簡介：慢性乙型肝炎是一種由乙型肝炎病毒引起的慢性、進(jìn)展性、致死性疾病。我國是HBV病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)。一直以來核苷類似物拉米夫定作為首選藥物用于臨床治療乙型肝炎但是隨著用藥時間的延長拉米夫定顯示出嚴(yán)重的耐藥性和肝毒性。近年來開環(huán)核苷膦類似物的92膦酰甲氧乙基嘌呤類化合物PME類衍生物由于具有較好的抗病毒活性耐藥率低且高效低毒因此得到了廣泛的重視。阿德福韋酯作為開環(huán)的核苷膦類似物之一在整個臨床前和臨床研究中其強(qiáng)效和安全性已經(jīng)得到廣泛的認(rèn)可于2002年上市用于治療HBV其化學(xué)結(jié)構(gòu)包含有腺嘌呤為堿基、直鏈醚鍵的側(cè)鏈、磷酸及雙吡呋酯等典型特征。臨床研究數(shù)據(jù)表明阿德福韋具有較強(qiáng)的抑制HBVDNA復(fù)制的作用抗耐藥性強(qiáng)顯著優(yōu)點是對拉米夫定應(yīng)用后出現(xiàn)的YMDD變異株包括YVDD和YIDD變異病毒有很強(qiáng)的抑制作用強(qiáng)度不低于對野生株的作用。長期應(yīng)用阿德福韋治療慢性HBV能顯著降低CCCDNA水平為循序漸進(jìn)的清除感染細(xì)胞里的HBV病毒庫并清除受感染細(xì)胞帶來希望。因此阿德福韋既可用于對拉米夫定耐藥的患者也可以用于對拉米夫定不敏感的患者且阿德福韋治療劑量10MGD相關(guān)的毒副作用很低。不過隨著近幾年研究的深入發(fā)現(xiàn)阿德福韋在高劑量下有一定的腎毒性也有文獻(xiàn)報道阿德福韋酯在體內(nèi)被酶水解釋放出阿德福韋特戊酸和甲醛當(dāng)服用高劑量阿德福韋酯時特戊酸可能會降低血清中的肉毒堿而治療劑量范圍內(nèi)產(chǎn)生的甲醛其毒性可以不需考慮。本文通過分析總結(jié)開環(huán)核苷膦類似物的構(gòu)效關(guān)系以阿德福韋為先導(dǎo)化合物采用生物電子等排設(shè)計理論設(shè)計N6位替換成巰基取代物或氮取代物同時8位引入氮雜的6取代巰基8氮雜嘌呤堿基骨架采取保留磷酸基和引入雙三氟乙基酯及乙酯三種形式。設(shè)計了三條反應(yīng)路線共合成了19個未見文獻(xiàn)報道新化合物。首先以三氯化磷為起始原料試圖經(jīng)過酯化、羥甲基化、磺酸酯化、烴化四步反應(yīng)得到目標(biāo)化合物。本路線在研究的初期并未取得成功經(jīng)紅外圖譜確證發(fā)現(xiàn)第二步反應(yīng)沒生成目標(biāo)中間體。因此在此基礎(chǔ)上設(shè)計了路線二分別以5氨基46二氯嘧啶及三氯化磷為起始原料經(jīng)過烴化反應(yīng)環(huán)合反應(yīng)、羥甲基化、鹵代、酯化等合成得到目標(biāo)化合物。在最初嘗試引入雙三氟乙基酯的合成方法時意外得到了新的磷酸酯交換結(jié)構(gòu)此結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁氫譜、質(zhì)譜及紅外光譜確證為未見報道新的磷酸結(jié)構(gòu)形式目前已合成2個該類結(jié)構(gòu)分子。經(jīng)抗乙肝病毒活性測試結(jié)果表明其中26氨基9H嘌呤9基乙基222三氟乙基氯甲基磷酸酯39表現(xiàn)出了抗病毒活性在10ΜGML時對乙肝病毒表面抗原具有121％抑制率HBSAG抑制率其抗病毒活性與拉米夫定相當(dāng)拉米夫定為142％而且顯示了拉米夫定不具有的可抑制病毒復(fù)制的活性對乙肝病毒E抗原HBEAG具有118％的抑制率而拉米夫定為0％；毒性比阿德福韋酯大大降低在50ΜGML時阿德福韋酯表現(xiàn)出了細(xì)胞毒性而新化合物39在100ΜGML還未出現(xiàn)細(xì)胞毒性。這個新的化學(xué)結(jié)構(gòu)具有較高的繼續(xù)研究的價值將在進(jìn)一步的開發(fā)后有可能獲得具有自主知識產(chǎn)權(quán)的藥物分子。根據(jù)我們的設(shè)計思想6取代巰基8氮雜腺嘌呤是主要的骨架因此設(shè)計第三條路線分別以5氨基46二氯嘧啶及亞磷酸二乙酯為起始原料經(jīng)過烴化反應(yīng)重氮化環(huán)合反應(yīng)羥甲基化磺酸酯化、烴化、酯水解等反應(yīng)共合成得到了16個該類新化合物。目前此類化合物正在生物活性測試中。

簡介：第一部分、PLEGFPN1TPA逆轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建、鑒定及包裝細(xì)胞PT67PLEGFPN1TPA純系培育。目的構(gòu)建含人組織型纖溶酶原激活劑TISSUETYPEPLASMINOGENACTIVAT，TPA）基因增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（ENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP）基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體及產(chǎn)高滴度病毒的純包裝細(xì)胞系。方法用PCR方法擴(kuò)增目的基因TPA，定向克隆入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（PLEGFPN1）中，酶切反應(yīng)、PCR及DNA測序鑒定重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLEGFPN1TPA；在基因轉(zhuǎn)染試劑SOFASTTM介導(dǎo)下將PLEGFPN1TPA轉(zhuǎn)入包裝細(xì)胞PT67，經(jīng)相應(yīng)的抗生素篩選、標(biāo)記、顯微移出，培育出全EGFP純包裝細(xì)胞系。用NIH3T3細(xì)胞測定病毒滴度。結(jié)果經(jīng)限制性酶切分析、DNA序列分析、EGFP的表達(dá)證實PLEGFPN1TPA中含有TPA基因。轉(zhuǎn)染有PLEGFPN1TPA的純PT67細(xì)胞產(chǎn)病毒滴度為1107CFUML。結(jié)論成功構(gòu)建了PLEGFPN1TPA載體和產(chǎn)高滴度病毒純包裝細(xì)胞系，為TPA局部靶向治療的理想人工心瓣的研究和應(yīng)用奠定了實驗基礎(chǔ)。第二部分、PLEGFPN1TPA感染ECUV304和心肌細(xì)胞，ECUV304PLEGFPN1TPA建純系。目的觀察PLEGFPN1TPA感染ECUV304和心肌細(xì)胞后，ECUV304PLEGFPN1TPA純系上清和感染后心肌細(xì)胞上清在體外血栓模型中溶栓情況及TPA表達(dá)情況。方法PLEGFPN1TPA感染ECUV304細(xì)胞，單個強(qiáng)表達(dá)EGFP的ECUV304細(xì)胞→成簇→顯微移出→培育→成純系。建體外血漿平板血栓模型（用人全血），純系ECUV304PLEGFPN1TPA培養(yǎng)上清加入模型中，設(shè)對照組，觀察溶解血栓情況，同時椐蚓激酶活性算出TPA活性。ELISA測出TPA含量。WESTERNBLOT檢測TPA。原代14D乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)，感染PLEGFPN1TPA，培養(yǎng)上清加入血漿平板血栓模型，設(shè)對照組，觀察溶解血栓情況，算出TPA活性，測出TPA含量。WESTERNBLOT檢測TPA。結(jié)果轉(zhuǎn)導(dǎo)有PLEGFPN1TPA的內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞上清在體外血栓模型中有大的溶解圈。ECUV304PLEGFPN1TPA純系上清TPA活性是50216U106CELLS24H，TPA含量是71627NG106CELLS24H，WESTERNBLOT檢出外源TPA條帶。