簡介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文靶向HTERT可調(diào)控慢病毒載體RNAI治療口腔鱗癌的研究姓名陳丹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師黃洪章20080520中山大學(xué)博士論文靶向HTERT可調(diào)控慢病毒載體RNAI治療口腔鱗癌的研究定的豐要結(jié)構(gòu)和細(xì)胞壽命的“生物鐘”，特別是端粒酶活性的豐要限速性組分人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶HTERT在超過85％以上的惡性腫瘤包括頭頸口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中特異性的持續(xù)表達(dá)可視為腫瘤細(xì)胞永生化、增殖性增強(qiáng)的關(guān)鍵因素，可望作為腫瘤鑒別診斷、基因治療的理想靶標(biāo)?；蛑委煹年P(guān)鍵和基礎(chǔ)是基因轉(zhuǎn)移，目的基因?qū)氚屑?xì)胞并使之表達(dá)是其關(guān)鍵環(huán)節(jié)?；蜣D(zhuǎn)移的非病毒學(xué)的基因轉(zhuǎn)移方法效率較低，人體實(shí)驗(yàn)的摹因治療方案絕大多數(shù)是以病毒學(xué)方法進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移的?；谌祟惷庖呷毕莅Y病毒HIVI基礎(chǔ)上制備的慢病毒載體已發(fā)展成為一種高效、安全的基因載體。慢病毒載體具有諸多優(yōu)點(diǎn)轉(zhuǎn)移基因片段容量大、不易誘發(fā)宿主免疫反應(yīng)；不僅能感染分裂細(xì)胞，還能用于感染不分裂細(xì)胞；可穩(wěn)定整合于靶細(xì)胞的基因組，能在多種組織、器官中介導(dǎo)長期而穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)，治療基因表達(dá)時(shí)間可長達(dá)六個(gè)月之久。慢病毒載體系統(tǒng)經(jīng)歷了10余年4個(gè)階段發(fā)展在構(gòu)建時(shí)把HIV1基因組中進(jìn)行包裝、逆轉(zhuǎn)錄和整合所需的順式作用元件與編碼反式作用蛋白的序列分離，分別構(gòu)建在三個(gè)獨(dú)立的質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)上，即包裝質(zhì)粒、包膜質(zhì)粒和載體質(zhì)粒；并在包裝質(zhì)粒中刪去了川V1的所有附屬基因；刪除了U3區(qū)的3LTR，使載體失去HIV1增強(qiáng)子及啟動(dòng)子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉(zhuǎn)錄出I州A；去除了刎基因代之以異源啟動(dòng)子序列，這樣原始的HIV基因組中的9個(gè)基因在制備的HIV慢病毒載體中只保留了3個(gè)觥、PD和RW；最后加入調(diào)控元件形成可誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。三質(zhì)粒系統(tǒng)通過共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞便能收獲只有一次感染能力、而無復(fù)制能力、具有自身失活特性的病毒載體顆粒。目前基因治療中的另一前沿課題便是實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因的可調(diào)控性?？烧{(diào)控轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)是指在基因表達(dá)體系中設(shè)計(jì)加入特定的誘導(dǎo)劑反應(yīng)元件，可在外源信號(hào)或者藥物的誘導(dǎo)下激活，開啟或關(guān)閉后續(xù)目的基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)。在利用RNAI進(jìn)行真核基因功能研究和治療目的時(shí)，多數(shù)轉(zhuǎn)基因都是持續(xù)表達(dá)的，沒有表達(dá)量和表達(dá)時(shí)間的調(diào)控，這種持續(xù)表達(dá)不論是在基因功能研究還是基因治療都存在很大的局限。如果對(duì)RNA沉默加以調(diào)控，設(shè)置開關(guān)，就可對(duì)選定靶基因的“開”、“關(guān)”O(jiān)N／OFR表達(dá)狀態(tài)進(jìn)行比對(duì)研究，從而準(zhǔn)確獲得靶基因的功能分析。因此可調(diào)控、可誘導(dǎo)系統(tǒng)被認(rèn)為是未來RNAI的重要發(fā)展方向。理想化的可調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)是目標(biāo)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后，在外源信號(hào)或者藥物的誘導(dǎo)下在適當(dāng)時(shí)機(jī)開啟，按照施與誘導(dǎo)劑的劑量、時(shí)問依賴性進(jìn)行精確的轉(zhuǎn)錄和翻譯，使其在治療過程中根據(jù)具

