簡介：南方醫(yī)科大學2005級在職碩士學位論文重組人P53腺病毒經(jīng)皮穿刺瘤內(nèi)注射治療脊柱轉(zhuǎn)移瘤的臨床研究CLINICALRESEARCHONTHETREATMENTOFMETASTATICSPINETUMORSPERCUTANEOUSINJECTEDWITHRECOMBINANTADENOVIRUSP53課題來源深圳市衛(wèi)生科技計劃項目基金200507120846A專業(yè)名稱骨科學學位申請人林健澤指導教師江建明教授答辯委員會主席鐘世鎮(zhèn)院士答辯委員會成員查振剛教授蔡道章教授黃東生教授劉少喻教授論文評閱人萬勇教授戎利民教授朱青安教授2010年5月16日在職碩士學位論文重組人P53腺病毒經(jīng)皮穿刺瘤內(nèi)注射治療脊柱轉(zhuǎn)移瘤的臨床研究在職碩士研究生林健澤指導教師江建明教授摘要【背景】由于解剖和生物學特點，脊柱是骨轉(zhuǎn)移瘤最常見的好發(fā)部位。據(jù)資料統(tǒng)計，脊柱轉(zhuǎn)移痛的發(fā)生率是骨原發(fā)惡性腫瘤的35．40倍。據(jù)同外資料統(tǒng)計每年新確診的惡性腫瘤中，有2／3的病例已發(fā)生其他部位的轉(zhuǎn)移。隨著對原發(fā)惡性腫瘤治療方法的不斷改進，病人渴望生存期的不斷延長，它的遠隔轉(zhuǎn)移病灶逐漸成為影響生存率和生存質(zhì)量的重要因素。脊柱轉(zhuǎn)移瘤所造成的病理性骨折、脊髓壓迫、高鈣血癥和骨髓衰竭等并發(fā)癥，加速了病情的發(fā)展，嚴重地影響惡性腫瘤患者的生存質(zhì)量。盡管近年來，許多學者在脊柱轉(zhuǎn)移瘤的發(fā)生機制、防治方法等方面進行了不懈的努力，但迄今為止仍未到有效的根治手段。由于脊柱解剖結構的復雜及其與周圍重要組織結構的密切關系，現(xiàn)多采用放療、化療，少數(shù)手術，但進行脊柱轉(zhuǎn)移瘤的大部切除或徹底的根治性切除比較困難，且創(chuàng)傷大，出血量大，并發(fā)癥較多，所以脊柱轉(zhuǎn)移痛的治療仍存在爭議，脊柱轉(zhuǎn)移瘤的綜合性治療顯得尤為重要。P53基因是與腫瘤關系最密切的腫瘤抑制基因，60％以上的腫瘤存在P53基因的異常包括點突變、等位基閃缺失、重排、插入、基因融合等。P53基因與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及臨床療效均有密切關系。耳前研究認為，P53基因

簡介：流感是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，它的季節(jié)性暴發(fā)對人類的公共健康造成危害。近年來，高致病性禽流感在世界范圍流行，造成了巨大的經(jīng)濟損失，并且由于它可以侵染人類和極高的致死率引起了世界的廣泛關注。流感病毒是有包膜的負鏈RNA病毒，結構由里到外依次是核衣殼、包膜和刺突。A型和B型流感病毒包膜上散布著形態(tài)不一的兩種蛋白刺突，分別是血凝素HEMAGGLUTININ，HA和神經(jīng)氨酸酶NEURAMINIDASE，NA。NA可以水解宿主細胞表面糖蛋白神經(jīng)氨酸，釋放出成熟的流感病毒體，并防止新生病毒體的聚集。NA具有抗原性，其抗體可以抑制新生流感病毒從宿主細胞內(nèi)釋放。因此NA在流感病毒復制過程中的作用至關重要。流感病毒變異快，疫苗的預防效果不理想。神經(jīng)氨酸酶NA抑制劑是近年來研制成功的新型抗流感病毒藥物，對于A、B型流感的治療和預防都有很好的效果。目前已經(jīng)上市的有吸入劑ZANAMIVIR和口服劑OSELTAMIVIR。扎那米韋ZANAMIVIR是澳大利亞BIOTASCIENCE公司研發(fā)的流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。由GLAXOWELLCOME公司開發(fā)生產(chǎn)并推向市場，商品名RELENZA，用于治療A和B型流感病毒導致的流行性感冒，是治療高致病性禽流感的有效藥物。扎那米韋是第一個神經(jīng)氨酸酶抑制劑類流感病毒治療藥，它的研制成功，被專家們認為是治療流感方面取得的較大進展。扎那米韋的合成一般以N乙?