心肌細(xì)胞PLEGFPN1TPA上清TPA活性是46427U106CELLS24H，TPA含量是60734NG106CELLS24H，WESTERNBLOT亦檢出外源TPA條帶。結(jié)論成功建立ECUV304PLEGFPN1TPA純系，純系上清有明顯溶栓作用，TPA活性及含量均高，有外源TPA條帶。心肌細(xì)胞PLEGFPN1TPA上清有明顯溶栓作用，TPA活性及含量均高，有外源TPA條帶。第三部分、在體研究特氟隆DACRON片移植入兔下腔靜脈，DACRON片周圍局部轉(zhuǎn)導(dǎo)PLEGFPN1TPA。目的探討組織型纖溶酶原激活劑（TPA）基因局部轉(zhuǎn)導(dǎo)對特氟?。―ACRON）片（與機(jī)械瓣瓣環(huán)同質(zhì)）的溶血栓作用。方法70只兔建立下腔靜脈內(nèi)DACRON片植入血栓模型，隨機(jī)分為PLEGFPN1TPA治療組（N30）、PLEGFPN1空載體對照組（N20）、空白對照組（N20），局部基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，于術(shù)后2D、75D各組一半動物取材（6個亞組A1、B1、C1、A2、B2、C2），聚光共聚焦（CONFOCAL）觀察所取靜脈增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）表達(dá)，體視鏡和電鏡觀察DACRON片表面血栓情況，免疫印跡（WESTERNBLOT）、血漿平板和酶聯(lián)免疫吸附實驗（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA）分別檢測所取靜脈TPA表達(dá)、溶栓、活性及含量變化。結(jié)果術(shù)后2D和75D取材，治療組所取靜脈，CONFOCAL均觀察到多而強(qiáng)的EGFP表達(dá)，PLEGFPN1對照組也有EGFP表達(dá)，但空白對照組無EGFP表達(dá)。70個DACRON片加未植入組10個DACRON片共80個，在體視鏡（160倍）和電鏡（500倍）下觀察，未植入組和治療組DACRON片表面均無血栓，對照組表面均有血栓。治療組所取靜脈WESTERNBLOT檢測均有外源TPA表達(dá)，對照組未檢測到。血漿平板顯示治療組均有大的溶解圈，有明顯溶栓作用，對照組沒有；根據(jù)蚓激酶計算出的纖溶活性顯示治療組術(shù)后2D和75D所取靜脈TPA活性分別為52962±905UG、53750±1245UG，兩時間點比較，差異顯著性（P＞005）。術(shù)后2D和75D治療組、兩對照組中6個亞組所取靜脈TPA含量分別為（A173764±1319）、（B12988±561）、（C12871±549）、A274287±1056、（B23203±626）、（C23134±563）NGG，治療組明顯高于對照組（P＜001）；治療組中兩時間點比較，TPA含量無顯著差異（P＞005）。結(jié)論PLEGFPN1TPA局部基因轉(zhuǎn)導(dǎo)能有效阻止外源移植物表面血栓形成，為研究和應(yīng)用TPA基因瓣膜奠定了基礎(chǔ)。

簡介：基因序列多態(tài)性對易感基因的功能作用及其對病毒抵抗RNAI的影響隨著人類基因組計劃的進(jìn)展基因序列多態(tài)性在復(fù)雜性狀疾病的發(fā)病機(jī)制、藥物敏感性的個體差異、病毒的生存與耐受等方面具有廣闊前景。本課題通過研究人基因5UTR啟動子區(qū)SNP多態(tài)性位點對基因轉(zhuǎn)錄影響、3UTR區(qū)插入缺失多態(tài)性位點對基因表達(dá)的影響以及RNA病毒基因組序列的變異對RNAI抑制轉(zhuǎn)錄作用的影響這三個角度驗證了基因序列多態(tài)性對不同層面基因表達(dá)調(diào)控的功能作用從而為復(fù)雜性狀疾病的發(fā)病機(jī)制以及病毒對基因治療產(chǎn)生耐受機(jī)制做出有益的探索。第一部分位于人基因5UTR區(qū)SNP對TNFΑ基因表達(dá)的影響研究目的腫瘤壞死因子ALPHATNFΑ作為促炎細(xì)胞因子參與自身免疫性疾病和感染性疾病的致病過程最近的研究發(fā)現(xiàn)TNFΑ基因上游啟動予區(qū)857T等位基因與自發(fā)性急性前葡萄膜炎、成人重癥腹膜炎、子宮內(nèi)膜異位癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種疾病相關(guān)。而且本教研室前期對漢族人群強(qiáng)直性脊柱炎與TNFΑ單核苷酸多態(tài)性及單倍型的關(guān)聯(lián)分析表明在TNFΑ啟動子區(qū)857C→T是TNFΑ獨立于HLAB27而與強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)的最有可能的SNP位點。以上的多種報道很可能是由于TNFΑ的857SNP參與了TNFΑ的表達(dá)過程從而使其與多種疾病相關(guān)。本課題旨在檢測次等位基因857T與主等位基因857C相比是否對人TNFΑ表達(dá)產(chǎn)生影響。研究方法在RAW2647與HELA細(xì)胞中運用報告基因方法檢測其對轉(zhuǎn)錄的影響；運用實時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法和酶聯(lián)免疫吸附法分別從MRNA和蛋白水平對健康對照個體基因型為857CC與強(qiáng)直性脊柱炎病人基因型為857CT外周血單個核細(xì)胞中TNFΑ表達(dá)水平進(jìn)行了比較。結(jié)果報告基因檢測結(jié)果表明與主等位基因857C比較次等位基因857T對TNFΑ啟動子具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄激活作用在基因型為857CC的健康人以及857CT的強(qiáng)直性脊柱炎病人PBMCS之間TNFΑ在MRNA和蛋白水平未發(fā)現(xiàn)明顯差異。結(jié)論研究表明TNFΑ啟動子857T次等位基因可能直接對TNFΑ具有調(diào)控作用且可能以組織特異性方式進(jìn)行；在解釋TNFΑ與AS相關(guān)時除TNFΑ啟動子857SNP之外也可能存在其它確切影響TNFΑ表達(dá)的因素。第二部分位于人基因3UTR區(qū)INSDEL插入缺失多態(tài)性對IGF2R基因表達(dá)的影響研究目的MICRNASMIRNAS主要通過轉(zhuǎn)錄后翻譯水平的抑制作用調(diào)控人內(nèi)源性基因的表達(dá)并參與重要的生理、病理過程最新研究表明位于靶基因3非翻譯區(qū)3UTR的DNA序列多態(tài)性DSPS可能參與這些過程。VILLUENDASETAL等研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病與胰島素樣生長因子2受體IGF2R基因3UTR的ACAA插入缺失多態(tài)性有關(guān)但機(jī)制未明。本課題旨在檢測ACAA插入缺失多態(tài)性是否存在MIRNA介導(dǎo)的多態(tài)性調(diào)控模式。研究方法本研究中使用網(wǎng)絡(luò)預(yù)測工具M(jìn)ICROINSPECT和MIRA預(yù)測能與IGF2R基因的DNA序列多態(tài)性ACAA插入缺失位點結(jié)合的MIRNAS分子；熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測候選MIRNAS對IGF2R的3UTR作用以及ACAA插入缺失變異對此作用的影響用RTQPCR及ELISA方法分別檢測HEPG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染候選MIRNAS后IGF2R的MRNA與蛋白質(zhì)水平變化。結(jié)果生物信息學(xué)預(yù)測表明IGF2R基因的ACAA插入缺失位點位于HSAMIR657和HSAMIR453的結(jié)合位點內(nèi)；報告基因?qū)嶒灡砻鱄SAMIR657通過多態(tài)性模式調(diào)控IGF2R基因的表達(dá)即與ACAA插入相比ACAA缺失對轉(zhuǎn)錄活性產(chǎn)生了更高的抑制作用；MRNA與蛋白質(zhì)水平定量分析表明HSAMIR657對IGF2R的MRNA水平無影響而減少可溶性IGF2R水平。