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簡介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文甘草酸體外抗單純皰疹病毒作用姓名黃穗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病原生物學(xué)指導(dǎo)教師蔡挺200251浙江人學(xué)廷學(xué)院碩F論義I學(xué)陵體外抗J包疹嫡毒作用素IFN是一類重要的細(xì)胞素，它們?cè)谕N細(xì)胞上具有廣譜的抗病毒、抗細(xì)胞分裂、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性。2’，5’寡腺苷酸合成酶2’，5’OLIGOADENYLATESYNTHETASE25AS是干擾素抗病毒、抗細(xì)胞增殖過程中的關(guān)鍵酶，該酶可作為一項(xiàng)生化指標(biāo)用于評(píng)價(jià)機(jī)體IFN系統(tǒng)的抗病毒作甩，一／本實(shí)驗(yàn)旨在研究甘草酸抗病毒單純皰疹病毒作用，并進(jìn)一步了解甘草酸抗病毒的機(jī)理所在。通過此研究有助于明確甘草酸對(duì)單純皰疹病毒引起的疾病的治療作用，通過檢測甘草酸用藥前后2’，5’寡腺苷酸合成酶的變化了解甘草酸抗病毒機(jī)理，使甘草酸廣泛用于病毒性疾病的治療。／對(duì)象和方法＼一攻擊病毒為HSVI，而HEP2細(xì)胞為靶細(xì)胞，藥物～甘草酸是SIGMA公司產(chǎn)品，為白色粉術(shù)狀的甘草酸單銨鹽，分子量為8214，HPLC測定純度為75％。先測定病毒毒力；再進(jìn)行藥物細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)；藥物抗病毒實(shí)驗(yàn)，包括甘草酸對(duì)病毒所致的細(xì)胞病變的抑制作用、甘草酸對(duì)病毒侵入細(xì)胞的阻斷作用、甘草酸對(duì)病毒的直接抑制作用、相同濃度甘草酸對(duì)不同濃度病毒的抗病毒作用；給小鼠注射不同濃度甘草酸，檢測注射前與注射后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)2’，5’寡腺苷酸合成酶的變化。結(jié)果1、藥物細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)甘草酸對(duì)HEP2細(xì)胞的最大無毒濃度為25MG／ML，而且使用無毒濃度甘草酸的細(xì)胞生長得比對(duì)照組更好，維持時(shí)M更長，說明L_革酸有促進(jìn)細(xì)胞生長的作F|。2、藥物抗病海實(shí)驗(yàn)

簡介：點(diǎn)擊查看更多雌激素對(duì)大鼠海馬FKBPs表達(dá)和顱腦創(chuàng)傷后認(rèn)知功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒H101對(duì)肝癌細(xì)胞生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究姓名陳靈華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師彭淑牖200341一塑婆查蘭堡主蘭堡堡蘭毒。HIOI的E1B基因編碼55KDA蛋白的序列缺失因此它在P53基因突變的癌細(xì)胞中仍可表現(xiàn)出很強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用，而在正常細(xì)胞中它的復(fù)制被大大抑制。H101腫瘤增殖的選擇性使它有望成為一種新的腫瘤治療藥物。目前H101已經(jīng)進(jìn)入I臨床試驗(yàn)階段，但主要集中在體表腫增的治療，而對(duì)于深部腫瘤如肝癌、胃癌、結(jié)腸癌和食道癌的治療尚屬空白。文獻(xiàn)報(bào)道肝癌P53基因的突變率達(dá)3050％。P53基因的突變與肝癌分化、侵襲性、門靜脈癌栓、轉(zhuǎn)移能力與預(yù)后有密切相關(guān)性，因此針對(duì)肝癌的P53基因治療對(duì)改善肝癌的預(yù)后有重要意義。本文擬就H101對(duì)體外、體內(nèi)肝癌細(xì)胞生長的抑制作用及其與P53突變的關(guān)系進(jìn)行研究同時(shí)將阿霉素與H101聯(lián)用，探討兩者在殺傷肝癌細(xì)胞時(shí)的協(xié)同作用。全部研究包括以下三部分。