；鵇神經(jīng)氨酸為起始原料，引入2，3不飽和鍵及4胍基。主要的合成路線都經(jīng)關鍵中間體7，8，9三O乙?；鵑乙?；?，4二脫氧2，3脫氫4Α疊氮基D神經(jīng)氨酸甲酯。本課題的研究是為了響應國家號召，打通扎那米韋的合成路線，制定工業(yè)化生產(chǎn)的工藝路線，為我國預防和治療禽流感儲備重要的應急藥物。同時提供重要的原料中間體，為進一步研究出活性更好的流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑奠定基礎。本文綜述了近年來流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的研究進展，優(yōu)選重組文獻報道的扎那米韋合成工藝路線，以N乙酰基D神經(jīng)氨酸為起始原料，經(jīng)酯化、?；h(huán)合、用三甲基硅疊氮立體選擇性引入4疊氮基，得到關鍵中間體7，8，9－三－O乙?；璑－乙?；?，4二脫氧－2，3－脫氫4Α疊氮基D神經(jīng)氨酸甲酯，再經(jīng)還原、與1－脒基吡唑單鹽酸鹽反應引入4胍基后水解，共6步反應合成了目標產(chǎn)物扎那米韋，總收率15％，較文獻報道的最高收率10％提高了近50％。本文在文獻和專利的基礎上對扎那米韋的合成工藝路線進行了改進和優(yōu)化，減少了反應步驟，簡化了后處理操作，提高了收率，大幅度的降低了成本。同時，對扎那米韋的合成工藝進行了詳細考察，得出各步反應的影響因素及實驗操作的控制方法。本文所采用的工藝路線經(jīng)中試放大得到進一步證實。整條路線無特殊試劑和苛刻操作條件，無需硅膠柱色譜或制備型HPLC，重現(xiàn)性好，為工業(yè)放大奠定了扎實基礎。

簡介：中南大學碩士學位論文EB病毒LMP1通過JAK和MAPK通路介導STAT3調(diào)控VEGF的分子機制研究姓名王禎蓮申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師曹亞20070501碩士學位論文中文摘要LMPLSTAT3一、，EGF、ERKI陀／信號轉(zhuǎn)導通路，證實LMPI在VEGF功能性活化中的病理生理學意義。為進一步探討STAT3信號通路在鼻咽癌細胞侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用機制。我們利用劃痕實驗，證實LMPI調(diào)控的STAT3信號通路被干擾后，鼻咽癌細胞的運動能力減弱，結合前面的研究結果提示LMPL可能通過STAT3信號通路的激活促進鼻咽癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。這對于闡明LMPL作為致瘤蛋白在鼻咽癌侵襲與轉(zhuǎn)移中的分子機制提供了新的實驗依據(jù)。結合上述的研究結果，我們認為LMPI可通過JAK3和ERK上調(diào)STAT3的磷酸化水平和STAT的反式激活能力，促使STAT3入核后，反式激活VEGF酌啟動子，促進VEGF的表達和分泌，在鼻咽癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本研究對進一步闡明鼻咽癌發(fā)生發(fā)展規(guī)律，選擇STAT3作為新的治療靶點奠定了有意義的理論基礎。關鍵詞LMPLJAKERKSTAT3VEGF鼻咽癌侵襲與轉(zhuǎn)移Ⅳ

簡介：徐州醫(yī)學院碩士學位論文條件增殖腺病毒介導IL18靶向治療惡性黑色素瘤的實驗研究姓名楊春華申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師劉彥群鄭駿年20080401徐州醫(yī)學院碩士學位論文論文獨創(chuàng)性聲明是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人或機構已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻均已在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。作者簽名論文使用授權聲明本人完全了解徐州醫(yī)學院有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留送交論文的復印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱；學校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名揚盎壘導師簽名少LR月捌’●163