結(jié)論本實驗證實ACAA插入缺失多態(tài)性至少可能通過HSAMIR657介導(dǎo)調(diào)控方式引起IGF2R表達(dá)水平的變化。這可能在機(jī)制上部分的解釋了2型糖尿病的發(fā)病并提示MIRNAS或與功能性DNA序列多態(tài)性協(xié)同在2型糖尿病的防治中具有一定的應(yīng)用價值。第三部分位于FMBV的VP1基因區(qū)的序列變異位點對SIRNAS抑制病毒復(fù)制作用的影響研究目的自從在植物與脈孢菌中發(fā)現(xiàn)了雙鏈RNA誘導(dǎo)的基因沉默以及在蠕蟲秀麗隱桿線蟲中對RNA干擾現(xiàn)象的機(jī)制做出決定性的闡釋以來RNA干擾不僅是研究內(nèi)源性基因功能的重要工具而且已被作為實驗室強(qiáng)大的抗病毒工具并對病毒感染提供了一種新的治療手段。本課題旨在篩選能有效抑制口蹄疫病毒的SIRNAS分子并檢測FMDV病毒基因組序列的變異對RNAI效果的影響。研究方法本課題運用體外重組報告基因?qū)嶒灪土魇郊?xì)胞術(shù)以及對攻毒BHK21細(xì)胞進(jìn)行FMDV含量、上清病毒滴度、細(xì)胞病理效應(yīng)等檢測手段篩選對FMDV的VP1基因起明顯抑制作用的SIRNAS分子；同時用定點突變重組報告基因方法檢測FMDV基因序列變異對SIRNAS抑制作用的影響。結(jié)果篩選到3個能短暫抑制FMDV的有效SIRNAS分子；對FMDV基因組序列分析發(fā)現(xiàn)口蹄疫病毒的VP1基因序列中第410位點變異且經(jīng)報告基因?qū)嶒炞C實其可減弱SIRNA對VP1基因的抑制作用。結(jié)論FMDV基因組內(nèi)SIRNA結(jié)合區(qū)的變異可導(dǎo)致SIRNA抑制效果的減弱；提示對抗病毒的復(fù)制應(yīng)使用新一代識別突變位點的SIRNAS分子?？傊ㄟ^本課題的研究分別驗證了三種不同形式的基因序列多態(tài)性對基因表達(dá)的功能影響并揭示出其在致病過程及病毒耐受中的機(jī)制模型TNFΑ基因啟動子區(qū)順式作用元件內(nèi)的857的單核苷酸多態(tài)性改變了基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性而可能參與易感基因TNFΑ對強(qiáng)直性脊柱炎的致病作用；IGF2R的3UTR的插入缺失多態(tài)性改變了MIRNA對IGF2R基因翻譯水平的抑制作用機(jī)制而可能參與2型糖尿病的發(fā)?。豢谔阋卟《镜腣P1基因序列中第410位點變異可能減弱SIRNA抑制病毒復(fù)制的效力提示新一代識別突變位點的SIRNAS應(yīng)用于對抗病毒的復(fù)制。

簡介：目的通過腺病毒介導(dǎo)的Β2腎上腺素受體Β2AR基因轉(zhuǎn)染紫紺型心臟病動物模型CCM兔心肌細(xì)胞，探討Β2AR基因轉(zhuǎn)染對慢性缺氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。方法1重組ADΒ2AR腺病毒擴(kuò)增采用50％組織培養(yǎng)感染劑量法TCID50測定病毒滴度，熒光顯微鏡檢測病毒轉(zhuǎn)染率，WESTERNBLOT檢測HEK293細(xì)胞中Β2AR蛋白表達(dá)。2建立紫紺型心臟病動物模型采用外科手術(shù)的方法，將成年新西蘭大白兔的主肺動脈與左心耳吻合，建立右向左分流紫紺型心臟病動物模型。3分離培養(yǎng)心肌細(xì)胞及Β2AR基因轉(zhuǎn)染應(yīng)用LANGENDFF逆向灌注膠原酶消化，分離成年兔心肌細(xì)胞，進(jìn)行體外原代培養(yǎng)。心肌細(xì)胞分為5組①正常組CONTROL分離正常成年兔心肌細(xì)胞，培養(yǎng)48H。②假手術(shù)組SHAM分離假手術(shù)組兔心肌細(xì)胞，培養(yǎng)48H。⑧紫紺型心臟病模型組CCM分離紫紺型動物模型兔心肌細(xì)胞，培養(yǎng)48H。④轉(zhuǎn)GFP組ADGFP分離紫紺型動物模型，轉(zhuǎn)染GFP基因的心肌細(xì)胞，培養(yǎng)48H。⑤轉(zhuǎn)Β2AR組ADΒ2AR分離紫紺型動物模型，轉(zhuǎn)染Β2AR基因心肌細(xì)胞，培養(yǎng)48H。4ADΒ2AR轉(zhuǎn)染細(xì)胞保護(hù)作用檢測WESTERNBLOT檢測實驗各組心肌細(xì)胞中Β2AR蛋白表達(dá)；檢測CASPASE3蛋白、PAKT和PERK的蛋白表達(dá)。結(jié)果1擴(kuò)增后ADGFP滴度為3161010PFUML，ADΒ2AR滴度為398X1010PFUML。WESTERNBLOT測定顯示，HEK293細(xì)胞感染ADΒ2AR后，Β2AR蛋白表達(dá)為對照組的56倍。2建模5周后，動脈血氣分析測定顯示，紫紺型兔動物模型PO2453±37及SAO2757±65均較正常兔顯著降低P005。結(jié)論1本研究中動物模型心肌細(xì)胞處于長期低氧狀態(tài)，其病理狀態(tài)與臨床紫紺型心臟病相接近，是研究紫紺型先天性心臟病較為理想的動物模型。2兔紫紺型心臟病動物模型慢性缺氧心肌細(xì)胞，Β2AR蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞凋亡通路激活，凋亡增加，細(xì)胞存活率明顯下降。3慢性缺氧心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染Β2AR基因，可提高心肌細(xì)胞存活率，減少細(xì)胞凋亡，發(fā)揮良好的細(xì)胞保護(hù)作用。

簡介：目的和意義本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，從理論淵源，臨床試驗、實驗研究三個方面探討青銀注射液治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱證的理論依據(jù)、臨床療效、安全性，從而進(jìn)一步探尋中醫(yī)藥治療該疾病的新法、新藥，更好地發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢，為人類健康服務(wù)。理論探討部分首先論述了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對急性上呼吸道感染的認(rèn)識；分析并指出急性上呼吸道感染外感風(fēng)熱證當(dāng)屬現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)“外感熱病”范疇，提出了“風(fēng)熱毒邪”是其主要致病因素，溫邪外襲、毒隨邪入、熱由毒生、肺衛(wèi)失和是本病的主要病機(jī)，論述了“疏風(fēng)透邪、清熱解毒”是治療本病的主要治法；介紹了清開靈注射液是符合該治法的公認(rèn)有效的、安全的藥物，闡述了青銀注射液的組方特點、單藥性味、現(xiàn)代研究和臨床運用，認(rèn)為青銀注射液組方具有“寓疏于清、寓透于清”的特點。臨床研究部分目的意義通過觀察治療前后癥狀體征的變化情況，評價具有疏表透邪、清熱解毒作用的青銀注射液通過靜滴給藥治療上呼吸道感染風(fēng)熱證的臨床療效。通過觀察三大常規(guī)、心電圖、肝、腎功能及出現(xiàn)的不良事件，對其安全性做出評價。研究方法以清開靈注射液作為陽性對照藥，采用隨機(jī)、多中心，雙盲、陽性藥平行組對照設(shè)計。按II期臨床試驗11對照原則，考慮不超過20％的退出率，總的例數(shù)確定為120對共240例，分為試驗組和對照組；試驗組青銀注射液30ML加入5％GS250ML中靜滴，再予5％GNS250ML靜滴，15～2H輸注完成，一日1次，對照組清開靈注射液30ML加入5％GS250ML中靜滴，再予5％GNS250ML靜滴，15～2H輸注完成，一日1次。連續(xù)兩天的給藥間隔時間至少12小時。