第一部分重組腺病毒H101對(duì)體外肝癌細(xì)胞生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究目的研究H101對(duì)體外肝癌細(xì)胞生長的抑制作用與細(xì)胞株P(guān)53基因突變的關(guān)系探討HJ01的抑制作用與肝癌細(xì)胞P53及其P53通路的R甜基因P2L“‘。表達(dá)的關(guān)系。方法所用細(xì)胞株分別為P53基因無突變的肝癌細(xì)胞株HEPG2和BEL7404，P53基因缺失的肝癌細(xì)胞株HEP3B，永生化正常肝細(xì)胞L02。用聚合酶鏈反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTIOIL，PCR和單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析SINGLESTRANDCONFORMATIONPOLYMORPHISMSSCP分析永生化正常肝細(xì)胞L02的P53基因狀況。在；3終極稀釋滴定法確定H101滴度后，分別以不同的空斑形成單位／細(xì)胞MULTIPLEOFINFECTION，MOD感染不同P53基因型的細(xì)胞株，培養(yǎng)8天后用MTT法觀察H101對(duì)細(xì)胞的殺傷作用。用5MOI的H1叭感染L02、HEPG2和HEPG2，并設(shè)不加病毒的對(duì)照組然后分別在感染后第24、36小時(shí)取樣，用免疫組化染色觀察細(xì)胞株P(guān)53、P21WA”基因表達(dá)的變化。結(jié)果1L02的P53基因無突變C2

簡介：茅莓（RUBUSPARVIFOLIUSL）為薔薇科（ROSACEAE）懸鉤子屬植物，落葉小灌木，生于山坡、路旁荒地、灌叢和草叢中，適應(yīng)性強(qiáng)，資源十分豐富，分布于河北、山西、陜西、四川以及中南和華東各省。茅莓為傳統(tǒng)民間中藥，根、莖、葉及全草均可藥用，具有清熱涼血、散結(jié)止痛、利尿消腫等功效，用于治療腸炎、肝脾腫大、黃膽、慢性肝炎、跌打腫痛、風(fēng)濕骨痛、泌尿系統(tǒng)感染等。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，茅莓的水提物具有止血和活血化瘀作用，為開發(fā)這類活血化瘀藥物開辟了廣闊前景。據(jù)報(bào)道，關(guān)于茅莓的化學(xué)成分國內(nèi)外研究都甚少，目前從該植物中只分出了九個(gè)化合物。為豐富該屬植物天然藥物化學(xué)的應(yīng)用基礎(chǔ)研究成果，為開發(fā)和利用本地區(qū)傳統(tǒng)中藥茅莓，本課題對(duì)茅莓根莖進(jìn)行傳統(tǒng)的分離，經(jīng)過溶劑處理和反復(fù)層析分離共分得10個(gè)單體化合物。依據(jù)理化常數(shù)測定，各種光譜數(shù)據(jù)分析，鑒定了7個(gè)化合物，它們分別是Β谷甾醇（ΒSITOSTEROL，化合物1）；月桂酸（LAURICACID，化合物2）；類Β谷甾醇（SIMILARΒSITOSTEROL，化合物3）；Β胡蘿卜甙（ΒDAUCOSTEROL，化合物4）；薔薇酸EUSCAPHICACID，化合物5；3Β，16Α，22Α，28四羥基齊墩果12烯（CAMELLIAGENINA，化合物6）；3甲氧基兒茶素（3METHOXYCATECHIN，化合物7）。還有3個(gè)未知化合物，結(jié)構(gòu)還有待進(jìn)一步的解析。其中化合物2，3，7為首次從該植物中分離得到。我們對(duì)茅莓根莖乙酸乙酯部位做了抗乙肝的研究，發(fā)現(xiàn)茅莓的乙酸乙酯中C9這一部位對(duì)HEPG2215細(xì)胞株HBSAG和HBEAG表達(dá)的影響效果明顯。

簡介：研究背景及目的近來研究證明，將鎮(zhèn)痛相關(guān)基因?qū)胫袠猩窠?jīng)系統(tǒng)能取得較好的鎮(zhèn)痛作用，這為晚期癌癥患者和慢性疼痛患者帶來了希望。重組腺相關(guān)病毒是目前認(rèn)為最安全的病毒載體，在許多疾病的治療中都得到應(yīng)用。但在疼痛治療領(lǐng)域研究較少。本研究擬構(gòu)建含人前腦啡肽原基因HUMANPREPROENKEPHALIN，HPPE的重組腺相關(guān)病毒2型RECOMBINANTADENOASSOCIATEDVIRUSTYPE2，RAAV2載體RAAV2HPPE。觀察其對(duì)不同神經(jīng)細(xì)胞的感染特性及轉(zhuǎn)染此病毒后HPPE基因的表達(dá)。將此病毒載體注射到慢性疼痛模型大鼠體內(nèi)，觀察RAAV2介導(dǎo)的HPPE體內(nèi)轉(zhuǎn)染的鎮(zhèn)痛作用。