIRUSWASOBTAINEDANDWASUSEDTOINFECTA375CELLSIDENTIFICATIONOFADE1AMRNABYIMPCRWASCARRIEDOUTTODEMONSTRATETHEEXPRESSIONOFADE1AINA375CELLSTHEEFFECTOFADE1AONA375WASSTUDIEDBYM巧FLOWCYTOMETRYANDSTUDYTHEEFFECTOFADE1AONH22TUMORGROWTHINVIVOANDTHEIMMUNEFUNCTIONOFBALB／CMICERESULTSTHERECOMBINEDONCOLYTICADENOVIRUSADELAWASOBTAINEDTHEONCOLYTICADENOVIRUSINHIBITH22ASCITICHEPATOMAOBVIOUSLYHAVENOSIDEEFFECTONIMMUNEORGANANDENHANCETHENUMBERSOFMONOCYTEANDNEUTROPHIL

簡(jiǎn)介：肥胖OBESITY作為多種慢性疾病及惡性腫瘤的危險(xiǎn)因素，已嚴(yán)重威脅著人類的身心健康。肥胖基因OBGENE及其編碼產(chǎn)物瘦素LEPTIN的發(fā)現(xiàn)，為肥胖在分子生物學(xué)水平的研究奠定了基礎(chǔ)。研究證實(shí)在大多數(shù)肥胖者和嚙齒類動(dòng)物中存在著明顯的瘦素抵抗LEPTINRESITANCE，LR，即對(duì)瘦素減少體重信號(hào)反應(yīng)能力降低。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3SUPPRESSOFCYTOKINESIGNALING3，SOCS3由瘦素誘導(dǎo)產(chǎn)生，是瘦素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)反饋抑制因子，通過抑制瘦素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用。SOCS3是胰島素、生長(zhǎng)激素等多種激素的抑制因子，在中樞抑制其表達(dá)可能影響其他激素發(fā)揮其正常生理功能。因此，本研究首先通過建立高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖DIETINDUCEDOBESITY，DIO大鼠模型，檢測(cè)脂肪組織中SOCS3MRNA表達(dá)情況；然后，應(yīng)用慢病毒載體LENTIVIRUSVECT介導(dǎo)的RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI技術(shù)在體外進(jìn)行DIO大鼠脂肪細(xì)胞SOCS3基因敲除，減少或阻斷肥胖大鼠脂肪細(xì)胞內(nèi)SOCS3的表達(dá)，觀察其對(duì)脂肪細(xì)胞代謝的影響。材料與方法一、飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠模型的建立及指標(biāo)檢測(cè)一建立飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠模型40只雄性WISTAR大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1W后，按體重隨機(jī)分為2組對(duì)照組7只喂飼普通基礎(chǔ)飼料，高脂組33只喂飼高脂飼料，高脂飼料含基礎(chǔ)飼料73％、豬油20％、酪蛋白7％。第8W末，按體重增量大于對(duì)照組體重增量均值加上1倍標(biāo)準(zhǔn)差作為肥胖標(biāo)準(zhǔn)，從高脂組中篩選出10只大鼠作為肥胖組，5只處死用于血脂及附睪周圍脂肪組織SOCS3MRNA指標(biāo)檢測(cè)，5只用于大鼠原代脂肪基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，乙醚麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血，分離血清。二血脂的測(cè)定按試劑盒說明，用半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中總膽固醇TOTALCHOLESTEROL，TC、甘油三酯TRIGLYCERIDE，TG含量。三脂肪組織SOCS3MRNA表達(dá)量測(cè)定按TRIZOL說明書操作步驟，提取100MG左右大鼠附睪周圍脂肪組織的總RNA。取總RNA量1ΜG，按TAKARARNAPCR試劑盒說明，進(jìn)行RTPCR反應(yīng)。取2ΜLCDNA為模板，以ΒACTIN作為內(nèi)參對(duì)照。各指標(biāo)反應(yīng)條件相同，RTPCR反應(yīng)條件為30℃10MIN，42℃30MIN，99℃5MIN，5℃5MIN。PCR反應(yīng)條件94℃，2MIN預(yù)變性；擴(kuò)增的35個(gè)循環(huán)包括變性94℃30S、退火56℃30S、延伸72℃1MIN。再72℃延伸10MIN。5ΜL目的基因產(chǎn)物，加預(yù)染液預(yù)染3MIN；2％瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像分析儀拍照，以與內(nèi)參對(duì)照ΒACTIN的比值作為目的基因表達(dá)的相對(duì)含量。二、大鼠原代脂肪基質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)及成脂誘導(dǎo)分化無菌條件下，取肥胖組大鼠附睪周圍脂肪組織，去除血管和其他組織，PBS反復(fù)清洗。加入午血清白蛋白和II型膠原酶混合物消化。過250ΜM篩網(wǎng)，50G離心10MIN，200G離心10MIN。加紅細(xì)胞裂解液，室溫靜置5～10MIN，過25ΜM篩網(wǎng)，200G離心5MIN2次。加基礎(chǔ)培養(yǎng)基混懸后，接種到12孔板中。37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)。