連續(xù)用藥3天為一個療程觀察兩組療效指標(biāo)、安全性指標(biāo)，定性指標(biāo)以頻數(shù)表，百分率或構(gòu)成比描述；定量指標(biāo)以均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差，或中位數(shù)描述，兩組對比分析，定性資料采用卡方檢驗，F(xiàn)ISHER精確概率法，WILCOXON秩和檢驗，CMHX2檢驗。定量資料符合正態(tài)分布用T檢驗，不符合正態(tài)分布用WILCOXON秩和檢驗假設(shè)檢驗統(tǒng)一使用雙側(cè)檢驗，給出檢驗統(tǒng)計量及其對應(yīng)的P值。以P研究結(jié)果對急性上呼吸道感染外感風(fēng)熱證治療符合方案集對照組的總有效率、痊愈率、分別為8224％、4299％，試驗組的總有效率、痊愈率分別為8649％、4865％，兩組間痊愈率、總有效率組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P005，兩組綜合療效差別無統(tǒng)計學(xué)意義P03197。兩組總有效率的95％CI627，1476，對照組與試驗組的非劣性檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為656；試驗組與對照組的非劣性檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為193全分析集兩組綜合療效組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P01641，對照組總有效率、痊愈率分別為7982％、4123％，試驗組總有效率、痊愈率分別為8729％、4746％，兩組間痊愈率、總有效率組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P005兩組總有效率的95％CI299，1792。對照組與試驗組的非劣性檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為965；試驗組與對照組的非劣性檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為528符合方案集為排除中心差異，以中心分層兩組綜合療效總有效率的差別無統(tǒng)計學(xué)意義，中心間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。兩組首診輸液前后體溫、體溫變化的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P005，值得關(guān)注的是具有即刻退熱療效試驗組為3153％雖高于對照組2804％，但組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P05729，首診輸液結(jié)束時發(fā)熱消失率試驗組為27％、對照組為374％，兩組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義兩組首診當(dāng)天各記錄時點體溫的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。體溫恢復(fù)正常時間試驗組為2676±1686小時、對照組為2738±1734小時，組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P07489兩組終點記分與基線比較的差別均有高度統(tǒng)計學(xué)意義。治療后第2天、第3天各記錄時點體溫及發(fā)熱消失率的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。發(fā)熱基線記分的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組之間具有可比性。治療第2天、第3天、第4天就診記分及記分下降值的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。兩組終點記分與基線比較的差別均有高度統(tǒng)計學(xué)意義?？梢妰山M都不具備較好的即刻退熱作用在改善四肢酸痛癥狀以及第四天頭痛、咽痛和四肢酸痛消失率方面試驗組優(yōu)于對照組P005；試驗組對血紅蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿常規(guī)轉(zhuǎn)異常率高于對照組，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理無顯著性差異P005；兩組血清肌酐療后轉(zhuǎn)異常率為0，PT、APTT兩組治療后無一例異常。兩組無一例嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。治療組所有患者療后心電圖報告轉(zhuǎn)異常率為0從本研究可見青銀注射液安全性良好。實驗研究部分對感染了流感病毒FM1株的小鼠進(jìn)行青銀注射液體內(nèi)藥效試驗。實驗結(jié)果顯示3045GKGD的青銀注射液對小鼠流感病毒性肺炎有治療作用，其抑制率達(dá)41484703％，其結(jié)果與病毒對照組或溶劑對照組相比，有高度顯著性差異P結(jié)論1“疏風(fēng)透邪，清熱解毒”法是治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱癥的主要治法。2青銀注射液具有疏風(fēng)透邪，清熱解毒的作用。3每日單次30M1劑量靜脈滴注青銀注射液治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱證是安全有效的。與青開靈注射液相比綜合療效、總有效率、痊愈率無統(tǒng)計學(xué)意義P005，青銀注射液在改善咽痛、四肢酸痛、頭痛方面優(yōu)于清開靈注射液組P43045GKGD的青銀注射液對小鼠流感病毒性肺炎有治療作用，對流感病毒有抑制作用。5青銀注射液具有抗病毒、抗菌、退熱、抗炎、抗內(nèi)毒素及調(diào)節(jié)免疫的作用。

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文ODC和ADOMETDC雙義腺病毒對肺癌增殖和侵襲抑制作用的研究姓名孫東峰申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)（胸外）指導(dǎo)教師田輝20080501山東人學(xué)碩L學(xué)位論文TNFDNAFAD腫瘤壞死因子脫氧核糖核酸黃素腺嘌呤二核苷酸6

簡介：人巨細(xì)胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV屬于皰疹病毒家族，在人群中感染普遍。HCMV感染在免疫功能正常的人群中通常表現(xiàn)為無癥狀感染，但胎兒的宮內(nèi)感染則可導(dǎo)致嚴(yán)重的先天畸形諸如耳聾、腦癱、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎等。免疫功能低下者如艾滋病患者、器官移植患者若感染HCMV，也可引起多器官功能損害。兒童HCMV活動性感染以嬰兒期多見，常表現(xiàn)為黃疸、肝炎、肺炎、腦炎、血小板減少性紫癜等單個或多個器官功能損害。機(jī)體受到病毒感染后是否發(fā)病及發(fā)病的嚴(yán)重程度與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，甘露糖結(jié)合凝集素MANNANBINDINGLECTIN，MBL在防御抵抗各種病原體的天然免疫中起重要作用，是宿主非特異性免疫中最重要的第一線抗感染免疫分子。對于免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟的嬰幼兒，MBL的抗感染功能顯得尤為重要。