方法1重組人前腦啡肽原基因腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建從PCMVHPPE質(zhì)粒上克隆HPPE基因，構(gòu)建到質(zhì)粒骨架上含有新霉素抗性基因表達(dá)盒的質(zhì)粒PSNAV上得到重組PSNAVHPPE，將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞后，用G418篩選培養(yǎng)形成穩(wěn)定攜帶RAAV2載體的混合細(xì)胞株BHKSH1；再用HSV1RC△UL2感染、包裝此細(xì)胞株并收獲病毒RAAV2HPPE。用SDSPAGE電泳測定蛋白質(zhì)純度，用SOUTHERNBLOT測定病毒滴度。2用陽性對(duì)照病毒RAAV2EGFP分別感染體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和神經(jīng)干細(xì)胞，觀察RAAV2對(duì)這三種細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率，用5％血清誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染后的神經(jīng)干細(xì)胞，觀察RAAV2感染對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的分化、傳代的影響；用RAAV2HPPE感染上述三種細(xì)胞，RTPCR方法檢測細(xì)胞感染后目的基因HPPE的表達(dá)，用放射免疫方法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中LEK的含量。3將陽性對(duì)照質(zhì)粒RAAV2EGFP分別經(jīng)蛛網(wǎng)膜下、尾靜脈和骨骼肌注射到大鼠體內(nèi)，觀察RAAV2對(duì)大鼠不同組織感染的情況，將RAAV2HPPE經(jīng)上述三種途徑注射到慢性擠壓傷CHRONICCONSTRICTIONINJURY，CCI疼痛模型大鼠體內(nèi)，測痛并觀察注射后大鼠感覺異常和痛覺過敏的變化，用RTPCR方法測定大鼠注射后各組織HPPE的表達(dá)，用放射免疫方法測定大鼠器官組織中亮氨酸腦啡肽LEK的含量。結(jié)果1獲得了高滴度251012VGML和高純度的病毒顆粒；2細(xì)胞轉(zhuǎn)染RAAV2EGFP的結(jié)果顯示RAAV2在神經(jīng)元和神經(jīng)干細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率較高，于7～10天達(dá)到高峰，而對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率較低；病毒轉(zhuǎn)染后神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特性未發(fā)生改變。神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)分化、傳代后EGFP的表達(dá)未受影響；和未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染RAAV2HPPE后，各細(xì)胞HPPEMRNA的表達(dá)均增高，培養(yǎng)基上清中LEK的含量顯著性增高星形膠質(zhì)細(xì)胞154±5VS98±3P＜001；神經(jīng)元377±9VS112±5P＜001；神經(jīng)干細(xì)胞298±13VS74±6P＜001。3大鼠經(jīng)靜脈注射RAAV2EGFP可使血管、骨骼肌等組織表達(dá)綠色熒光，經(jīng)脊髓注射和骨骼肌注射，僅在注射部位周圍發(fā)現(xiàn)熒光表達(dá)；和對(duì)照組相比，不同途徑注射RAAV2HPPE均能提高CCI大鼠的機(jī)械刺激和熱痛刺激的縮爪閾值；經(jīng)脊髓或骨骼肌注射RAAV2HPPE，大鼠注射部位的組織內(nèi)HPPEMRNA表達(dá)增高，LEK的含量增高分別為2350±255VS613±18P＜001；209±13VS0P＜001。和對(duì)照組比，經(jīng)尾靜脈注射的大鼠HPPEMRNA的表達(dá)和LEK的含量在脊髓、骨骼肌和血管壁均升高LEK含量分別為1139±131VS613±18P＜005；2111±25VS23±08P＜001；121±25VS0P＜001。結(jié)論1重組人前腦啡肽原基因腺相關(guān)病毒2型載體能高效轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)元和神經(jīng)干細(xì)胞，使之高表達(dá)LEK。2通過蛛網(wǎng)膜下、尾靜脈和骨骼肌三種途徑將RAAV2HPPE注射到CCI大鼠體內(nèi)，均能獲得較好的鎮(zhèn)痛效果。