簡介：浙江大學碩士學位論文乙型肝炎病毒在人類卵母細胞和早期胚胎內(nèi)整合的研究姓名胡小玲申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科指導教師朱依敏20070601浙江大學碩士學位論文乙型肝炎病毒在人類卵母細胞和早期胚胎內(nèi)整合的研究浙江大學醫(yī)學院婦產(chǎn)科學2005級碩士研究生胡小玲導師朱依敏主任醫(yī)師摘要背景乙型肝炎是危害人類健康的全球性疾病。全球有20多億人有乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，鵬V的感染史，其中約有35億人為HBV的慢性攜帶者。目前，約有I／3的世界人口生活在IIBV感染率較高的地區(qū)HBY的感染與80％的原發(fā)性肝細胞癌具有相關性，每年約有100多萬人死于因HBV感染引起的嚴重肝臟疾病，哪已將TLBV的感染列為世晃第九大死亡原因。我國是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，乙型肝炎病毒表面抗原HEPATITISBSURFACEANTIGEN，HBSAG攜帶者達10％一15％，每年有50萬一100萬的新增病例。目前，經(jīng)過適當?shù)闹鲃?、被動?lián)合免疫，能夠有效阻斷多數(shù)HBV的感染，但免疫接種后仍然有I0％～20％的嬰兒阻斷失敗，阻斷失敗的原因不明。HBV的傳播途徑有輸血；體液接觸包括血清、唾液、陰道分泌物，乳汁和精液接觸；宮內(nèi)感染；細胞、組織和器官移植；血液透析工具和藥物靜脈注射等。此外，還有一種新的、尚待證實的傳播方式，即垂直傳播。垂直傳播指患者的生殖細胞受病毒感染，在受精時由精子或卵細胞作為載體。將病毒基因帶到胚胎進而使子代患病。按性別劃分，垂直傳播又分為父嬰垂直傳播和母嬰垂直傳播。阻斷失敗是否與垂直傳播相關對于HBV垂直傳播的研究可能有助于這一問題的回答。關于父嬰垂直傳播，國內(nèi)外學者對此進行了相關研究，結果發(fā)現(xiàn)，槽子內(nèi)存在著HBVDNA的整合，并且主要存在于乙型肝炎患者精子頭的膜部和核心部，精子被感染的機制涉及對HBVDNA的主動捕獲，’這些研究表明HBV可能通浙江省自然科學基金資助項目，項目編號Y2061482

簡介：目的進一步探討中藥寧心顆粒對小兒病毒性心肌炎氣陰兩虛證的臨床療效及安全性。方法將60例符合診斷標準的病毒性心肌炎患兒隨機分為兩組治療組和對照組各30例經(jīng)統(tǒng)計學分析兩組患兒在性別、年齡、病程、病情等方面均無顯著性差異。治療組給予寧心顆粒口服對照組給予能量合劑ATP、輔酶A、維生素C、肌苷、病毒唑靜脈滴注療程為一個月。觀察治療前后臨床癥狀體征、血清學指標肌酸激酶CK、肌酸激酶同工酶CKMB、肌鈣蛋白ICTNI、心電圖、24小時動態(tài)心電圖早搏次數(shù)、心功能的變化。結果寧心顆粒能明顯改善病毒性心肌炎患兒的臨床癥狀和體征、減少早搏降低血清學指標CK、CKMB、CTNI改善心功能對病毒性心肌炎有顯著療效。結論寧心顆粒是治療小兒病毒性心肌炎氣陰兩虛證的有效藥物且無明顯不良反應。

簡介：目的構建人巨細胞病毒HCMVIE1核酸疫苗PCDNA31IE1通過免疫BALBC小鼠初步研究其產(chǎn)生的體液免疫和細胞免疫應答水平為進一步研發(fā)HCMVIE1疫苗奠定實驗基礎。方法1將重組載體PEGFPC1IE1用ECⅠ和HINDⅢ雙酶切與載體PCDNA31連接構建重組質(zhì)粒PCDNA31IE1雙酶切鑒定。2將重組質(zhì)粒PCDNA31IE1轉(zhuǎn)染HELA細胞RTPCR及WESTERNBLOT測定IE1在真核細胞的表達。3將PCDNA31IE1、對照空質(zhì)粒PCDNA31及PBS分別通過肌肉注射8W齡BALBC小鼠隔2W免疫1次共免疫4次。