MBL是由肝臟分泌的鈣離子依賴型C型凝集素，具有兩大生物學(xué)功能。首先，MBL通過糖識別結(jié)構(gòu)域CARBOHYDRATERECOGNITIONDOMAINCRD識別并結(jié)合多種病原體表面的甘露聚糖、N乙酰葡萄糖胺等糖類配體，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，中和病原體，抑制感染，這條補(bǔ)體激活途徑不同于經(jīng)典激活途徑和旁路途徑，稱為凝集素途徑。其次，MBL可直接作為調(diào)理素，與吞噬細(xì)胞表面的膠原凝集素受體結(jié)合，產(chǎn)生細(xì)胞溶解和調(diào)理吞噬作用。MBL在血清中的表達(dá)水平與MBL的基因多態(tài)性密切相關(guān)。MBL基因在外顯子1區(qū)223、230、239三個位點的突變分別稱為D、B、C變異，A為野生型。這些突變阻礙了MBL肽鏈寡聚體的形成，降低了MBL與配體的結(jié)合力，且更易于被降解，使血清MBL水平低下。另外，啟動子區(qū)550H／L、221X／Y和5端非轉(zhuǎn)錄區(qū)4位點的單核苷酸多態(tài)性也影響了血清MBL，水平。由于連鎖不平衡，這三個位點的變異形成4種單體基因型HYP、LYQ、LYP、LXP，HYP與高水平MBL相關(guān)，而LXP則表達(dá)的MBL水平最低。研究發(fā)現(xiàn)，MBL基因變異導(dǎo)致血清MBL，水平低下與多種感染性疾病相關(guān)。已發(fā)現(xiàn)能與MBL結(jié)合的病毒有流感病毒、人類免疫缺陷病毒、單純皰疹病毒Ⅱ型以及H5N1型冠狀病毒。但MBL與HCMV感染的關(guān)系在國內(nèi)外罕見報道，而MBL與兒童HCMV感染的相關(guān)性則未見報道。本研究通過對HCMV感染兒童MBL基因檢測和分型，以及MBL蛋白水平檢測，探討MBL和兒童HCMV感染的相關(guān)性。方法對104例巨細(xì)胞病毒感染兒童及105例健康兒童進(jìn)行MBL基因檢測和分型，并對其中50例患兒進(jìn)行隨訪，分別測定其急性期和恢復(fù)期血漿MBL蛋白水平，并和健康兒童MBL蛋白水平比較。結(jié)果巨細(xì)胞病毒感染組結(jié)構(gòu)基因B型變異的頻率與健康組無明顯差異183％VS152％，P041，但啟動子區(qū)550位點的L型變異頻率明顯增高H／L雜合子，568％VS343％，P0001，251，野生基因純和子HYPA／HYPA的頻率明顯低于健康組476％VS629％，P0002，0537，而雜合子HYPA／LYPB頻率增高240％VS1430％，P007，190。另外，MBL蛋白濃度測定結(jié)果顯示巨細(xì)胞病毒感染組急性期和恢復(fù)期蛋白濃度均低于健康組。按相應(yīng)的MBL蛋白濃度將研究對象分成三組，高水平組YA／YA；低水平組YA／XA，YA／YB，XA／XA；極低水平組XA／YB，YB／YB。巨細(xì)胞病毒感染兒童中高水平表達(dá)基因型頻率低于健康組413％VS60％P0007047，而低水平基因型頻率高于健康組529％VS295％P0001，2068。MBL濃度比較顯示高水平組急性期MBL濃度升高顯著P005，而低水平和極低水平組急性期和恢復(fù)期無明顯差別P009P089。結(jié)論MBL基因多態(tài)性導(dǎo)致的MBL水平低下與兒童HCMV感染相關(guān)，提示MBL對兒童巨細(xì)胞病毒感染有一定的保護(hù)作用。

簡介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV是嚴(yán)重危害人類公共健康的世界性問題。在我國，HBV攜帶者約占人口總數(shù)的10％，現(xiàn)患慢性乙型肝炎約3000萬人。HBV的感染不僅能夠引起急、慢性病毒性肝炎，而且部分感染者會發(fā)生肝硬化和肝細(xì)胞癌。病毒的基因變異與逃避機(jī)體免疫應(yīng)答、出現(xiàn)耐藥性、改變致病性和引起疾病流行等密切相關(guān)，研究病毒的基因變異對防治HBV感染有重要意義。乙型肝炎病毒S基因編碼的HBSAG是當(dāng)前乙肝疫苗的主要成分，也是HBV感染診斷的重要依據(jù)。抗HBS抗體可用來預(yù)防肝移植后HBV的再感染和母嬰垂直感染，但這有賴于HBSAG與抗HBS抗體之間的相互作用。當(dāng)HBSAG抗原性發(fā)生改變可直接影響HBV感染后的診斷和治療。目前所知，S基因突變發(fā)生率最高的部位是表面抗原中第145位氨基酸基因NT587G→A的甘氨酸→精氨酸的突變G145R。這種新的變異株可導(dǎo)致疫苗免疫失敗、肝臟移植后HBV再感染和母嬰垂直傳播等，給乙肝防治帶來了新的問題?，F(xiàn)有HBSAG診斷試劑對G145R突變株感染病例的靈敏度不高，經(jīng)常會有漏檢案例導(dǎo)致誤診和血源性HBV傳播。本論文研究從一份獻(xiàn)血員血清中分離到一株G145R突變的HBV病毒X119，設(shè)計S區(qū)引物從中擴(kuò)增出S基因，利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行變異型表面抗原119S的大規(guī)模表達(dá)。通過液相色譜和CSCL平衡梯度離心等手段對目的蛋白進(jìn)行純化，獲得純化的119S經(jīng)透射電鏡觀察證明其可自發(fā)組裝成病毒樣顆粒。為考察表達(dá)的重組抗原的免疫原性，本研究用純化后的119S抗原免疫小鼠，結(jié)果經(jīng)119S免疫的小鼠產(chǎn)生了針對119S強(qiáng)烈的特異性免疫應(yīng)答，而陰性對照組則無特異抗體產(chǎn)生，證明顆粒性的119S蛋白具有良好的免疫原性，可見重組桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)生產(chǎn)的突變型SAG有望作為新乙肝疫苗的組成成分以提供對G145R突變株的保護(hù)。對純化蛋白的抗原性分析發(fā)現(xiàn)其與野生型SAG對構(gòu)象型單抗反應(yīng)性差異顯著，表明兩者在構(gòu)象上有很大不同，導(dǎo)致其對部分現(xiàn)有檢測試劑的敏感度不高而易被漏檢，利用基因工程重組抗原作為開發(fā)新檢測試劑的篩選原料有望提高檢測試劑對突變型HBV的檢出率。

簡介：TIM3TCELLIMMUNOGLOBULINMUCINDOMAINCONTAMINGMOLECULE3T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白分子3是新近發(fā)現(xiàn)的免疫調(diào)節(jié)分子，特異表達(dá)于分化的TH1細(xì)胞，參與TH1負(fù)調(diào)控和免疫耐受形成，在多種免疫性疾病發(fā)生中發(fā)揮重要作用，阻斷其表達(dá)可緩解TH2應(yīng)答引起的過敏性疾病，是多種免疫性疾病的潛在治療靶標(biāo)，引起國內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。但TIM3研究尚存在諸多問題未能解決，尤其是其表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究尚屬空白。本研究分三部分內(nèi)容初步研究正常人PBMCTIM3的表達(dá)模式；克隆具有特異啟動子活性的基因片段，構(gòu)建人TIM3啟動子報告質(zhì)粒；構(gòu)建TIM3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究TIM3表達(dá)調(diào)控機(jī)制及探索利用TIM3進(jìn)行疾病治療的可行性奠定基礎(chǔ)。第一部分正常人PBMCTIM3表達(dá)模式的初步研究研究目的檢測經(jīng)絲裂原刺激的人外周血淋巴細(xì)胞TIM3的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究TIM3表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供實驗?zāi)Ｐ汀Ｑ芯糠椒ǚ蛛x人PBMC，貼壁法去除單核細(xì)胞后，分別以PHA、LPS刺激懸浮的淋巴細(xì)胞，24H后抽提細(xì)胞總RNA，RTPCR檢測TIM3的表達(dá)。