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文對(duì)蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表（中文版）的應(yīng)用研究姓名張立秀申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)護(hù)理學(xué)指導(dǎo)教師劉雪琴20080415中文摘要近年來國際上對(duì)MCI篩查評(píng)估量表進(jìn)行了大量的研究和探索，不斷改進(jìn)更新，逐漸向簡便、耗時(shí)短且準(zhǔn)確性高并與現(xiàn)代技術(shù)相結(jié)合的神經(jīng)心理學(xué)量表方面發(fā)展，大致有以下幾個(gè)發(fā)展方向借用認(rèn)知篩查工具、聯(lián)合使用篩查工具、研制專用工具、開發(fā)計(jì)算機(jī)軟件版的測試工具。國外的MCI篩查工具有1借用癡呆及其他篩查工具簡易智能狀態(tài)檢查MINIMENTALSTATUSEXAMINATION，MMSE、畫鐘測驗(yàn)CLOCKDRAWINGTEST，CDT、提示回憶測試ENHANCEDCUEDRECALL，ECR、七分鐘篩查7MINUTESCREEN、簡短認(rèn)知能力測試THESHORTCOGNITIVEPERFORMANCETEST，SYNDROMKURZTEST，SKT、電話篩查認(rèn)知功能TICS、嗅覺篩查試驗(yàn)THESNIFFIN’STICKSSCREENINGTEST，SSST；2聯(lián)合使用篩查工具的嘗試MMSE和CDT聯(lián)合篩查、MMSE和認(rèn)知能力篩查試驗(yàn)COGNITIVECAPACITYSCREENINGEXAMINATION，CCSE組合成CMC兩者縮寫篩查；3測試全面的MCI專用篩查工具ABCSABCOGNITIVESCREEN、MTMEMORYALTERATIONTESTL、DEMTECT、MOCATHEMONTREALCOGNITIVEASSESSMENT、ATRIAGEFORCOGNITIVESCREENING；4與現(xiàn)代技術(shù)相結(jié)合的篩查工具計(jì)算機(jī)實(shí)施的輕度認(rèn)知障礙的神經(jīng)篩查CANSMCITHECOMPUTERADMINISTEREDNEUROPSYCHOLOGICALSCREENFORMILDCOGNITIVEIMPAIRMEN0。我國的MCI研究起步較晚，其篩查工具主要是國外引進(jìn)和翻譯的癡呆評(píng)估量表，如MMSE、CDT、TICS。同時(shí)也嘗試了將世界衛(wèi)生組織老年認(rèn)知功能評(píng)價(jià)成套神經(jīng)心理測驗(yàn)WHOBCAI、圖片學(xué)習(xí)、韋氏記憶量表中文修訂版WMSRC、BOSTON命名測驗(yàn)、聽覺詞語記憶測驗(yàn)AVMT等認(rèn)知測試用于我國老年人群的MCI篩查研究，甚至自行編制老年記憶功能問卷。但上述測試工具在我國尚缺乏大規(guī)模的驗(yàn)證，如老年記憶功能問卷的樣本量僅為16例，且篩查效果值得商榷。目前我國對(duì)MCI的篩查主要還是沿用的上述癡呆的篩查評(píng)估工具，但MCI與癡呆是有差別的，前者認(rèn)知水平是明顯高于后者的，故隨著對(duì)MCI研究的深入，針對(duì)MCI的專用篩查工具是急需的、也是必要的。從國外直接引進(jìn)和部分修訂的癡呆評(píng)估量表雖然測試簡短，但由于不同文化背景和人群特征，會(huì)有偏倚的產(chǎn)生，尤其用于認(rèn)知水平高于癡呆的MCI患者，Ⅱ

簡介：點(diǎn)擊查看更多Ⅰ：沙蠶纖溶酶—沙蠶激酶的克隆、表達(dá)及活性測定;Ⅱ：漢灘病毒截短核蛋白的表達(dá)和初步應(yīng)用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多柯薩奇B組病毒感染哮喘兒臨床特征的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的研究融合型自殺基因FCYFUR聯(lián)合5FC對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO8910的殺傷效果方法1根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體PLXSN和LZRSPBMNZ的多克隆位點(diǎn)及質(zhì)粒PF5FCYFUR上FCYFUR的基因序列設(shè)計(jì)兩對(duì)PCR引物在引物的5端分別引入ECⅠ和BAMHⅠ酶切位點(diǎn)采用常規(guī)PCR從PF5FCYFUR中擴(kuò)增出FCYFUR融合基因經(jīng)核酸序列測定正確后分別克隆進(jìn)PLXSN和LZRSPBMNZ經(jīng)雙酶切鑒定后分別轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞PT67和PHEONIX擴(kuò)大培養(yǎng)陽性克隆并收集上清獲得重組逆轉(zhuǎn)錄病毒2重組病毒感染靶細(xì)胞HO8910分別以G418和嘌呤霉素篩選得到穩(wěn)定表達(dá)FCYFUR的陽性細(xì)胞株命名為HO8910FCYFUR并經(jīng)抽提細(xì)胞基因組DNA和RNA分別進(jìn)行PCR和RTPCR