4末次免疫小鼠2W后取小鼠肌肉組織通過PCR法檢測IE1基因免疫組化測定IE1基因在小鼠肌細胞中的表達。5末次免疫小鼠2W后無菌制備小鼠脾細胞經(jīng)PHA刺激后ELISA雙抗體夾心法檢測脾淋巴細胞培養(yǎng)上清液中IL4、IL2、IFNΓ含量MTT比色法檢測脾淋巴細胞增殖反應計算刺激指數(shù)SI。用統(tǒng)計軟件SPSS130分析實驗數(shù)據(jù)。結果1構建的真核細胞表達載體PCDNA31IE1經(jīng)雙酶切后小片段約1476BP與IE1大小一致。2PCDNA31IE1轉(zhuǎn)染HELA細胞后RTPCR檢測到約1476BP片段與IE1大小相符WESTERNBLOT檢測到分子量約72KDA的IE1蛋白。3在免疫小鼠肌細胞中利用PCR檢測到約1476BP片段與IE1大小一致即IE1基因在小鼠肌細胞中穩(wěn)定存在免疫組化結果顯示IE1基因在小鼠肌細胞中表達IE1目的蛋白。4核酸疫苗免疫組小鼠脾淋巴細胞經(jīng)PHA刺激后培養(yǎng)上清液中IL4含量為3047±176PGML與空質(zhì)粒組2688±260PGML和PBS組2506±260PGML比較差異有顯著性P5核酸疫苗組小鼠脾淋巴細胞經(jīng)PHA刺激后SI為355±048與空質(zhì)粒組186±023和PBS組148±011比較差異有顯著性P結論1成功構建了真核表達載體PCDNA31IE1且其能在真核細胞內(nèi)表達HCMVIE1蛋白。2PCDNA31IE1核酸疫苗能在BALBC小鼠肌細胞中穩(wěn)定存在并且能在其肌細胞中表達HCMVIE1蛋白。3PCDNA31IE1核酸疫苗可誘導BALBC小鼠脾細胞分泌IL4、IL2、IFNR和刺激BALBC小鼠脾細胞增殖。

簡介：登革病毒DENGUEVIRUS，DV是黃病毒屬的單股正鏈RNA病毒，分為四個血清型DV1～4。DV主要通過埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播，每種血清型都可引起人類登革熱CLASSICALDENGUEFEVER，DF和登革出血熱登革休克綜合征DENGUEHEMRHAGICFEVERDENGUESHOCKSYNDROME，DHFDSS。近年來，隨著旅游業(yè)的發(fā)展和地球溫暖化，DF和DHFDSS流行、暴發(fā)越來越頻繁。DHFDSS患者病死率高，發(fā)病機制不清。較多的臨床研究顯示肝細胞是DV的重要靶細胞之一，肝損害在DHFDSS發(fā)病過程中占有重要地位1肝組織中可以檢測到DV抗原，并能分離到具有感染性的病毒；2DV還可以感染體外培養(yǎng)的HEPG2，HUH7，HA22T，HEP3B，PLC等人類肝癌細胞株，培養(yǎng)上清中也可檢測到成熟的病毒顆粒；3DHFDSS病人常常出現(xiàn)肝腫大，尸檢可見肝組織脂肪變性，枯否氏細胞肥大等。血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高，凝血酶含量下降，其幅度變化與肝損害程度及出血、休克的發(fā)生密切相關。據(jù)文獻報道，DV可以直接感染肝細胞，引起肝臟損傷，換言之，肝臟可能是DV重要的靶器官之一。然而，在過去相當長的時間里，學者們對DV感染后凝血系統(tǒng)、血管內(nèi)皮細胞及炎癥因子變化做了較多的研究，與之相比，肝細胞損傷機制所受關注較少，如能發(fā)現(xiàn)病毒復制對肝細胞哪些方面產(chǎn)生了影響，找到宿主細胞參與病毒復制的關鍵分子，不僅對DV感染機制的闡明有重要意義，同時也為進一步研究抗病毒藥物奠定重要的基礎。本研究主要結果與結論如下1DV2感染對HEPG2細胞內(nèi)外GSH水平的影響感染組加入DV2以MOI10感染HEPG2細胞，模擬感染組則加入56℃滅活30MIN的病毒液，同等條件置于37℃，以感染起始記為O時，在感染10MIN、20MIN、30MIN、40MIN、60MIN1H、2H、6H、12H、24H、48H后5個時相點吸附后1H，更換病毒維持液時，分別用PBS充分洗滌細胞，胰蛋白酶消化，取出細胞。經(jīng)過四次快速凍融，離心取上清用于GSH的測定。