當(dāng)原代培養(yǎng)的大鼠脂肪基質(zhì)細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，用PBS洗2次，更換為誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，3D后，更換去除異丁基甲基黃嘌呤和羅格列酮的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，隔日換液。10D后，油紅O染色鑒定脂肪細(xì)胞及分化率。三、SOCS3SHRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建慢病毒載體委托吉?jiǎng)P基因化學(xué)有限公司合成。四、慢病毒感染及瘦素處理肥胖組大鼠原代脂肪基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化10D后，感染慢病毒，共分3組，每組4個(gè)復(fù)孔，分別為空白對(duì)照組CON組，陰性對(duì)照病毒組NC組，SOCS3SHRNA慢病毒組KD組。96H后熒光鏡檢觀察感染率。感染5D后，每組取2孔加大鼠重組瘦素處理6H。五、SOCS3、ACC和ACOMRNA表達(dá)量測(cè)定TRIZOL提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄成CDNA，PCR法擴(kuò)增目的基因，SOCS3和GAPDH內(nèi)參的退火溫度為56℃；ACC和ACO的退火溫度為50℃，其它步驟同前。六、統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果用X±S表示，用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)和單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α005。結(jié)果一、實(shí)驗(yàn)期間大鼠體重變化喂飼高脂飼料前，兩組大鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005，但1W后體重開始分化，此后，肥胖組大鼠體重一直高于對(duì)照組，至第8W末，肥胖組大鼠體重及體重增量與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。二、第8W末大鼠血脂水平及脂肪組織SOCS3MRNA表達(dá)情況第8W末大鼠血清總膽固醇和甘油三酯水平，肥胖組顯著高于對(duì)照組P005。而附睪周圍脂肪組織中SOCS3MRNA表達(dá)水平肥胖組也高于對(duì)照組，灰度值分析結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。三、大鼠原代脂肪基質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及成脂誘導(dǎo)分化剛接種的大鼠原代脂肪基質(zhì)細(xì)胞呈圓形或類圓形。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞變得細(xì)長(zhǎng)，呈典型的成纖維細(xì)胞形，生長(zhǎng)比較旺盛。經(jīng)成脂誘導(dǎo)分化劑誘導(dǎo)48H后細(xì)胞變圓，體積增大，胞內(nèi)有脂滴形成。油紅O可將脂滴染成紅色，證明誘導(dǎo)所產(chǎn)生的細(xì)胞為脂肪細(xì)胞。計(jì)數(shù)分化率約為70％。四、慢病毒感染分化后的大鼠脂肪基質(zhì)細(xì)胞感染72H后熒光鏡檢觀察，CON組無熒光表達(dá)，NC組和KD組有綠色熒光表達(dá)，感染率約80％。五、感染慢病毒后大鼠脂肪細(xì)胞SOCS3MRNA表達(dá)水平感染SOCS3SHRNA慢病毒的大鼠脂肪細(xì)胞KD組SOCS3MRNA表達(dá)水平低于感染陰性對(duì)照慢病毒的大鼠脂肪細(xì)胞NC組P005。SOCS3基因有效敲減率約為54％。六、各組細(xì)胞ACC和ACOMRNA表達(dá)水平瘦素處理后，KD組大鼠脂肪細(xì)胞ACCMRNA表達(dá)水平低于NC組P005；而ACOMRNA表達(dá)水平，瘦素處理后，KD組高于NC組P005。結(jié)論1、高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠可能存在外周瘦素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制。2、SOCS3SHRNA慢病毒感染DIO大鼠脂肪細(xì)胞后，在一定程度上解除了SOCS3對(duì)脂肪細(xì)胞中瘦素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抑制，緩解了脂肪細(xì)胞的瘦素抵抗。

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簡(jiǎn)介：目的活細(xì)胞在刺激因子作用下細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)分子間的相互作用以及由此而產(chǎn)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，傳統(tǒng)的免疫共沉淀等研究方法不可能進(jìn)行可視性的、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察，因而可能丟失某些重要信息。因此，發(fā)展與建立一種能夠在活細(xì)胞水平實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察蛋白一蛋白之間相互作用的技術(shù)方法，對(duì)于研究生命過程細(xì)胞重要的病理生理反應(yīng)及依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制具有重要的科學(xué)應(yīng)用價(jià)值。