等鑒定目的基因的整合與表達(dá)3在HO8910FCYFUR中加入前藥5FCMTT法測定腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡比例以及免疫組化檢測凋亡相關(guān)蛋白FAS和FASL等的表達(dá)結(jié)論融合型自殺基因FCYFUR聯(lián)合5FC可對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO8910產(chǎn)生明顯的殺傷作用凋亡可能參與了殺傷機(jī)制5FC加入后發(fā)生了FAS和FASL表達(dá)的上調(diào)提示殺傷機(jī)制可能與FAS和FASL誘導(dǎo)的凋亡相關(guān)

簡介：藥物肝毒性是導(dǎo)致新藥研發(fā)失敗的一個(gè)重要原因，成為藥物毒理學(xué)家急需解決的問題。功能基因組學(xué)技術(shù)在新藥研發(fā)和藥物安全性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用，為藥物毒理學(xué)家預(yù)測先導(dǎo)化合物的毒性和研究毒作用機(jī)制提供了嶄新的理論和手段。BAY414109是一種全新結(jié)構(gòu)和作用方式的非核苷類抗乙肝病毒的藥物，有很強(qiáng)的抗病毒活性，目前正處于早期研發(fā)階段，但在早期毒理學(xué)研究方面其一般毒性、毒作用靶器官、毒作用機(jī)制均未開展系統(tǒng)研究。本課題采用傳統(tǒng)的毒性試驗(yàn)和“組學(xué)”技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)BAY414109的肝毒性進(jìn)行了研究，探討其可能的毒作用機(jī)理，為BAY414109作為新型抗乙肝病毒藥物的研發(fā)提供毒理學(xué)依據(jù)，并為轉(zhuǎn)錄組學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)在肝藥酶誘導(dǎo)劑的肝毒性研究中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)BAY414109≥100MGKG在BEAGLE犬引發(fā)的主要癥狀是精神萎靡，食欲減退，流涎，進(jìn)食后嘔吐，雌性動(dòng)物癥狀更明顯。血液學(xué)、血漿生化、凝血指標(biāo)及尿液檢查僅見血漿TCHOL增高。病理檢查發(fā)現(xiàn)BAY414109≥100MGKG引起犬和大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，局部有小灶性壞死，大鼠肝細(xì)胞線粒體受損嚴(yán)重。此外BAY414109對(duì)大鼠CYP3A有輕度誘導(dǎo)作用，對(duì)總CYP450和CYP2B12有非常顯著的誘導(dǎo)作用，其誘導(dǎo)CYP450的代謝酶譜改變與苯巴比妥基本一致。推斷BAY414109基本無毒作用劑量為30MGKG，肝臟是其主要毒作用靶器官之一?；蛐酒Y(jié)果顯示，BAY414109引起大鼠肝臟基因表達(dá)改變主要與藥物代謝及脂肪、氨基酸和能量代謝有關(guān)，其中對(duì)藥物代謝Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相酶的影響與苯巴比妥一致；體外試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)BAY414109對(duì)HEPG2細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響也主要與脂肪、能量代謝有關(guān)。提示BAY414109可能通過損傷線粒體，改變肝細(xì)胞脂肪、能量代謝進(jìn)而影響肝細(xì)胞的功能，其分子機(jī)制可能與苯巴比妥通過CAR介導(dǎo)的多種生化過程改變一致。利用NMR技術(shù)檢測BAY414109染毒后大鼠的尿液、血漿和肝組織萃取物中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物譜的變化則發(fā)現(xiàn)BAY414109在400MGKG劑量下引起血漿中VLDLLDLCH2N、VLDLLDLCH3、3羥基丁酸鹽、乳酸、丙酮酸、牛磺酸等代謝成分明顯增高；尿液中3羥基丁酸鹽、乳酸、2羥基丙酮、草酰乙酸、右旋葡萄糖等明顯增高；肝組織水溶性萃取物中乳酸、丙酮酸、牛磺酸、膽堿、三甲胺N氧化物等代謝成分明顯增高，右旋葡萄糖則降低。肝組織脂溶性成分的分析發(fā)現(xiàn)，一些飽和脂肪酸和不飽和的甘油三酸酯、磷脂和膽固醇發(fā)生改變。這些代謝成分的改變提示線粒體功能障礙導(dǎo)致能量代謝中的糖酵解、糖異生增強(qiáng)，脂肪酸氧化增強(qiáng)，與基因芯片的結(jié)果一致。對(duì)BAY414109染毒后尿液代謝組的時(shí)間軌跡分析表明，尿中乳酸、肌酐、丙酮酸、糖基可以作為BAY414109肝毒性的生物標(biāo)志物研究。綜上，我們認(rèn)為BAY414109是CYP450的強(qiáng)誘導(dǎo)劑，基本無毒作用劑量為30MGKG，肝臟是其主要毒作用靶器官之一。BAY414109肝毒性可能的機(jī)制是通過CAR介導(dǎo)的肝臟藥物代謝酶和與脂肪、能量代謝有關(guān)的酶的基因表達(dá)改變及損傷線粒體導(dǎo)致能量代謝中的糖酵解、糖異生增強(qiáng)，脂肪酸氧化增強(qiáng)，進(jìn)而影響肝細(xì)胞功能。毒理基因組學(xué)和毒理代謝組學(xué)技術(shù)是研究肝藥酶誘導(dǎo)劑的肝毒性的理想工具。傳統(tǒng)毒性試驗(yàn)、毒理基因芯片和代謝組學(xué)三種手段結(jié)合能更全面地闡明藥物的肝毒性，對(duì)新藥研發(fā)階段的藥物毒理學(xué)研究有重大意義。

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文慢性緊張型頭痛患者的認(rèn)知特點(diǎn)以及認(rèn)知行為治療對(duì)其認(rèn)知、情緒和疼痛感受的影響姓名王路申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)應(yīng)用心理學(xué)指導(dǎo)教師彭淼20090401為顯著PO05。4、各干預(yù)組前后疼痛程度變化各組干預(yù)組BPL分值治療前后差異均有顯著性PO05結(jié)論L、CTTH患者存在較多的負(fù)性自動(dòng)思維和疼痛災(zāi)難化，消極的疼痛應(yīng)對(duì)方式使用較多，積極的疼痛應(yīng)對(duì)方式使用較少。2、針對(duì)不良疼痛認(rèn)知及應(yīng)對(duì)方式的CBT可以改善CTTH患者的認(rèn)知，對(duì)負(fù)性自動(dòng)思維、疼痛災(zāi)難化和疼痛應(yīng)對(duì)方式有良好的作用。氟西汀治療可以改善CTTH患者的負(fù)性自動(dòng)思維，但對(duì)疼痛災(zāi)難化的改善不明顯。3、CBT、氟西汀治療及兩種方法相結(jié)合的方式均可以改善CTTH患者的不良情緒及疼痛感受。聯(lián)合治療對(duì)疼痛程度的緩解更好。關(guān)鍵詞慢性緊張型頭痛；認(rèn)知模式；應(yīng)對(duì)方式；認(rèn)知行為治療；氟西??；災(zāi)難化2

簡介：點(diǎn)擊查看更多腺病毒介導(dǎo)N-Bak基因轉(zhuǎn)移對(duì)大鼠紅核脊髓束的修復(fù)作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV是困擾我國人民健康的重要傳染性疾病，其中相當(dāng)一部份發(fā)展成為慢性乙型肝炎，有些還可能進(jìn)一步演變?yōu)楦斡不⒏渭?xì)胞癌等。目前臨床上常使用拉咪呋叮3TC與干擾素ΑIFNΑ治療慢性活動(dòng)性乙型肝炎。其中3TC是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制物，能顯著下調(diào)患者體內(nèi)病毒核酸水平；而IFNΑ是一類同時(shí)具有免疫調(diào)節(jié)和抗病毒作用的細(xì)胞因子類藥物，臨床資料表明IFNΑ能下調(diào)病毒蛋白表達(dá)，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，促進(jìn)抗體產(chǎn)生，但是有效率不到40％。對(duì)HBV能否拮抗以及如何拮抗IFNΑ抗病毒效應(yīng)，近年來國內(nèi)外眾多實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了研究并已獲得具有一定意義的結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)IFNΑ反應(yīng)性明顯弱于健康對(duì)照，MXA蛋白誘生障礙；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)HBV前CE或CE蛋白可結(jié)合MXA基因上游啟動(dòng)子，從而抑制MXA蛋白表達(dá)。另外對(duì)IFNΑ耐藥的乙型肝炎患者先使用3TC降低病毒滴度后再給予IFNΑ治療，可以提高IFNΑ療效。以上結(jié)果提示HBV與IFNΑ間存在相互作用，而且這種相互作用可能是多方面的。可以推測HBV可能通過病毒復(fù)制和蛋白表達(dá)對(duì)干擾素誘生與效應(yīng)信號(hào)通路中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，使內(nèi)源性干擾素產(chǎn)生不足或干擾素抗病毒效應(yīng)被拮抗，從而導(dǎo)致感染慢性化以及對(duì)IFNΑ的治療不敏感。多角度深入研究HBV與IFNΑ相互作用的機(jī)制有可能有助于加深對(duì)HBV慢性感染機(jī)制的認(rèn)識(shí)。