取相同數(shù)量的細胞經(jīng)超聲裂解用于測定細胞蛋白濃度。結果發(fā)現(xiàn)，病毒感染后10MIN、20MIN、30MIN、40MIN、60MIN1H，HEPG2細胞內(nèi)GSH水平與模擬感染組比較，呈下降趨勢，其中以30MIN下降最為明顯，為1682±086NMOLMGN5，與模擬感染組2314±141NMOLMGN5和感染組的其他時相點比較均有顯著差異P＜001。病毒感染后2H、6H、12H、24H、48H，HEPG2細胞內(nèi)GSH水平與模擬感染組比較，仍呈下降趨勢，其中以2H，24H時下降較為明顯，分別為2951±316NMOLMGN5和1775±332NMOLMGN5，與相應時相點的模擬感染組3545±355NMOLMGN5和2291±415NMOLMGN5以及感染組的其它時相點比較，差異顯著P＜005，其后逐漸恢復，到48H時已與模擬感染組無顯著差異P＞005。感染后30MIN上清中的GSH含量為4786±300NMOLMLN4，較模擬感染組升高3309％，且有顯著差異P＜005，而模擬感染組與病毒原液則無顯著差異P＞005。以上結果說明DV2感染能夠使HEPG2細胞內(nèi)GSH水平下降，改變宿主細胞的氧化還原狀態(tài)，且呈現(xiàn)階段性變化，推測可能與病毒的復制過程有關。結合感染后同一時相點細胞外GSH水平的升高和文獻報道，推測DV2感染后30MIN細胞內(nèi)GSH水平的快速降低可能是由于DV2感染所致細胞膜通透性增加、GSH的外漏引起的。2DV2E蛋白對宿主細胞內(nèi)外GSH水平的影響首先構建了穩(wěn)定表達E蛋白的HEPG2細胞株PREEHEPG2，并且通過PCR、酶切、核苷酸測序及間接免疫熒光法進行了鑒定和檢測，確認了該細胞中E蛋白的表達。同時構建了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的細胞株PREEHEPG2作為對照。然后測定了PREEHEPG2細胞內(nèi)外GSH的水平。結果PREEHEPG2細胞內(nèi)GSH水平與PREHEPG2細胞對照組比較，呈下降趨勢。PREEHEPG2細胞內(nèi)GSH平均濃度為2561±223NMOLMGN4，PREHEPG2細胞內(nèi)的GSH平均濃度為3338±107NMOLMGN4，與PREHEPG2細胞比較，PREEHEPG2細胞內(nèi)GSH下降了243％P＜001。取對數(shù)生長期PREEHEPG2和PREHEPG2細胞的培養(yǎng)上清05ML測定GSH濃度，發(fā)現(xiàn)PREEHEPG2細胞上清中GSH含量平均值為3672±140NMOLMLN4，PREHEPG2細胞上清中GSH含量平均為5741±200NMOLMLN4，前者相較后者明顯降低，兩者差異顯著P＜005，前者較后者平均下降了3635％。以上結果表明，穩(wěn)定表達E蛋白的PREEHEPG2細胞較穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的PREHEPG2細胞，細胞內(nèi)外GSH濃度均下降顯著，提示E蛋白在宿主細胞中的表達不僅可以改變細胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，還可以使宿主細胞外的GSH水平降低，在DV2感染誘使的細胞氧化還原狀態(tài)變化的過程中，E蛋白可能起重要作用。3BSO及外源性GSH處理對DV2感染的影響依據(jù)MTT實驗結果并參照文獻，選擇BSO的處理濃度為02MM和1MM，外源性GSH的處理濃度為10MM和20MM。在不感染病毒的情況下，培養(yǎng)上清中加入02MM、1MMBSO處理18H，可使細胞內(nèi)GSH含量由空白對照組的2453±259NMOLMGN5分別下降至1429±148NMOLMGN5、1405±193NMOLMGN5P＜005，且兩種濃度下降幅度無顯著差異P＞005，幅度平均為4224％N5。在DV2感染BSO處理組，感染前18H分別用02MM、1MMBSO預處理HEPG2細胞，然后用DV2以MOI1感染HEPG2細胞，并維持BSO濃度至感染24H，空白對照組不加藥物處理。