熒光共振能量轉(zhuǎn)移術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于能夠定位、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)間相互作用或蛋白質(zhì)構(gòu)像的變化，已經(jīng)在生命科學(xué)領(lǐng)域研究生物大分子相互作用過程中顯示出了其極大的應(yīng)用拓展?jié)摿Α１菊n題通過建立以寬場(chǎng)熒光顯微鏡為基礎(chǔ)的FRET測(cè)定技術(shù)平臺(tái)，研究嚴(yán)重急性呼吸綜合癥冠狀病毒刺突蛋白SPIKE，S蛋白介導(dǎo)免疫損傷的可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。內(nèi)容和方法一、寬場(chǎng)熒光顯微鏡下FRET穩(wěn)態(tài)熒光強(qiáng)度測(cè)定的技術(shù)平臺(tái)構(gòu)建1、構(gòu)建青色熒光蛋白CYANFLUESCENTPROTEIN，CFP和黃色熒光蛋白YELLOWFLLJESCENTPROTEIN，YFP的融合蛋白質(zhì)粒，PCFPYFP，設(shè)置為FRET檢測(cè)陽性對(duì)照質(zhì)粒；研究寬場(chǎng)熒光顯微鏡檢測(cè)FRET的圖像對(duì)齊及主要影響因素，推導(dǎo)FRET檢測(cè)中圖像對(duì)齊的數(shù)學(xué)模型，優(yōu)化FRET結(jié)果。2、分別用CFP和YFP標(biāo)記雌激素受體ALPHAESTROGENRECEPTΑ，ERΑ構(gòu)建PCFPER和PYFPER質(zhì)粒，以探討不同比例供受體對(duì)FRKT檢測(cè)結(jié)果的影響。3、構(gòu)建PECFPYFP和PEYFPCFP熒光報(bào)告質(zhì)粒，作為快速構(gòu)建FRET檢測(cè)的供受體熒光融合蛋白對(duì)的工具載體。二、應(yīng)用FRET技術(shù)研究SARS冠狀病毒S蛋白介導(dǎo)的干擾素GAMMAINTERFERONGAMMA，IFNΓ可誘導(dǎo)的信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1SIGNALTRANSDTJCERACTIVATIONOFTRALQION1，STAT1的激活。1、構(gòu)建作為FRET供受體對(duì)的分別表達(dá)STAT1和STAT1突變體STAT1701，即701位點(diǎn)突變使SH2功能域失活熒光融合蛋白的質(zhì)粒PSTAT1CFP和PSTAT1YFP等；應(yīng)用FRET技術(shù)檢測(cè)基礎(chǔ)狀態(tài)下活細(xì)胞內(nèi)STAT1STAT1的相互作用及IFN或SARS冠狀病毒S蛋白刺激下STAT1激活構(gòu)像的改變。2、應(yīng)用電泳遷移率變動(dòng)分析ELECTROPHETICMOBILITYSHIFTASSAY，EMSA和RTPCR方法進(jìn)一步確證SARS冠狀病毒S蛋白對(duì)IFN?？烧T導(dǎo)的信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子STAT1的激活，以及對(duì)STAT1同源二聚體轉(zhuǎn)錄激活子的重要靶基因干擾素調(diào)節(jié)因子1IFNREGULATEDFACT1，IRF1的轉(zhuǎn)錄激活影響。結(jié)果一、成功建立寬場(chǎng)熒光顯微鏡下穩(wěn)態(tài)熒光強(qiáng)度測(cè)定檢測(cè)FRET的技術(shù)平臺(tái)1、通過比較圖像對(duì)齊方法在FRET檢測(cè)中的應(yīng)用，以及旋轉(zhuǎn)偏移對(duì)FRET結(jié)果的可能影響，推導(dǎo)了新的圖像對(duì)齊數(shù)學(xué)模型，使之不僅能夠校準(zhǔn)水平偏移亦能夠校準(zhǔn)旋轉(zhuǎn)偏移，經(jīng)圖像對(duì)齊后像素一像素解析的FRET結(jié)果明顯改善。2、探討了寬場(chǎng)熒光顯微鏡下FRET檢測(cè)的熒光滲漏及背景熒光的去除問題，建立了FRET效率檢測(cè)的程序與方法，成功進(jìn)行了圖像標(biāo)準(zhǔn)化處理，經(jīng)陽性模型驗(yàn)證表明表達(dá)CFPYFP融合蛋白陽性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后經(jīng)FRET測(cè)定計(jì)算后表現(xiàn)為強(qiáng)陽性，已知供受體熒光融合蛋白存在FRET關(guān)系的分別表達(dá)CFPER和YFPER的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后FRET檢測(cè)為陽性，而僅表達(dá)熒光蛋白CFP或YFP的空載質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后FRET檢測(cè)計(jì)算為陰性。3、各種標(biāo)準(zhǔn)化FRET效率的方法都有一定的局限性，當(dāng)供受體比例相似時(shí)，如分子內(nèi)FRET，E描述效果最好，當(dāng)比例相差較大時(shí)，N效果較好，F(xiàn)RETN不能很好的描述FRET效率。4、成功構(gòu)建PECFPYFP和PEYFPCFPFRET載體。二、應(yīng)用建立的寬場(chǎng)熒光顯微鏡FRET效率測(cè)定方法發(fā)現(xiàn)SARS冠狀病毒S蛋白能夠模擬INFΓ激活STAT1信號(hào)分子，誘導(dǎo)干擾素可誘導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄激活。1、熒光顯微鏡下可以觀察到轉(zhuǎn)染PSTAT1CFP或PSTAT1YFP細(xì)胞的熒光主要分布于細(xì)胞漿，細(xì)胞核僅有少量表達(dá)。S蛋白或INFΓ刺激后熒光轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核。分別單轉(zhuǎn)PCFPSTAT1，PYFPSTAT1，PYFPSTAT1CFP，PCFPSTAT1YFP，PSTAT1701CFP細(xì)胞的熒光分布基態(tài)下主要定位于細(xì)胞漿，INFΓ刺激后熒光分布無明顯變化。2、共轉(zhuǎn)染PSTAT1CFP和PSTAT1YFP質(zhì)粒的1611BE基態(tài)下細(xì)胞核與細(xì)胞漿的FRET效率檢測(cè)陽性，核漿FRET效率分布無明顯差異，INF?；騍蛋白刺激后核內(nèi)FRET效率降低而胞漿不變。