為此，本課題擬利用體外HBV穩(wěn)定和短暫復(fù)制細(xì)胞系統(tǒng)，通過改變HBV復(fù)制狀態(tài)，比較HBV不同復(fù)制水平下細(xì)胞內(nèi)IFN信號(hào)通路與相關(guān)效應(yīng)基因表達(dá)的變化以揭示HBV復(fù)制和蛋白表達(dá)對(duì)干擾素相關(guān)信號(hào)通路的影響，并初步探索其分子機(jī)制。本研究首先建立了可模擬HBV不同復(fù)制和蛋白表達(dá)水平的細(xì)胞系統(tǒng)，包括經(jīng)3TC處理的原可持續(xù)分泌病毒抗原和進(jìn)行病毒基因復(fù)制的HEPG22215、瞬轉(zhuǎn)具有不同復(fù)制能力的HBV質(zhì)粒和編碼病毒POL蛋白質(zhì)粒的HUH7細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，3TC可明顯抑制HEPG22215細(xì)胞內(nèi)病毒核酸復(fù)制，對(duì)CE蛋白水平也有一定程度的抑制作用，但對(duì)病毒的S抗原、E抗原等病毒蛋白無明顯抑制作用；野生型HBV質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)可啟始HBV基因復(fù)制，HBV復(fù)制缺陷型HBV質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)則不發(fā)生HBV基因的復(fù)制。在此基礎(chǔ)上，對(duì)HBV不同復(fù)制水平下細(xì)胞內(nèi)IFN信號(hào)通路與相關(guān)效應(yīng)基因表達(dá)的變化進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在3TC處理后、HBV基因復(fù)制受到明顯抑制的情況下，HEPG22215細(xì)胞對(duì)IFNΑ刺激的反應(yīng)性可得到不同程度恢復(fù)，表現(xiàn)為內(nèi)源性ISGS表達(dá)上調(diào)，IFN信號(hào)通路熒光報(bào)告系統(tǒng)指示信號(hào)通路活化強(qiáng)度變大，提示HBV復(fù)制與細(xì)胞對(duì)IFNΑ的反應(yīng)性存在一定相關(guān)性。進(jìn)一步應(yīng)用瞬轉(zhuǎn)兩種具有完全不同復(fù)制能力HBV質(zhì)粒的細(xì)胞比較其對(duì)IFNΑ的反應(yīng)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)制缺陷型HBV對(duì)IFNΑ信號(hào)通路誘導(dǎo)表達(dá)的熒光酶的抑制效應(yīng)弱于野生型HBV，但恢復(fù)其復(fù)制能力后抑制IFNΑ信號(hào)通路的效應(yīng)仍可得到加強(qiáng)，進(jìn)一步提示在HBV拮抗IFN系統(tǒng)的作用中，病毒基因復(fù)制因素可能發(fā)揮重要作用。由于在HBV基因復(fù)制受到抑制時(shí)CE蛋白的水平也出現(xiàn)一定程度下降，而體外單獨(dú)瞬轉(zhuǎn)HBV復(fù)制酶POL也發(fā)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)IFNΑ的應(yīng)答性亦出現(xiàn)下降趨勢，可以推測HBV的CE蛋白和病毒復(fù)制酶POL均可能參與HBV對(duì)IFN信號(hào)通路的拮抗作用。為明確HBV對(duì)IFN信號(hào)通路中JAKSTAT信號(hào)通路的影響，本研究進(jìn)一步檢測了不同HBV復(fù)制水平的細(xì)胞中STAT1蛋白的表達(dá)及磷酸化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與未處理組相比，3TC處理后、HBV基因復(fù)制受到明顯抑制的HEPG22215細(xì)胞在受IFNΑ刺激后其STAT1蛋白表達(dá)以及磷酸化水平并未得到顯著加強(qiáng)，這提示HBV抑制IFNΑ信號(hào)通路的作用可能通過其它環(huán)節(jié)進(jìn)行。綜上所述，本研究結(jié)果表明HBV在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時(shí)可干擾IFN誘發(fā)的信號(hào)通路，其中CE蛋白和病毒復(fù)制酶POL可能發(fā)揮了重要作用。然而這一干擾作用可能與STAT1誘導(dǎo)性表達(dá)及其磷酸化水平無關(guān)，提示IFNΑ信號(hào)通路的其它環(huán)節(jié)可能受到影響。對(duì)此現(xiàn)象的深入研究有可能揭示HBV拮抗干擾素的分子機(jī)制，豐富細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制以及對(duì)人類基因功能等的認(rèn)識(shí)，并可能為優(yōu)化臨床治療方案提供理論依據(jù)。