感染后24H收取病毒上清，噬斑試驗測定病毒滴度PFUML。結果發(fā)現(xiàn)02MM與1MMBSO處理組病毒滴度較空白對照組分別上升了11979％N5和12751％N5，與空白對照組比較差別顯著P＜005，但兩種濃度BSO處理組的病毒滴度上升幅度無顯著差異P＞005。在不感染病毒的情況下，培養(yǎng)上清中加入10MM、20MMGSH溶液與空白對照組相比，細胞內(nèi)GSH含量均無顯著差異P＞005；在DV2感染GSH處理組，從感染起始到感染24H維持上清內(nèi)GSH濃度分別為10MM、20MM，空白對照組不加藥物處理。感染后24H收取病毒上清，測定病毒滴度PFUML。結果發(fā)現(xiàn)較空白對照組而言，10MM與20MMGSH處理組病毒滴度分別下降4024％N5和5662％N5，兩種濃度GSH處理組均與空白對照組差異顯著P＜005，且20MMGSH處理組病毒滴度下降更為明顯P＜005；以上結果說明不僅DV2可以引起細胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)改變，細胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)反過來也可以影響DV2的復制和增殖。以上結果為闡明DV的致病機理和進一步設計靶向抗病毒藥物提供了初步的實驗依據(jù)。

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簡介：余龍劉鈞易慶楊鮮梅江松敏指導小組成員教授復旦大學遺傳所教授JOHNSHOPKINSUNIVERSITY教授MDANDERSONCANCERCENTER副教授復旦大學遺傳所副教授復旦大學遺傳所博士學位論文E3泛素連接酶SIAH1調(diào)控乙肝病毒X蛋白穩(wěn)定性的分子機制研究HBVHBXHCCKSHVGREHSECREHSPUBCLBCHXGFPIGGGSTSIRNAPCRIPLOH縮略詞表HEPATITISBVIRUSHEPATITISBVIRALXPROTEINHEPATOCELLULARCARCINOMAKAPOSI’SSARCOMAASSOCIATEDHERPESVIRUSGLUCOCORTICOIDRESPONSEELEMENTHEATSHOCKRESPONSEELEMENTCAMPRESPONSEELEMENTHEATSHOCKPROTEIN●●●●●UBIQUITINATIONCELLLYSISBUFFERCYCLOHEXIMIDE一●GREENTLUORESCENTPROTEINIMMUNOGLOBULINGGLUTATHIONESTRANSFERASESMALLINTERFERINGRNAPOLYMERASECHAINREACTIONIMMUNOPRECIPTATIONLOSSOFHETEROZYGOSITY

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文AD5F35嵌合型增殖腺病毒SG235TRAIL治療胃癌的實驗研究姓名陳琳申請學位級別博士專業(yè)外科學（普外）指導教師方國恩薛緒潮20080401第二軍醫(yī)大學博士學位論文縮寫MOIPBSPCRPFUPITCIDSOTE2英文全稱MULTIPLICITYOFINFECTIONPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONPLAQUEFORMINGUNITPROPIDINEIODIDETISSUECULTUREINFECTIOUSDOSE50。TRIS／EDL～中文全稱感染復數(shù)磷酸鹽緩沖液多聚酶鏈式反應空斑形成單位碘化丙啶50％組織培養(yǎng)感染劑量TE溶液