未刺激淋巴細(xì)胞作對照。研究結(jié)果RTPCR檢測顯示PHA刺激的人外周血淋巴細(xì)胞TIM3表達(dá)上調(diào)，而LPS刺激的不表達(dá)TIM3，提示處于活化、非極化的T細(xì)胞就開始表達(dá)該分子。結(jié)論及意義本部分建立了可供作為研究TIM3表達(dá)調(diào)控的細(xì)胞模型，為進(jìn)一步深入研究TIM3表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供實驗基礎(chǔ)。第二部分人TIM3啟動子的克隆及其活性的初步研究研究目的構(gòu)建人TIM3啟動子螢火蟲熒光素酶報告質(zhì)粒并分析其活性，為進(jìn)一步研究ITIM3特異表達(dá)于THL細(xì)胞的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。研究方法1人TIM3啟動子區(qū)的預(yù)測利用在線MATLNSPECT軟件對人TIM3基因5′端2500～202段進(jìn)行啟動子區(qū)預(yù)測。2TIM3P1與而TIM3P2PCR擴(kuò)增選定長2325BP的2083～242段，并依據(jù)該段單SACI酶切位點，分TIM3PL2083～838和而TIM33P2948～242兩部分克隆。設(shè)計針對TIM3P1和TIM3P2的特異性引物，以人基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。3含不同長度人TIM3基因5′端片段報告質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定TIM3P1PCR產(chǎn)物，TA克隆入PGEMT，測序正確后，亞克隆入PGL3BASIC相應(yīng)酶切位點構(gòu)建PGL3TIM3PL。TIM3P2PCR產(chǎn)物，經(jīng)SACI、XHOI雙酶切、回收后，插入PGL3BASIC多克隆位點MCS構(gòu)建PGL3TIM3P2。亦經(jīng)測序鑒定。為增強(qiáng)所構(gòu)建報告質(zhì)粒的啟動子活性，設(shè)計在上述陽性PGL3TIM3P2中引入SV40增強(qiáng)子序列構(gòu)建ENHANCERTIM3P2，經(jīng)雙酶切鑒定。4RTPCR檢測細(xì)胞系內(nèi)源性TIM3的表達(dá)收集對數(shù)生長期RAW2647、B16及COS75X105，TRIZOL法抽提細(xì)胞總RNA并行RTPCR檢測。5報告質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染將上述構(gòu)建的報告質(zhì)粒及PGL3BASICN性對照分別與PRLTK內(nèi)參照瞬時共轉(zhuǎn)染RAW2647、B16和COS7詳見附圖表第二部分，48H收集細(xì)胞，對細(xì)胞粗提液進(jìn)行雙熒光素酶分析。6雙熒光素酶分析按雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒說明書將細(xì)胞裂解后與底物混合，用熒光計數(shù)儀檢測所構(gòu)建報告質(zhì)粒中螢火蟲熒光素酶活性M1與PRLTK中海腎熒光素酶活性M2，M1M2的比值即為目的片段的相對活性。每種質(zhì)粒設(shè)2復(fù)孔，同一轉(zhuǎn)染實驗至少重復(fù)3次。7TIM3P1與TIM3P2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點TFBSS分析同樣利用在線MATLNSPECT軟件分析TIM3P1與TIM3P2中可能存在的TFBSS。研究結(jié)果1人TIM3啟動子區(qū)的預(yù)測分析顯示2500～202段存在多個TATABOX、CAATBOX及多個重要TFBSS，可能具有啟動子活性。2成功構(gòu)建人TIM3啟動子螢火蟲熒光素酶報告質(zhì)粒測序鑒定證實PGL3TIM3P1、PGL3TIM3P2構(gòu)建成功；酶切鑒定證實ENHANCERTIM3P2構(gòu)建成功。3不同細(xì)胞系內(nèi)源性TIM3的表達(dá)RTPCR檢測顯示RAW2647和B16表達(dá)內(nèi)源性TIM3，而COS7不表達(dá)。4報告質(zhì)粒啟動子活性的驗證雙熒光素酶分析證實PGL3TIM3P1與PGL3TIM3P2均具有較弱的啟動子活性，其中，PGL3TIM3P2相對活性約是PGL3BASIC空載體的2倍，且啟動子活性具有細(xì)胞特異性；引入增強(qiáng)子的ENHAUCERTIM3P2啟動子活性明顯升高。5TFBSS分析結(jié)果顯示TIM3P1含有下列TFBSS①1個CMYB、LK1、YYLYMYANG1，陰陽1、GATA3GATABINDINGFACT3和CHOP；②2個FOXK2、HNF3HEPATOCYTENUCLEARFACT3，肝細(xì)胞核因子3；③6個TATABOX；TIM3P2含有下列TFBSS①1個RFX1、P53、GATA3、NFATNUCLEARFACTOFACTIVATEDTCELLS，活化T細(xì)胞核因子和CDECHRCELLCYCLEDEPENDENTELEMENT，細(xì)胞周期依賴性元件；CELLCYCLEGENESHOMOLOGYREGION，細(xì)胞周期基因同源區(qū)；②2個MZFLMYELOIDZINCFINGERPROTEIN1；③3個YY1；④5個TATABOX。結(jié)論及意義本部分成功構(gòu)建了含人TIM3啟動子的螢火蟲熒光素酶報告質(zhì)粒和帶有增強(qiáng)子序列的報告質(zhì)粒，為進(jìn)一步研究TIM3表達(dá)調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。鑒于TIM3在免疫應(yīng)答中的重要作用，深入研究其表達(dá)調(diào)控將具有重要的理論意義和良好的應(yīng)用前景。第三部分人TIM3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的構(gòu)建研究目的構(gòu)建人TIM3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究TIM3表達(dá)調(diào)控機(jī)制、探索利用TIM3治療疾病的可行性奠定基礎(chǔ)。研究方法設(shè)計針對人TIM3MRNA的特異性引物，以HTIM3PGEMT為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。產(chǎn)物克隆入逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體PLNCX2的HINDⅢ、NOTI位點，構(gòu)建PLNCX2TIM3。經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定正確后，轉(zhuǎn)染PT67細(xì)胞，48H抽提總RNA并RTPCR檢測TIM3的表達(dá)。PT67空細(xì)胞和PLNCX2空載體轉(zhuǎn)染的PT67細(xì)胞作對照。研究結(jié)果PCR、酶切及測序鑒定證實重組載體PLNCX2TIM3構(gòu)建成功；RTPCR顯示PLNCX2TIM3在包裝細(xì)胞PT67中可有效表達(dá)TIM3。結(jié)論及意義成功構(gòu)建了有效表達(dá)人TIM3的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究TIM3表達(dá)調(diào)控機(jī)制及探索TIM3過表達(dá)治療疾病的可行性奠定基礎(chǔ)。