共轉(zhuǎn)染PSTAT1701CFP和PSTAT1701YFP質(zhì)粒的16HBE細(xì)胞基態(tài)下FRET效率檢測(cè)亦為陽性。相比之下，共轉(zhuǎn)染PCFPSTAT1和PYFPSTAT1質(zhì)粒的16HBE細(xì)胞FRET效率檢測(cè)為陰性。3、EMSA與RTPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)經(jīng)INFΓ刺激的的人支氣管上皮細(xì)胞HUMANBRONCHIALEPITHELIALCELL，16HBE細(xì)胞核蛋白顯著增強(qiáng)了與IRF1基因啟動(dòng)子上的干擾素GAMMA激活序列IFNGAMMAACTIVATEDSEQUENCE，GASDNA基序的結(jié)合，誘導(dǎo)了IRF1基因的轉(zhuǎn)錄；共轉(zhuǎn)染PSTAT1CFP和PSTAT1YFP質(zhì)粒的16HBE細(xì)胞核蛋白進(jìn)一步增強(qiáng)了與GAS的結(jié)合，并相應(yīng)地增加了IRF1基因的轉(zhuǎn)錄；共轉(zhuǎn)染表達(dá)STAT1突變體的PSTAT1701CFP和PSTAT1701YFP質(zhì)粒細(xì)胞下調(diào)了IRF1基因的轉(zhuǎn)錄激活。結(jié)論1、成功建立寬場(chǎng)熒光顯微鏡下穩(wěn)態(tài)熒光強(qiáng)度測(cè)定檢測(cè)FRET效率的技術(shù)平臺(tái)，通過數(shù)學(xué)模型改良明顯改善像素像素解析的FRET結(jié)果，提高了FRET測(cè)定的準(zhǔn)確性。2、STAT1C末端連接CFP或YFP的熒光融合蛋白能夠保持野生型STAT1生物學(xué)活性，F(xiàn)RET測(cè)定結(jié)果表明基態(tài)下細(xì)胞內(nèi)非激活形式的STAT1能夠以同源二聚體的形式存在，INF?；騍蛋白刺激下STAT1同源二聚體入核，并發(fā)生了激活形式的構(gòu)像改變，進(jìn)而誘導(dǎo)了靶基因IRF1的轉(zhuǎn)錄激活。研究發(fā)現(xiàn)SARS冠狀病毒S蛋白能夠激活I(lǐng)NFΓ激活的信號(hào)分子，誘導(dǎo)INF?？烧T導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)核心因子的轉(zhuǎn)錄激活。

簡(jiǎn)介：兒童時(shí)期下呼吸道感染是慢性阻塞性肺疾病發(fā)病獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。下呼吸道感染的主要病原體是病毒，尤其是腺病毒。與其他病毒感染不同，腺病毒往往在急性期感染后形成潛伏感染狀態(tài)，病毒雖然停止復(fù)制但病毒DNA長(zhǎng)期存在于宿主細(xì)胞內(nèi)，并表達(dá)部分病毒蛋白，其中E1A蛋白是腺病毒潛伏感染后最主要表達(dá)的效應(yīng)蛋白。COPD最主要的病理特征是累及肺組織和氣道的慢性炎癥，所涉及的發(fā)病機(jī)制主要包括炎癥機(jī)制、氧化抗氧化失衡、蛋白酶抗蛋白酶失衡以及凋亡機(jī)制，構(gòu)建了腺病毒潛伏感染持續(xù)表達(dá)E1A蛋白的細(xì)胞模型，離體水平對(duì)E1A蛋白對(duì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、氧化抗氧化平衡、以及生理濃度糖皮質(zhì)激素抗炎作用的影響等方面進(jìn)行了研究。探討腺病毒潛伏感染在COPD發(fā)病機(jī)制中的作用，為進(jìn)一步揭示COPD發(fā)病機(jī)制、尋找有效的COPD防治方法打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。方法一、腺病毒E1A基因高效真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定表達(dá)E1A蛋白的大鼠肺泡上皮細(xì)胞株的構(gòu)建目的基因E1A編碼序列用PCR方法獲得，模板為含有腺病毒C屬5型基因組25到1770核苷酸序列的質(zhì)粒PNEOE1A，將擴(kuò)增的E1A基因片段連接到PGEMTEASY載體上，酶切、測(cè)序鑒定正確后，亞克隆至高效真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA、PEGFPC上構(gòu)建重組質(zhì)粒PCDNAE1A、PEGFPCE1A。最后對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定。將構(gòu)建成功的PCDNAE1A、PEGFPCE1A重組質(zhì)粒及對(duì)照質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染大鼠肺泡上皮細(xì)胞，通過G418抗性篩選和單克隆化操作最終獲得4個(gè)穩(wěn)定表達(dá)E1A蛋白的抗性細(xì)胞克隆，進(jìn)一步用RCR、RTPCR、WESTERNBLOT及免疫組化的方法對(duì)E1A基因表達(dá)進(jìn)行鑒定。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察以及增殖曲線、流式細(xì)胞周期分析E1A蛋白對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及增殖周期的影響。二、腺病毒E1A基因?qū)Υ笫蠓闻萆掀ぜ?xì)胞炎癥因子的影響及其機(jī)制1、10M9LLPS和10PGLTNFΑ作用E1A陽性組細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞，分別于刺激因素作用24小時(shí)后收集細(xì)胞上清和細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞因子IL6、TNFΑ、ICAM1蛋白水平的測(cè)定；并于刺激因素作用前、作用后3、6、12小時(shí)收集細(xì)胞MRNA進(jìn)行RTPCR檢測(cè)IL6、TNFΑ、ICAM1MRNA水平的表達(dá)。2、將轉(zhuǎn)錄因子AP1、NFΚB熒光報(bào)道質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染E1A陽性組和對(duì)照組細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染12小時(shí)后分別加入刺激因素LPS、TNFΑ作用12小時(shí)后收集細(xì)胞檢測(cè)各組細(xì)胞的熒光素酶活性及細(xì)胞裂解液中蛋白濃度，用蛋白濃度較正測(cè)定的熒光素酶活性值，得到校正熒光素酶活性值。3、根據(jù)大鼠ICAM1基因上游調(diào)控序列設(shè)計(jì)AP1、NFΚB寡核苷酸探針，利用上述探針、競(jìng)爭(zhēng)探針和大鼠肺泡上皮細(xì)胞核蛋白進(jìn)行EMSA實(shí)驗(yàn)，確定ICAM1基因上游調(diào)控區(qū)域的功能元件與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合活性。4、利用轉(zhuǎn)錄因子NFКB抑制劑TPCK處理E1A陽性組和對(duì)照組細(xì)胞后，加入刺激因素LPS、TNFΑ作用24小時(shí)后收集細(xì)胞進(jìn)行ICAM1蛋白表達(dá)的測(cè)定，明確轉(zhuǎn)錄因子NFКB在ICAM1基因表達(dá)中的作用。三、E1A蛋白對(duì)TNFΑ誘導(dǎo)下細(xì)胞凋亡的影響用HOECHEST熒光染色及PI、結(jié)合膜聯(lián)蛋白VFITC雙染法觀察30PGLTNFΑ作用E1A陽性組細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞8小時(shí)后細(xì)胞的凋亡情況。四、腺病毒ELA蛋白對(duì)轉(zhuǎn)錄因子AP1、NFКB轉(zhuǎn)錄活性的影響及氧化抗氧化失衡對(duì)其的影響1、刺激因素LPS和TNFΑ作用E1A陽性組細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞，分別于刺激因素作用前、作用后30分鐘、1小時(shí)、4小時(shí)收集細(xì)胞核蛋白進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子AP1、NFКB活化蛋白表達(dá)的免疫印記檢測(cè)，同時(shí)收集細(xì)胞總蛋白對(duì)轉(zhuǎn)錄因子NFКB總蛋白表達(dá)進(jìn)行免疫印記檢測(cè)。2、用抗氧化物質(zhì)NAC以及GSH合成酶抑制劑BSO預(yù)處理E1A陽性組細(xì)胞及對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，再加入LPS和TNFΑ作用細(xì)胞4小時(shí)，收集細(xì)胞核蛋白進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子NFКB活化蛋白表達(dá)的免疫印記檢測(cè)。五、腺病毒E1A蛋白對(duì)生理濃度的糖皮質(zhì)激素抗炎作用的影響及其機(jī)制1、用生理濃度的糖皮質(zhì)激素預(yù)處理CCL149細(xì)胞后在加入致炎因素LPS，ELISA法檢測(cè)炎性因子IL6蛋白表達(dá)的影響；2、用生理濃度下糖皮質(zhì)激素、HDAC抑制劑TSA預(yù)處理CCL149細(xì)胞后再加入LPS，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞IL6蛋白的表達(dá)；3、比色法檢測(cè)LPS、HDAC抑制劑以及生理濃度下糖皮質(zhì)激素作用CCL149細(xì)胞后，細(xì)胞HDAC活性的變化；4、ELISA法檢測(cè)生理濃度的糖皮質(zhì)激素對(duì)E1A組陽性細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下IL6蛋白表達(dá)的影響；5、比色法檢測(cè)致炎因素LPS、HDAC抑制劑以及生理濃度下糖皮質(zhì)激素對(duì)E1A陽性組細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞HDAC活性的影響。結(jié)果一、成功克隆出E1A基因完全編碼區(qū)基因序列，構(gòu)建含E1A基因完全編碼區(qū)的重組質(zhì)粒PCDNA－E1A、，PEGFPC－E1A。將重組質(zhì)粒與對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CCL149細(xì)胞后經(jīng)G418抗性篩選，E1A組共得到94個(gè)抗性細(xì)胞克隆，其中有9個(gè)細(xì)胞克隆經(jīng)PCR檢測(cè)能擴(kuò)增出1560BP的基因片段，進(jìn)一步RTPCR檢測(cè)有4個(gè)細(xì)胞克隆能擴(kuò)增出E1A基因486BP特異性片段，而對(duì)照質(zhì)粒組細(xì)胞和正常大鼠肺泡上皮細(xì)胞均無特異性條帶顯示；4個(gè)RTPCR陽性的細(xì)胞克隆行免疫組化結(jié)果顯示E1A陽性的細(xì)胞克隆均在細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)胞染色，而對(duì)照質(zhì)粒組細(xì)胞和正常大鼠肺泡上皮細(xì)胞均未見陽性染色；WESTERNBLOT結(jié)果顯示4個(gè)E1A陽性細(xì)胞克隆均出現(xiàn)大小約為45～48、50～52KDAE1A特異性的蛋白條帶，而對(duì)照質(zhì)粒組與正常大鼠肺泡上皮細(xì)胞均未出現(xiàn)特異性蛋白條帶。因此穩(wěn)定表達(dá)E1A蛋白的大鼠肺泡上皮細(xì)胞株構(gòu)建成功。通過細(xì)胞增殖曲線及流式細(xì)胞增殖周期的觀察發(fā)現(xiàn)與對(duì)照細(xì)胞相比E1A組細(xì)胞增殖時(shí)間明顯延長(zhǎng)；細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)與對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比，E1A穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞出現(xiàn)明顯的S期縮短、G期延長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化表現(xiàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)趨向?yàn)榧貭?，?xì)胞核增大，細(xì)胞體積變小。二、在刺激因素LPS、TNFΑ作用下，E1A陽性組與對(duì)照質(zhì)粒組在細(xì)胞因子IL6、TNFΑ的MRNA、蛋白表達(dá)方面無明顯差別；而細(xì)胞因子ICAM1MRNA和蛋白表達(dá)在E1A組明顯高于對(duì)照組；轉(zhuǎn)錄因子熒光報(bào)道系統(tǒng)顯示在刺激因素作用前后轉(zhuǎn)錄因子AP1、NFКB轉(zhuǎn)錄活性在E1A組均明顯高于對(duì)照組；進(jìn)一步作轉(zhuǎn)錄因子AP1、NFКB在ICAM1基因上游調(diào)控序列功能元件結(jié)合活性的EMSA，結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，E1A組在刺激因素作用后NFКB與ICAM1基因上游調(diào)控元件結(jié)合活性明顯增高；而AP1與ICAM1基因上游調(diào)控元件結(jié)合活性無明顯變化。NFКB抑制劑TPCK能完全阻斷E1A上調(diào)ICAM1蛋白表達(dá)的作用。因此，腺病毒E1A蛋白上調(diào)ICAM1表達(dá)的機(jī)制主要是通過轉(zhuǎn)錄因子NFКB實(shí)現(xiàn)的。三、細(xì)胞凋亡分析發(fā)現(xiàn)在30PGLTNFΑ作用下，E1A陽性組凋亡細(xì)胞明顯增多，與對(duì)照相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四、免疫印記結(jié)果顯示刺激因素LPS、TNFΑ作用后，E1A陽性組細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子AP1核轉(zhuǎn)錄活性與對(duì)照質(zhì)粒組相比，差別無明顯顯著性；而轉(zhuǎn)錄因子NFКB核轉(zhuǎn)錄活性在E1A陽性組明顯高于對(duì)照組；BSO處理細(xì)胞后能明顯增加E1A上調(diào)NFКB核轉(zhuǎn)錄活性的作用；抗氧化劑NAC能明顯抑制E1A上調(diào)NFКB核轉(zhuǎn)錄活性的作用；相對(duì)與對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，E1A對(duì)NFКB總蛋白表達(dá)無明顯影響。因此，腺病毒E1A蛋白在不影響NFКB總蛋白表達(dá)的情況下能明顯上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NFКB轉(zhuǎn)錄活性，腺病毒E1A蛋白能明顯降低細(xì)胞對(duì)氧化抗氧化失衡的耐受性，活化NFКB轉(zhuǎn)錄活性的作用。五、生理濃度的糖皮質(zhì)激素能明顯抑制CCL149細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下IL6蛋白的表達(dá)；HDAC抑制劑TSA能完全抑制糖皮質(zhì)激素的抗炎作用。通過測(cè)定CCL149細(xì)胞HDAC活性顯示刺激因素LPS能顯著降低細(xì)胞HDAC活性，而生理濃度的糖皮質(zhì)激素能恢復(fù)細(xì)胞HDAC的活性。證實(shí)生理濃度糖皮質(zhì)激素有一定抗炎作用，而這一作用的發(fā)揮重要是通過HDAC來實(shí)現(xiàn)的；進(jìn)一步檢測(cè)E1A陽性組與對(duì)照質(zhì)粒組細(xì)胞HDAC活性，結(jié)果顯示兩組在各處理因素作用下，細(xì)胞HDAC活性無顯著差別，E1A蛋白對(duì)生理濃度糖皮質(zhì)激素抗炎作用無明顯影響。結(jié)論1、腺病毒E1A蛋白能夠放大致炎因素誘導(dǎo)下炎癥因子ICAM1MRNA和蛋白水平的表達(dá)。E1A蛋白主要通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NFКB的轉(zhuǎn)錄活性，增加NFКB與ICAM1基因上游調(diào)控元件的結(jié)合來增加ICAM1基因的表達(dá)。2、E1A蛋白能夠增加細(xì)胞對(duì)致凋亡因素的敏感性，上調(diào)TNFΑ誘導(dǎo)下的細(xì)胞凋亡。3、降低細(xì)胞內(nèi)抗氧化物質(zhì)GSH能明顯增加E1A蛋白上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NFКB轉(zhuǎn)錄活化的作用；抗氧化劑NAC能明顯拮抗E1A蛋白上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NFКB轉(zhuǎn)錄活化的作用，提示腺病毒E1A蛋白能夠降低細(xì)胞對(duì)氧化抗氧化失衡的耐受性。因此，腺病毒E1A蛋白可能通過放大細(xì)胞炎癥反應(yīng)、降低細(xì)胞對(duì)氧化抗氧化失衡的耐受性以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡等方面參與COPD的發(fā)生、發(fā)展。

簡(jiǎn)介：Y954S52博臨床型同等學(xué)力在職申請(qǐng)學(xué)校代碼10246學(xué)號(hào)T02110572病毒感染與多發(fā)性硬化的臨床和實(shí)驗(yàn)室研究院專姓系業(yè)名華山醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)毛悅時(shí)指導(dǎo)教師旦堡墓麴援完成日期蘭竺篁蘭旦文學(xué)論次位Ⅳ一學(xué)縋亡衫士異均P005。6在腦脊液中所有病毒抗體／抗原的結(jié)果，三組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均P005?！窘Y(jié)論】1MS組與其他兩組比較，血清中HBV總感染率，HBSAB，HBEAG的陽性率和血清HBSAG，HBEAG，HBCAB同時(shí)陽性俗稱大三陽的比例顯著高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均P005。說明MS組HBV感染率高，部分病人病毒活躍復(fù)制。2MS組EBV的EAIGG抗體陽性率升高，與OND組和NND組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均P005。提示發(fā)作期的MS患者常有活動(dòng)性的EBV感染。3MS組血清中HSVIIGM抗體陽性率明顯高于其他兩組均P005，提示大部分發(fā)作期MS患者有新近的HSVI感染或潛伏的HSV_I的重新活化。I關(guān)鍵詞L多發(fā)性硬化；乙型肝炎病毒；EB病毒人類皰疹病毒6；單純皰疹病毒I型丙型肝炎病毒第二部分合成病毒多肽誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎EE的研究一用生物信息學(xué)方法選擇病毒多肽抗原【目的L用生物信息學(xué)BIOINFORMATICS的方法檢索與多發(fā)性硬化發(fā)病可能相關(guān)的幾種常見病毒的氨基酸序列與神經(jīng)髓鞘主要成分一髓鞘堿性蛋白MYELINBASICPROTEIN，MBP是否有相同或相似的序列，并明確具體氨基酸順序，為分子模擬學(xué)說提供理論依據(jù)。I方法L選擇SWISSPROT蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫，網(wǎng)址為HTTP／／WWWEXPASYCH／SPROT／SPROTTOPHTML，NCBI蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫，網(wǎng)址為HTTP／／WWWNCBINLMNIHGOV／ENTREZ／QUERVFCGIDBPROTEIN。蛋白質(zhì)序列同源性分析數(shù)據(jù)庫網(wǎng)址為HTTP／／WWWNCBINLMNIHGOV／BLAST；HTTP／／USEXPASYORG／TOOLS／BLAST／。MHCII類分子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)HTTP／／WWWIMTECHRESIN／RAGHAVA／PROPRED／。選定大鼠、豚鼠和人的MBP作為比對(duì)序列?！窘Y(jié)果】通過綜合考慮，篩選出4種與多發(fā)性硬化發(fā)病最可能相關(guān)的病毒肽段。它們是乙型肝炎病毒多聚酶肽段，氨基酸序列為GCYGSLPQSHIIQKIKECFR；JC病毒大T抗原肽段，氨基酸序列為HICKGFQCFKKPRTPPPK；EB病毒DNA多聚酶肽段，氨基酸序列為TGGVY墅VKKHVHES；人類皰疹病毒6U70堿性核酸外切酶肽段，氨基酸序列為IVERETRGQSENPLWHALRR。二合成病毒多肽誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型EAE免疫學(xué)分析的體外實(shí)驗(yàn)I目的】研究4條合成病毒肽是否帶有與豚鼠MBP6886相似的抗原表位，即具有與MBP6886相似的免疫反應(yīng)性抗原性。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多乙肝病毒、丙肝病毒對(duì)宿主細(xì)胞NKG2D配體的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文登革病毒檢測(cè)基因芯片的研制研究姓名肖維威申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師馬文麗20040501POLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPAGE辯I悶旆鼽股械服電孫PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PCR蟄OLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DHPOWEROFHYDROGENPH值PMTPHOTOMUPLTIPLIERTUBE光電倍增管RD糌STRICTIONDISPLAY嫩制性顯示RNARIBONUCLEICACID授耱孩酸RNASERIBONUCLEASERNA酶RPMREVOLUTIONSPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)RTPCRREVERSETRANSCRIPDONPCR反轉(zhuǎn)意CPCRSSECOND秒SDSSODIUMDODECYLSULPHATE十二烷基磺酸鈉SNPSINGLENUCLEOTIDEPOL，ANORPHYSM單核螢酸多態(tài)性SSCSTANDARDSALINECIFRATE標(biāo)準(zhǔn)聹檬酸鏊綴滓滾TEMEDN，N，N，，N，TETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEN，N，N’，N’一四甲基己二胺TRISN。TRISHYDROXYMETHLAMINOMETHANEN一三羥甲基氨撼甲烷UUNIT肇經(jīng)XGAL5BROMO一4CHLORO3一INDOLYL一5。溪一4氯一3一嘮L嫌一B岱D。GALACTOSIDE，D半乳糖苷PGMICROGRAM微克蕊MICROLITER鐓秀2