簡介：上海交通大學碩士學位論文慢病毒載體用于眼部基因轉(zhuǎn)移的實驗研究姓名劉影申請學位級別碩士專業(yè)眼科學指導教師樊瑩20080401隨病毒滴度增加和感染時間延長，表達GFP的RPE細胞數(shù)和熒光強度增加；隨病毒滴度增加，RPE細胞內(nèi)ESMRNA增加。一定劑量范圍內(nèi)病毒對細胞增殖及超微結構無明顯影響。LV通過玻璃體腔注射介導GFP基因轉(zhuǎn)移可見視網(wǎng)膜熒光表達。小鼠ROP模型中視網(wǎng)膜無灌注區(qū)形成，新生血管數(shù)量明顯高于正常組。結論結論慢病毒能有效、特異地介導外源基因感染RPE細胞，且其表達呈劑量依賴性和時間依賴性。慢病毒在一定劑量范圍內(nèi)對RPE細胞增殖無明顯影響。LV玻璃體腔注射可有效介導外源基因轉(zhuǎn)入視網(wǎng)膜。小鼠ROP模型的成功構建為眼部血管生長抑制因子的轉(zhuǎn)移奠定了基礎。關鍵詞關鍵詞慢病毒載體，基因轉(zhuǎn)移，內(nèi)皮抑素，視網(wǎng)膜新生血管

簡介：點擊查看更多慢性乙肝患者血清一氧化氮的表達與α-干擾素抗病毒應答的相關性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：內(nèi)蒙古大學博士學位論文CDK2在皰疹病毒復制中作用的研究姓名關澤紅申請學位級別博士專業(yè)動物學指導教師旭日干20080601內(nèi)蒙古大學博士學位論文CDK2在皰疹病毒復制中作用的研究中文摘要皰疹病毒宿主廣泛，引起人和許多動物多種多樣的感染。除急性感染外，還有潛伏感染和反復發(fā)作的傾向。皰疹病毒復制機理的研究對發(fā)展病毒與宿主細胞相互作用的理論、抗病毒藥物的開發(fā)以減輕皰疹病毒對人類健康的威脅、減少牛業(yè)的巨大經(jīng)濟損失有重要意義。皰疹病毒等大DNA病毒能編碼DNA聚合酶等DNA復制相關蛋白，且能在靜止細胞甚至終末分化的神經(jīng)細胞中復制，因此過去認為這些病毒的復制與細胞周期無關，不需要細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶CDK的活性。1998年發(fā)現(xiàn)，藥理學劑量的CDK抑制劑PCI能抑制單純皰疹病毒HSV的復制。此后，CDK在病毒復制過程中的作用備受關注，而HSV成為研究病毒與宿主細胞相互作用的首選模型。目前對于HSV等病毒復制所需CDK種類還不清楚。根據(jù)文獻資料分析和我們的前期實驗結果，我們的假設是CDK2可能是HSV復制和重新激活的關鍵性啟動因素。本文以表達顯性負突變體CDK2DNCDK2的HT29TETOND11CDK2細胞系、靶向CYCLINA、CYCLINE及CDK2的干擾RNA等多種措施抑制CDK2活性，研究CDK2在HSV復制中的作用。結果發(fā)現(xiàn)，HSV在CDK2活性下降的HT29TETONDNCDK2細胞中的增殖具有感染劑量依賴性；HSV感染宿主細胞6小時后CDK2活性被誘導；HSV增殖動力學分析表明在宿主細胞CDK2活性被誘導后，HSV即進入了快速增殖階段。這一發(fā)現(xiàn)首次直接證明了CDK2活性與HSV復制的關系。用微球菌核酸酶MCN消化進行的嘗試性實驗發(fā)現(xiàn)HSV感染CDK2下降細胞5小時后其基因組DNA仍以結構緊密的染色體形式存在，HSV基因組的存在形式與宿主細胞CDK2活性有關。這一發(fā)現(xiàn)為進一步研究CDK2調(diào)控HSV基因轉(zhuǎn)錄的機制提供了線索。1HSV在HT29TETONDNCDK2細胞中的增殖特性HT29TETONDNCDK2細胞整合了受TETON啟動子調(diào)控的DNCDK2基因，在強力霉素DOX誘導下大量表達血CDK2蛋白而抑制細胞CDK2的活性。將HT29TETONDNCDK2細胞在有和無DOX條件下培養(yǎng)48小時，然后用不同劑

簡介：東南大學碩士學位論文遺忘型輕度認知損害臨床診斷、神經(jīng)心理學特征和BDNF血清水平及其基因多態(tài)性研究姓名宇輝申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師張志珺20080410英文摘耍STUDYOFCLINICALDIAGNOSIS，NEUROPSYCHOLOGICALCHARACTERISTICS，POLYMORPHISMOFBDNFGENEANDSERUMBDNFLEVELSINAMNESTICMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTCLINICALMEDICALCOLLEGEOFSOUTHEASTUNIVERSITYPOSTGRADUATEYUHUISUPERVISORZHANGZHIJUNABSTRAETOBJECTIVEAMNESTICMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTAMCIHASAHI曲PROBABILITYOFEVOLVINGTOWARDSALZHEIMER’SDISEASEAD．