簡介：廣西中醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文黃芪注射液對輕度血管性認(rèn)知障礙的影響研究生林琳導(dǎo)師唐農(nóng)教授院系（部所）第一臨床醫(yī)學(xué)院專業(yè)中醫(yī)內(nèi)科學(xué)研究方向中醫(yī)藥防治老年病的研究完成日期2009年05月20日學(xué)校代碼10600學(xué)號20062009目錄中文摘要1英文摘要3引言6正文81臨床資料及方法811診斷標(biāo)準(zhǔn)812納入標(biāo)準(zhǔn)913排除標(biāo)準(zhǔn)1014剔除和脫落標(biāo)準(zhǔn)1015終止試驗標(biāo)準(zhǔn)1016一般資料1117觀察方法1118統(tǒng)計方法142結(jié)果1421參與者數(shù)量分析1422治療前后臨床總療效評定1423治療前后認(rèn)知功能評分1424治療前后中醫(yī)臨床癥候療效積分比較1525治療前后血脂、C反應(yīng)蛋白比較1526治療前后胰島素抵抗比較1627治療前后P300潛伏期和波幅的比較1628安全性評價163討論1631中醫(yī)對MVCI的病因病機(jī)認(rèn)識概述1732現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對VCI的認(rèn)識21

簡介：背景與目的鼻咽癌是我國華南地區(qū)的常見腫瘤，素有“廣東瘤”之稱。廣東省每年新發(fā)病例約5000例。放射治療是主要的治療手段，早期患者5年生存率達(dá)90％而晚期患者5年生存率僅為58％。大量資料顯示EB病毒和鼻咽癌密切相關(guān)。目前常用與EB病毒相關(guān)的VCAIGA、EAIGA進(jìn)行早期診斷、監(jiān)測療效、判斷預(yù)后等，然而這兩項指標(biāo)對鼻咽癌療效評價的意義不大。因此，尋找新的分子學(xué)方面的指標(biāo)來指導(dǎo)臨床治療對改善鼻咽癌的療效有較大的臨床意義。本研究旨在探討EBVDNA在鼻咽癌診斷、療效監(jiān)測方面的意義。材料與方法12006年11月至2007年5月在我科住院的經(jīng)病理證實的初診鼻咽癌患者共113例。對其中的61例誘導(dǎo)化療加放療者在治療前，誘導(dǎo)化療后，放療36GY，治療結(jié)束各抽血一次，檢測血漿EBVDNA、VCAIGA和EAIGA。對其中的52例單純放療者在治療前，放療36GY，治療結(jié)束各抽血一次，檢測血漿EBVDNA、VCAIGA和EAIGA。并在抽血的當(dāng)天對患者進(jìn)行鼻咽電子鏡檢查和體查，判斷治療效果。另外收集健康體檢者84例。抽血檢測血漿EBVDNA、VCAIGA和EAIGA。22006年11月至2007年11月期間，在我院就診的鼻咽癌治療后患者149例，包括遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者60例，局部復(fù)發(fā)者29例和隨訪2年以上的無瘤生存者60例。以上患者均經(jīng)臨床、影像學(xué)資料或病理證實。上述患者抽血檢測血漿EBVDNA、VCAIGA和EAIGA。其中并對16例轉(zhuǎn)移患者在每2個療程化療后抽血并采用影像學(xué)檢查評價療效。3血漿EBVDNA檢測采用熒光定量PCR法，血漿VCAIGA、EAIGA抗體檢測采用免疫酶法。4初診113例患者中，61例誘導(dǎo)化療加放療，52例單純放療。誘導(dǎo)化療方案均為2程PF方案。放射治療采用CO60Γ線或直線加速器的6～8MV高能X線常規(guī)外照射，照射區(qū)域包括鼻咽原發(fā)灶、顱底及頸部淋巴引流區(qū)，鼻咽原發(fā)灶劑量為68～74GY，頸轉(zhuǎn)移灶劑量60～64GY，預(yù)防劑量50GY。常規(guī)分割連續(xù)照射。16例轉(zhuǎn)移患者行6個療程化療，化療方案為PF、TPF、TP。5所有的實驗數(shù)據(jù)在SPSS130統(tǒng)計軟件包上進(jìn)行統(tǒng)計分析。中位數(shù)的比較采用非參數(shù)檢驗，樣本率構(gòu)成比的比較采用卡方檢驗。采用雙側(cè)檢驗，P＜005認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果初診鼻咽癌患者中EBVDNA的陽性率為80％90113，中位拷貝數(shù)為34200拷貝ML，健康對照人群中陽性率為24％284，中位拷貝數(shù)為0拷貝ML，兩組比較有顯著性差異P0000。對EBVDNA與VCAIGA的ROC曲線進(jìn)行比較，結(jié)果顯示VCAIGA的曲線下面積大于EBVDNA。當(dāng)兩者特異度一致時976％，VCAIGA與EBVDNA的敏感度為735％和80％。取兩者特異度相同位置處976％的診斷界點，EBVDNA拷貝數(shù)≥1000COPIESML，VCAIGA＞80。當(dāng)兩者之一達(dá)到診斷標(biāo)準(zhǔn)時，即為陽性。此時兩者聯(lián)合診斷的敏感度為94％106113，特異度為94％8184。放療后轉(zhuǎn)移患者、復(fù)發(fā)患者以及持續(xù)緩解者EBVDNA的中位拷貝數(shù)分別為625000拷貝ML，20600拷貝ML和0拷貝ML，三組比較有顯著性差異P0000。而三組鼻咽癌患者中VCAIGA、EAIGA滴度水平差異無顯著性P＞005。在特異度相同的情況下，EBVDNA診斷轉(zhuǎn)移鼻咽癌的敏感度較復(fù)發(fā)高。經(jīng)ROC曲線分析EBVDNA診斷轉(zhuǎn)移鼻咽癌的價值最大P0000。分析113例初診鼻明癌的血漿EBVDNA拷貝數(shù)與臨床的關(guān)系時顯示，不同的N分期以及臨床分期EBVDNA拷貝數(shù)有顯著性差異P0000；P0000，隨著N分期以及臨床分期的增高，EBVDNA拷貝數(shù)升高。而性別、年齡、病理類型、T分期間EBVDNA拷貝數(shù)比較差異無顯著性P＞005。對29例復(fù)發(fā)患者進(jìn)行類似分析，結(jié)果顯示復(fù)發(fā)鼻咽癌不同RT、RTNM分期之間EBVDNA拷貝數(shù)差異有顯著性P0049；P0048，隨著RT、RTNM分期的增高，EBVDNA拷貝數(shù)升高。對52例初治單純放療患者進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)隨著放療的進(jìn)行血漿EBVDNA拷貝數(shù)逐漸降低P0000。放療前、放療36GY、放療結(jié)束時分別為12950拷貝ML四分位數(shù)間距為054575拷貝ML，0拷貝ML四分位數(shù)間距為00拷貝ML，0拷貝ML四分位數(shù)間距為00拷貝ML。而VCAIGA、EAIGA滴度無明顯變化P＞005。對61例誘導(dǎo)化療加放療者進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，隨著化、放療的進(jìn)行血漿EBVDNA拷貝數(shù)逐漸降低P0000。治療前，誘導(dǎo)化療后、放療36GY、放療結(jié)束時分別為75400拷貝ML四分位數(shù)間距為81803810007拷貝ML，0拷貝ML四分位數(shù)間距為029600拷貝ML，0拷貝ML四分位數(shù)間距為00拷貝ML，0拷貝ML四分位數(shù)間距為00拷貝ML。而VCAIGA、EAIGA滴度無明顯變化P＞005。113例初診鼻咽癌患者中，治療結(jié)束時全消95例，殘留18例。95例全消者中，治療后血漿EBVDNA陰性88例，陽性7例。而在殘留的18例患者中，放療后血漿EBVDNA陰性10例，陽性8例，兩者比較有顯著性差異X21499P＜005。分析治療后EBVDNA的拷貝數(shù)與近期療效的關(guān)系，結(jié)果顯示全消組和殘留組治療后EBVDNA的拷貝數(shù)分別為0拷貝ML和1455拷貝ML，兩組比較有顯著性差異F22754，P0000。對轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者進(jìn)行療效監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，當(dāng)EBVDNA水平下降者，療效評價與EBVDNA水平變化基本一致，一致率達(dá)80％以上。對升高者，療效評價與EBVDNA水平變化高度一致，一致率達(dá)100％。而對于EBVDNA水平一直為0者，或在治療過程中降為0者，療效評價與EBVDNA水平變化不一致。比較患者的療效評價與EBVDNA取對數(shù)化療前后的變化的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)PR、SD、PD三組患者的均值分別為463，225，323，三組比較有顯著性差異P0025。結(jié)論1血漿EBVDNA檢測可作為鼻咽癌診斷的一項血清學(xué)指標(biāo)，與VCAIGA聯(lián)合應(yīng)用可提高鼻咽癌診斷的準(zhǔn)確性。2血漿EBVDNA檢測可作為鼻咽癌治療后是否出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的一項診斷指標(biāo)，而VCAIGA、EAIGA對轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)鼻咽癌的診斷意義不大。3血漿EBVDNA能反映鼻咽癌的腫瘤負(fù)荷，可作為臨床分期的一項指標(biāo)。也可作為評價鼻咽癌治療效果的一項指標(biāo)，而VCMGA、EAIGA對鼻咽癌治療效果的監(jiān)測價值不大。

簡介：點擊查看更多A型流感病毒M2e單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的乙型肝炎病毒感染慢加急性肝衰竭HBVASSOCIATEDACUTEONCHRONICLIVERFAILURE，HBVACLF病情危重、發(fā)展迅速、病死率高達(dá)70～80％，是傳染病死亡的重要疾病之一。其發(fā)病機(jī)制不是十分明確。目前研究多集中于“免疫正性調(diào)控”的研究，對于負(fù)性調(diào)節(jié)分子在HBVACLF中的表達(dá)情況未見相關(guān)報道。本文研究了HBVACLF過程中患者體內(nèi)T細(xì)胞亞群上免疫共刺激負(fù)性調(diào)控分子程序性死亡分子PROGRAMMEDDEATH1，PD1及其配體PDL1的表達(dá)變化以及與病情預(yù)后之間的關(guān)系，試圖闡明HBVACLF過程中PD1PDL1表達(dá)對病情的變化影響。方法選擇60例HBVACLF患者、15例肝炎肝硬化乙型活動性患者及15例健康人為研究對象實驗選擇的病例ALT或AST均大于正常值的兩倍。臨床數(shù)據(jù)的收集實時定量PCR檢測患者的HBVDNA，收集臨床檢驗數(shù)據(jù)血常規(guī)、肝功、凝血酶原活動度等指標(biāo)；根據(jù)入組時病情分為早、中、晚三期，根據(jù)疾病不同轉(zhuǎn)歸分為好轉(zhuǎn)、無效、死亡。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測外周血CD8T細(xì)胞上相關(guān)分子1T淋巴細(xì)胞上的PD1、CD28、CD95、CD45RA、CCR7；2CD14細(xì)胞上的PDL1；3CD8細(xì)胞上的穿孔素、顆粒酶A、顆粒酶B、CD107A。應(yīng)用CBACYTOMETRICBEADARRAY試劑盒動態(tài)檢測外周血細(xì)胞因子，包括白介素2INTERLEUKIN2，IL2、IL4、IL6、IL10，腫瘤壞死因子ΑTUMOURNECROSISFACTΑ，TNFΑ、干擾素ΓINTERFERONΓ，IFNΓ等。取10例HBVACLF患者的肝臟行免疫組化染色分析，另各取10例肝炎肝硬化患者、6例健康人作為對照組。了解ACLF、肝炎肝硬化患者肝臟上CD4T細(xì)胞、CD8T細(xì)胞、PD1及其配體PDL1的表達(dá)情況。結(jié)果HBVACLF患者CD8T細(xì)胞上PD1表達(dá)上調(diào)1731％±1128％，較肝硬化患者1118％±538％和健康人596％±419％顯著增高；根據(jù)MELD評分分組，MELD≥20分組患者PD1陽性表達(dá)率2098％±1228％比結(jié)論PD1在HBVACLF中外周血CD8T細(xì)胞上表達(dá)上調(diào)，且與病情嚴(yán)重程度成正比。HBVACLF匯管區(qū)及炎癥區(qū)PD1及肝細(xì)胞上PDL1表達(dá)上調(diào)；PD1PDL1的升高可能與免疫功能紊亂、病情加重有關(guān)。HBVACLF過程中效應(yīng)性CD8T細(xì)胞上PD1表達(dá)率較其它CD8T細(xì)胞低，PD1對該類細(xì)胞的功能抑制及促凋亡作用減弱，可能與病情的加重有關(guān)。

簡介：分類號密級學(xué)校代碼學(xué)號10165200710247遣掌童可筢大學(xué)碩士學(xué)位論文≥，氍乳遼元認(rèn)知干預(yù)技術(shù)對中重度抑郁干預(yù)效果研究作者姓名學(xué)科、專業(yè)研究方向?qū)熜彰靷?yīng)用心理學(xué)2010年5月學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人承諾所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所取得的研究成果。論文中除特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含他人和其他機(jī)構(gòu)已經(jīng)撰寫或發(fā)表過的研究成果，其他同志的研究成果對本人的啟示和所提供的幫助，均已在論文中做了明確的聲明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名學(xué)位論文版權(quán)的使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解遼寧師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，及學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交復(fù)印件或磁盤，允許論文被查閱和借閱。本文授權(quán)遼寧師范大學(xué)，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，并且本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后使用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名2；綏雹勺JF1，、／舟指導(dǎo)教師簽名名日期2D／

簡介：分類號VDC博士學(xué)位論文密級慢病毒介導(dǎo)的NETRIN一1小發(fā)夾狀RNA在視網(wǎng)膜新生血管形成中的調(diào)控作用INHIBITORYEFFECTOFIENTIVIRALMEDIATEDSMALLHAIRPINRNATARGETINGNETRIN一1ONRETINALNEOVASCULARIZATION作者姓名學(xué)科專業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師論文答辯日期H”‘劉矯連眼科學(xué)湘雅醫(yī)院夏曉波教授許惠卓副教授答辯委員會主席淞中南大學(xué)2011年6月刪”明㈣㈣本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名童L§垂日期蘭L年魚月竺日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即；學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。㈣名椎翮簽翹一幽必