簡(jiǎn)介：H5N1亞型高致病性禽流感嚴(yán)重威脅著人類及動(dòng)物的健康。1997年香港H5N1禽流感病毒傳播到人事件的發(fā)生，更突出顯示了禽流感防治的公共衛(wèi)生意義。現(xiàn)有的禽流感診斷方法主要包括病毒分離法、RTPCR、NASBA、膠體金免疫層析技術(shù)等。每種診斷方法各有其優(yōu)點(diǎn)，但又受到幾個(gè)不利因素的限制，如成本高、處理周期長(zhǎng)以及靈敏度低等，尤其在定量分析禽流感病毒含量及病毒亞型判定的即時(shí)、準(zhǔn)確性方面尚需改進(jìn)。本研究應(yīng)用SPR生物傳感器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)傳感器芯片表面發(fā)生的抗原抗體結(jié)合解離反應(yīng)，具有快速、簡(jiǎn)便、敏感、特異、成本低等特點(diǎn)，可作為現(xiàn)有禽流感診斷方法的有益補(bǔ)充，用于檢測(cè)采集樣品或雞胚尿囊液、細(xì)胞培養(yǎng)物中的禽流感病毒。本研究制備了一種檢測(cè)H5亞型流感病毒抗原的抗體芯片和一種檢測(cè)A型流感病毒抗原的抗體芯片，利用單通道單參數(shù)表面等離子體諧振生物傳感器對(duì)H5亞型禽流感病毒和A型流感病毒的快速檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，兩者都可以直接用于樣品的檢測(cè)。在快速檢測(cè)H5亞型流感病毒研究中，分析比較了四種不同的檢測(cè)方法的檢測(cè)效果，以期獲得最靈敏、快速的檢測(cè)方法，這四種方法分別為蛋白A固定抗體檢測(cè)法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法、抗體夾心檢測(cè)法和直接檢測(cè)法。對(duì)試驗(yàn)結(jié)果分析比較發(fā)現(xiàn)將病毒樣品用1％TRITONX100在室溫條件下裂解90MIN后，采用直接檢測(cè)法較其它幾種方法更為快速。直接檢測(cè)法原理如下抗H5N1亞型流感病毒血凝素（HA）單克隆抗體固定在傳感器芯片表面以捕獲樣品中病毒抗原片段，通過監(jiān)測(cè)反應(yīng)過程中芯片表面折射率的變化獲得相關(guān)抗原片段結(jié)合量數(shù)據(jù)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析后判定樣品中檢測(cè)物存在與否及含量。通過直接檢測(cè)法確立的H5亞型流感病毒的檢測(cè)范圍為5NGML500NGML。對(duì)抗體芯片的特異性、穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，該抗體芯片對(duì)兩株H5N1亞型禽流感病毒具有特異的檢測(cè)效果，對(duì)雜蛋白無結(jié)合作用，與同為A型流感病毒的H9N2亞型無結(jié)合反應(yīng)。在H5亞型流感病毒快速檢測(cè)方法建立基礎(chǔ)之上，本研究制備了檢測(cè)A型流感病毒的抗體芯片，并對(duì)A型流感病毒的快速檢測(cè)方法進(jìn)行了初步的探索，證實(shí)A型流感病毒檢測(cè)芯片對(duì)A型流感病毒的高致病型H5亞型和我國(guó)高發(fā)型H9亞型均具有較高的特異性。

簡(jiǎn)介：目的本研究擬用呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染誘發(fā)SD大鼠引起肺炎，觀察SD大鼠肺組織病理變化，檢測(cè)TLR4通路相關(guān)因子的表達(dá)情況，初步探討其與TLR4NFΚB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系。方法60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為四組對(duì)照組、RSV組、KP組及RSVKP組，每組各15只。通過滴鼻感染法處理各組SD大鼠，于第0、1、3、5、7D相同時(shí)間段測(cè)量其體重、肺指數(shù)（LI），HE染色觀察肺部病理變化，RTPCR檢測(cè)TLR4及NFΚB的MRNA表達(dá)情況，WESTERNBLOT檢測(cè)NFΚB蛋白質(zhì)的表達(dá)豐度，ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液中TNFΑ和IL1Β炎性因子的分泌量。結(jié)果（1）肺指數(shù)與正常對(duì)照組相比，RSV組、KP組和RSVKP組SD大鼠LI呈逐漸遞增趨勢(shì)，RSV組和KP組在感染后第3、5天升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P（2）肺組織病理正常對(duì)照組SD大鼠肺泡結(jié)構(gòu)清楚，壁薄無充血，肺間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。RSV組和KP組在感染后第3天開始出現(xiàn)彌漫性肺泡間隔增厚與肺泡壁破壞，且均隨感染時(shí)間的延長(zhǎng)，肺泡結(jié)構(gòu)破壞逐漸加重。而RSVKP組從第1天開始肺組織就有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并且在感染后同一時(shí)期較RSV組和KP組更為嚴(yán)重。（3）MRNA轉(zhuǎn)錄水平正常對(duì)照組SD大鼠肺組織中TLR4MRNA、NFΚBMRNA表達(dá)很低；隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，RSV組、KP組和RSVKP組TLR4MRNA、NFΚBMRNA表達(dá)量逐漸增加，有時(shí)間依賴性。RSV組TLR4MRNA表達(dá)在感染后第5、7D升高，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P（4）NFΚB蛋白表達(dá)正常對(duì)照組中SD大鼠肺組織中NFΚB蛋白水平表達(dá)量較低，而在RSV組、KP組和RSVKP組NFΚB蛋白隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)不斷增加。RSV組在感染后第5天明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P（5）TNFΑ、IL1Β含量正常對(duì)照組中TNFΑ和IL1Β含量較低，而在RSV組、KP組和RSVKP組TNFΑ、IL1Β含量隨著感染時(shí)間點(diǎn)的延長(zhǎng)逐漸增加，有時(shí)間依賴性。RSV組和KP組TNFΑ在感染后第5、7天明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F9137P結(jié)論（1）通過滴鼻法建立RSV合并KP感染誘發(fā)SD大鼠引起肺炎的動(dòng)物模型可行。（2）RSV和KP混合感染具有協(xié)同作用，加重肺部炎癥。（3）RSV合并KP感染可能通過TLR4NFΚB途徑誘導(dǎo)肺部防御細(xì)胞釋放細(xì)胞因子TNFΑ和IL1Β等。