THEPRESENTSTUDYEXPLOREDCLINICALAPPLICABILITYOFDIAGNOSTICCRITERIAANDNEUROPSYCHOLOGICALCHARACTERISTICSINALVLCLTOIDENTIFYPRECLINICALADEFFECTIVELY；EXPERIMENTALANDCLINICALDATASUGGESTEDTHATBRAINDERIVEDNEUROTROPHICFACTORBDNFPLAYSANIMPORTANTROLEONTHEPATHOGENESISOFAD，THESTUDYINVESTIGATEDTHESERUMBDNFLEVELSINAMCIPATIENTSANDANALYZEPOSSIBLEASSOCIATIONOFTHEBDNFGENEPOLYMORPHISMSWITHGENETICRISKFORAMCI，COGNITIVEFUNCTIONANDSERUMBDNFLEVELS．METHODSTHISSTUDYAPPLIESDIAGNOSTICCRITERIAOFAMCIPROPOSEDBYPETERSENANDOPTIMIZEDMULTIPLEDIMENSIONNEUROPSYCHOTOGICALTESTSTOSCREEO115AMCIPATIENTSFROMCOMMUNITYBASEDSAMPLESOF1480SUBJECTSAGED65YEARSBASEDONDIAGNOSTICPROCEDUREOFTHREESTAGES，WHICHCONSISTSOFSCREENINGOFSUBJECTIVEMEMORYCOMPLAINTS，DIAGNOSISOFAMCI，ASSESSMENTOFNEUROCOGNITIVEFUNCTIONANDCLINICALTYPINGOFAMCI，126MATCHEDNORMALCONTROLSWERERECRUITED．THEPRESENTSTUDYMEASURESSERUMBDNFLEVELSANDGENOTYPESOFTWOSINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMSSNPSRS6265ANDRS2049046OFBDNFGENEIN99AMCIPATIENTSAND99CONTROLS，SHESISSOFTWAREISEMPLOYEDTOPERFORMLINKAGEDISEQUILIBRIUMANDHAPLOTYPEANALYSES．RESULIS1OF1480SUBJECTS，115SUBJECTS7．77％METCRITERIAFORAMCI．44AMCIPATIENTS38．26％METTHECRITERIAFORSINGLEDOMAINAMNESIAMCI，71AMCIPATIENTS61．74呦FORMULTIPLEDOMAINAMCITHENEUROPSYCHOLOGICALBATTERYSCORESINAMCIPATIENTSWERESIGNIFICANTLYLOWERTHANTHOSEINNORMALCONTROLSALLP0．001，WITHTHELARGESTIMPAIRMENTOOTHEAUDITORYVERBALMEMOTYTESTDELAYEDRECALL3．OSDOFNORMALMEANWHICHREFLECTSEPISODICMEMORY．；2HAPLOTYPEANALYSISOFRS6265RS2049046INBDNFGENEREVEALEDTHATTWOHAPLOTYPESAREPROTECTIVEAGAINSTAMCI，THEFREQUENCYOFGAHAPLOTYPEANDATHAPLOTYPEINNORMALCONTROLSWERESIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHOSEII